Bufalin is a traditional oriental medicines which induces apoptosis in some lines of human tumor cells. It constitutes the major digoxin-like immunoreactive component of Chan Su, obtained from the skin and parotid venom glands of toads. Bufalin is cardioactive C-24 steroids that exhibits a variety of biological activities, such as cardiotonic, anaesthetic, blood pressure stimulatory, respiratory and antineoplastic effects. In terms of its anti-tumor activity, bufalin has been demonstrated to inhibit the growth of tumors, such as endometrial and ovarian cancers. This commentary introduces biologic and therapeutic effects of bufalin in treating some cancers. The compound is able to mediate inhibition of cell growth, cell cycle arrest, apoptosis, and expression of genes related to the malignant phenotype in human cancer cells.
Malashetty, Vijaykumar B.;I., Sangamma;A., Sharanabasappa;Patil, Saraswati B.
Advances in Traditional Medicine
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제4권2호
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pp.77-81
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2004
Petroleum ether, benzene and alcohol extracts of seeds of C. juncea administered orally at the dose level of 25mg/100g body weight to adult female mice for 30 days, resulted in irregular estrous cycle with prolonged estrus and metaestrus and reduced diestrus and proestrus during the experimental period. Histological studies of the ovary indicate increases in the number of atretic follicles but decreases in the number of developing follicles, Graafian follicles and corpora lutea. The total cholesterol content of the ovary is increased, whereas ascorbic acid content is decreased. The weight of the uterus and its micrometric measurement in all experimental mice are increased significantly. The alcoholic extracts showed estrogenic activity in immature mice by early opening of the vagina, premature cornification of the vaginal epithilium and increases in uterine weight. However, alcohol extract of seeds of C. juncea was more effective in causing these changes compared to other extracts. After subjecting to preliminary phytochemical screenings alcohol extract showed positive; test for alkaloids, steroids, glycosides, flavones, phenols and tannins.
본인은 생후 24일 된 쥐에 PMS와 더불어 estradiol을 처리하면 排卵이 예정보다 24시간 앞당겨 일어남을 보고한 바 있다. 본 실험은 이의 계속 연구로 腦下垂體前葉에서 분비되는 preovulatory LH surge가 PMS 처리 후 51$\\sim$56시간에 일어남을 보았다. 그러나 estradiol을 PMS와 동시에 처리하면 예정보다 24시간 단축된다. 卵巢를 제거한 쥐에 0, 24, 48시간에 $2.5\\sim 40\\mu g$의 estradiol을 처리하면 51$\\sim$56시간에 腦下垂體의 LH가 증가되지 않는다. 그러나 estradiol을 처리하고 이어 48시간에 1mg의 progesterone을 처리하면 卵巢를 제거한 쥐에서도 腦下垂體의 LH level은 증가된다. 본 실험의 결과로 estradiol처리가 PMS로 유도한 排卵을 24시간 앞당기는 사실은 estrogen이 progesterone과 길항작용으로 腦下垂體에서 LH분비를 24시간 앞당겨 일으키고, 따라서 排卵도 24시간 단축되는 것이라고 생각된다.
