FaeG is the key factor in the infection process of K88ad enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) fimbrial adhesin. In an attempt to determine the possibility of expressing recombinant FaeG with immunogenicity for a new safe and high-production vaccine in E. coli, we constructed the recombinant strain, BL21 (DE3+K88), which harbors an expression vector with a DNA fragment of faeG, without a signal peptide. Results of 15% SDS-polyacrylamide slab gel analysis showed that FaeG can be stably over-expressed in BL21 (DE3+K88) as inclusion bodies without FaeE. Immunoglobulin G (IgG) and M (IgM) responses in pregnant pigs, with boost injections of the purified recombinant FaeG, were detected 4 weeks later in the sera and colostrum. An in vitro villius-adhesion assay verified that the elicited antibodies in the sera of vaccinated pigs were capable of preventing the adhesion of K88ad ETEC to porcine intestinal receptors. The protective effect on the mortality rates of suckling piglets born to vaccinated mothers was also observed one week after oral challenge with the virulent ETEC strain, $C_{83907}$ (K88ad, $CT^+,\;ST^+$). The results of this study proved that the adhesin of proteinaceous bacterial fimbriae or pili could be overexpressed in engineered E. coli strains, with protective immune responses to the pathogen.
Objectives : The purpose of this study was to evaluate on the antimicrobial effect on the periodontal pathogens and anti-inflammatory effect of Artemisiae Iwayomogii Herba. Artemisiae Iwayomogii Herba has been used for treating as Artemisiae Capilaris Herba in Korea. Methods : Artemisiae Iwayomogii Herba was prepared by extracting medicinal herb with water. We investigated antimicrobial activity by the minimun inhibitory concentration (MIC) test. We also investigated inhibition of IL-$1{\beta}$-induced collagenase-l(MMP-l), stromelysin-1(MMP-3), interleukin-6 gene expression in human gingival fibroblasts. Results : The antimicrobial effect of Artemisiae Iwayomogii Herba was evaluated with MIC against periodontopathogens; Porphyromonas gingivalis 2561, W50, A7A1-28, 9-14K-1, Prevotella intermedia28, and Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4, MICs of Artemisiae Iwayomogii Herba were 0.156 mg/ml, 0.625 mg/ml, 0.313 mg/ml, 1.25 mg/ml, 10 mg/ml and 10 mg/ml. The anti-inflammatory effect of Artemisiae Iwayomogii Herba was evaluated with Influence of herbs on the IL-$1{\beta}$-induced expression of MMP-1, MMP-3, interleukin-6, IL-$1{\beta}$ increased MMP-1, MMP-3, interleukin-6 mRNA levels. Artemisiae Iwayomogii Herba significantly inhibited IL-$1{\beta}$-induced MMP-1, MMP-3, interleukin-6 gene expressions in a dose-dependent manner. Conclusions : These results suggested that Artemisiae Iwayomogii Herba might reduce the excessive proteolytic capacity of the gingival fibroblast during inflammation and could be developed a new drug in periodontitis.
This study developed probabilistic models to describe Listeria monocytogenes growth responses in meat products with low concentrations of NaNO2 and NaCl. A five-strain mixture of L. monocytogenes was inoculated in NBYE (nutrient broth plus 0.6% yeast extract) supplemented with NaNO2 (0-141 ppm) and NaCl (0