Two modalities of gonadotropin secretion, pulsatile gonadotropin and preovulatory gonadotropin surge, have been identified in the mammals. Pulsatile gonadotropin secretion is modulated by the pulsatile pattern of GnRH release and complex ovarian steroid feedback actions. The neural mechansim that regulates the pulsatile release of GnRH in the hypothalamus is called "GnRH pulse generator". Ovarian steroids, estradiol and progesterone, appear to exert thier feedback effects both directly on the pituitary to modulate gonadotropin release and on a hypothalamic site to modulate GnRH release; estradiol primarily affects the amplitude while progesterone decreases the frequency of the pulsatile GnRH. Steroid hormones are known to affect catecholamine transmission in brain. MBH-POA is richly innervated by NE systems and close apposition of NE terminals and GnRH cell bodies occurs in the MBH as well as in the POA. NE normally facilitates pulsatile LH release by acting through ${\alpha}-receptor$ mechanism. However, precise nature of facilitative role of NE transmission in maintaining pulsatile LH has not been clearly understood. Close apposition of DA and GnRH terminals in ME might permit DA to influence GnRH release. Action of DA transmission probably is mediated by axo-axonic contacts between GnRH and DA fibers in the ME. Dopamine transmission does not normally regulate pulsatile LH release, but under certain conditions, increased DA transmission inhibit LH pulse. Endogenous opioid acts to suppress the secretion of GnRH into hypophysial portal circulation, thereby inhibiting gonadotropin secretion. However, an interaction between endogenenous opioid peptides and gonadotropin release is a complex one which involves ovarian hormones as well. LH secretion appears to be most suppressed by endogenenous opioids during the luteal phase, at a time of elevated progesterone secretion. The arcuate nucleus contains not only cell bodies for GnRH and ${\beta}-endorphin$ but also a dense aborization of fibers suggesting that GnRH release is changed by the interactions between GnRH and ${\beta}-endorphin$ cell bodies within the arcuate nucleus. The frequency and amplitude of pulsatile LH release seem to be increased during the preovulatory gonadotropin surge. Estradiol exerts positive feedback action on the hypothalamo-pituitary axis to trigger preovulatory LH surge. GnRH is also crucial hormonal stimulus for preovulatory LH surge. It is unlikely, however, that increased secretion of GnRH during the preovulatory gonadotropin surge represents an obligatory neural signal for generation of the LH discharge in primates including human. Modulation of preovulatory LH surge by catecholamines has been studied almost exclusively in rats. NE and E may be involved in distinct way to accumulate GnRH in the MBH and its release into the hypophysial portal system during the critical period for LH surge on proestrus in rats. However, the mechanisms whereby augmented adrenergic transmission may facilitate the formation and accumulation of GnRH in the ME-ARC nerve terminals before the LH surge have not been clearly understood.
포유동물의 생식주기중 대부분의 여포는 폐쇄되고 극히 일부만 배란된다. 돼지의 폐쇄여포액내에는 다량의 androgen이 존재하며 이들이 폐쇄의 한 요인이라는 결과로 보아 폐쇄여포액내에는 다량의 활성적 testosterone이 존재할 것으로 추론하고 이를 정량하고져 하였다. 사람의 여포액내 progesterone, testosterone, estradiol, androstenedion과 dihydrotestosterone의 농도를 본 연구에서 정립된 섬광면역측정법 및 방사면역측정법으로 측정한 결과는 다음과 같았다. 사람의 폐쇄된 여표액내 T,A.DHT의 농도는 소, 중, 대 여포 공히 정상의 여포액내 이들 스테로이드의 농도보다 현저히 증가되어 있었다. 그러나 소여포의 경우 폐쇄여포액내 A의 농도는 정상에 비하여 현저히 낮은 농도를 나타내었다. 반면 P와 E의 폐쇄여포액내 농도는 정상에 비해 현저히 낮은 농도를 나타내었다. 돼지의 소, 중, 대의 폐쇄여포액내 P의 농도는 정상과 통계적으로 유의한 차이가 없었다. T의 경우 역시 각 각의 크기를 가진 폐쇄여포액에서 정상 여포액 농도보다 높게 나타났으나 통계적인 유의성은 없었다. 그러나 E의 경우는 폐쇄여포액내 농도가 정상에 비해 편저히 낮게 나타났다. 한편 여포액내 활성적 T의 점유율은 혈청에 비해 현저히 높았다. 즉 bioavailable T는 정상과 폐쇄여포액내에서 각기 90% 이상을 나타내었다. 위의 결과를 종합해 볼 때 동물중, 크기에 따라 폐쇄의 요인은 다른 것으로 사료되며 폐쇄여포액내 활성적 androgen의 농도는 정상에 비해 높고 또한 E의 농도는 현저히 낮은 것으로 나타났다. 또한 여포액내 대부분의 스테로이드는 활성형의 상태로 존재하며 활성적 T는 폐쇄여포의 판정에 주요기준이 될 수 있을 것으로 판단된다.
농어의 난성숙과 배란유도를 위한 C하(21)-스테로이드와 HCG의 효능 비교실험이 in vitro에서 이루어졌다. 분리된 난모세포를 대상으로 17${\alpha}$-hydroxy, 20${\beta}$-dihydroprogesterone(17${\alpha}$20${\beta}$OHP), 17${\alpha}$-hydroxy, 20${\beta}$-dihydroprogesterone(17${\alpha}$20${\beta}$OHP : 5~100ng/ml)와 HCG(5~500IU/ml)를 사용하여 관찰한 난성숙 유도효과, 즉 GVM(germinal vesicle migration)과 GVBD(germinal vesicle breakdown)를 보면, 5ng/ml 농도의 17${\alpha}$20${\beta}$OHP와 17${\alpha}$20${\beta}$OHP를 제외한 모든 실험군에서의 반응은 대조군보다 효과가 있는 것으로 나타났으며, 특히 17${\alpha}$20${\beta}$OHP 50ng/ml 농도에서 가장 높은 성숙 유도효과를 보였다. GVBD 유도효과에 대한 17${\alpha}$20${\beta}$OHP(50ng/ml), HCG(50IU/ml) 그리고 이들 호르몬을 혼합처리한 17${\alpha}$20${\beta}$OHP+HCG에서는 혼합처리한 실험군이 가장 높은 반응을 보여 이들의 상호 보완적 작용을 관찰할 수 있었다. 난소조직을 대상으로 HCG와 17${\alpha}$20${\beta}$OHP를 사용하여 in vitro에서 농어의 배란유도효과를 관찰한 결과 사용한 모든 농도(17${\alpha}$20${\beta}$OHP : 1~1000ng/ml, HCG : 1~500IU/ml)에서 배란반응을 보였다. 특히 저농도 50ng/ml 또는 50IU/ml 이하로 처리하는 것이 더 효율적인 것으로 나타났다. 또한 HCG 처리가 17${\alpha}$20${\beta}$OHP보다 배란 반응에 더 민감하게 작용하는 것으로 생각된다.
내분비 교란물질들이 연안 어류의 정상적인 성적 발달을 위협할 수 있다는 사실은 잘 알려져 있지만, 해산 어종에 대한 이러한 위협을 파악하는 데 이용할 수 있는 적절한 시험 어종은 아직 개발되지 못했다. 그 이유 중의 하나는 성분화 초기에 어류의 생식소가 외형으로나 조직학적으로 암수 구분이 불분명한 경우가 많기 때문이다. 본 연구에서는 조피 볼락 Sebastes schlegeli의 자연 성비, 생식소 구조, 그리고 외인성 성스테로이드 호르몬에 의한 성분화 교란 여부 등을 조사하여 이 종이 시험 어종으로 개발될 수 있는 지를 조사하였다. 1년생 조피볼락 240마리의 생식소를 조사한 결과, 이들의 성비(암수 비율)는 통계학적으로 1:1을 벗어나지 않았으며, 암컷은 유백색의 두터운 생식소를, 수컷은 검은색의 가느다란 생식소를 가지고 있었다. 성분화 시기의 조피볼락 치어를 $estradiol-17\;{\beta}(E_2)$ 또는 $17\;{\alpha}-methyltestosterone$ (MT)으로 처리하여 성분화 교란 여부를 조사한 결과, $E_2$ 처리는 93%의 암컷 유도율을 보였으나, MT 처리의 경우 수컷은 53%였고, 38%가 암수의 생식소 구조를 모두 갖는 intersex로 나타났다. 본 연구에 의하면 조피볼락은 미성숙 시기에도 암수 생식소의 형태가 뚜렷이 다르고, 외인성 성스테로이드 호르몬에 의해 뚜렷한 성분화 교란 현상이 초래되어 시험 어종으로 개발될 수 있는 가능성 있다.
본 연구는 생식주기중 폐쇄여포액내에서 생물학적, 면역학적 특성을 나타내는 GTH 의 변화를 조사하고 steroid hormone과의 상관관계를 조사하며 국부조절인자로서 의 GTH의 역 활을 조사하고자 하였다. 가임기간중 215개의 여포와 IVF과정에서 185개의 여포를 얻어 여포액내 GTH의 생물학적 또는 면역학적 활성을 측정하였다. Bioactive LH(bLH)는 생쥐의 Leydig cell-testosterone production assay, bFSH는 흰쥐의 Sertoli cell aromatase assay로 측정 하였 다. Immunological GTH(iLH , iFSH) 는 MaiaClone RIA , Delfia kits를 사용하였다. 여포액내 iLH, iFSH , ihCG 는 hyperstimulation에 의해 형성된 여포의 크기와는 무관하였다. 또 hMG, huFSH 의 처리와도 상관성이 없었다. T의 농도가 높은 여포액내의 iFSH는 현저히 낮았으며 E, P 가 고농도인 여포의 ihCG 양은 현저히 낮았다. 과배란이 유도된 난소의 여포액내 iLH는 LH specific RIA로 측정시 3mIU/ml 이하이었다. 생식주기중 여포액내 bLH, bFSH는 배란기에 현저히 증가 하였다. 혈청내 GTH B/I ratio는 엘정한 반면 여포액내 LH,FSH의 생물학적, 면역학적 활성은 미수정란을 가지거나 폐쇄된 여포내의 활성보다 현저하게 높았다. 위의 결과로 보아 여포액내 생식소자극호르온은 면역학적활성보다 높은 생물학적 활성을 가지며, 생리적 현상의 지표가 된다고 추론된다. 또한 steroid, bGTH는 여포의 선택, 폐쇄를 구분하는 지표로 사용가능하며, 여포가 폐쇄될때 여포액내 B/I ratio가 현저히 낮아지는 것으로 보아 GTH의 활성이 감소되는 것으로 판단된다.
본인 등은 참개구리를 이용하여 여포의 스테로이드 생성에 관한 two-cell type model을 제시한바 있다. 본 연구에서는 이 model이 북방산 개구리 (R. dybowskii)에도 적용 되는지와 협막세포층에 minor pathway(P 5$\longrightarrow$17$\alpha$-OHP$_4$)가 있는지의 여부를 조사하였다. 이를 위하여 북방산 개구리 난소로부터 intact follicles (IFs), granulosa cell enclosed-oocytes (GcEOs), theca/epithelium (THEP) layers 및 난구세포가 포함되어 있지 않은 순수한 theca/epithelium (P-THEP) layers를 미세해부기술로 분리해 내었다. 이들 여포 조직들은 전구 스테로이드나 개구리 뇌ㅏ수체추출물(FPH)이 포함되어 있는 배양액에서 6시간 배양한 후, 각 여포조직 의해 전환된 산물스테로이드의 양을 방사면역측정법으로 조사하였다.외부에서 첨가된 P 5와 P$_4$는 GcEOs와 IFs에 의하여 효율적으로 P$_4$혹은 17 $\alpha$-OHP$_4$로 전환되었으나 THEP에 의해서는 전환되지 않았다. 더욱이 순수한 협막층(P-THEP)에 의해서는 전환이 거의 이루어지지 않았다. 17 $\alpha$-OHP$_4$및 testosterone 역시 GCEOs와 IFs에 의해서 estradiol (E$_2$) 및 androstenedione (AD)으로 각각 전환되었으나 THEP에 위해서는 정환되지 않았다. 반면에, AD는 THEP과 IFs에 의해서만 T로 전환되어졌으며, AD를 제외한 다른 전구스테로이드들은 THEP 의해서도 T로 전환되지 못했다. 이러한 결과들은 P$_4$, 17 $\alpha$-OHP$_4$AD 및 E$_2$는 주로 난구세포에서 생성되고, T는 주로 협막세포에서 생성되며 T나 E$_2$의 효율적인 생성에 이들 두 세포의 협조가 필요하다는 것을 말해준다. 이는 참개구리에서 제시한 two-cell type model이 북방산개구리 여포의 스테로이드 생성과정에도 적용되며 협막 세포층에는 minor pathway ( P5 to 17$\alpha$-OHP$_4$)가 존재하지 않음을 또한 보여주고 있다.
흰쥐의 뇌하수체 전엽배양세포에 gonadotropin-releasing hormone (GnRH)을 처리하였을 때 시간이 경과함에 따라 GnRH농도에 비례하여 luteinizing hormone(LH)의 분비가 증가하였으며, 2시간까지 급격하게 증가하였다. 또한 GnRH를 처리하였을때 ${\alpha}$ subunit mRNA의 농도는 증가하지 않았으나 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 GnRH 농도에 비례하여 증가하였으며, GnRH 처리후 6시간 이후부터 유의하게 증가하였다. 특히 최종농도가 $2{\times}10^{-10}M$이 되도록 GnRH를 처리하였을 때 $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도가 2.7배 정도 최대로 증가하였다. 또한 estradiol을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 증가하지 않았으나 progesterone을 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 유의하게 증가하였다. 또한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 estradiol및 progesterone을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 난소호르몬 농도에 의존적으로 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도가 증가하였다. Estradiol에 의한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 증가양상은 estrogen 길항제인 LY117018에 의하여 유의하게 감소하였다. 이러한 결과로 보아 GnRH는 steady state $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도에 영향을 미치므로써 LH분비 및 LH subunit 생합성을 조절하며 난소호르몬은 뇌하수체에 직접 작용하여 LH분비 및 LH subunit 생합성에 영향을 주는 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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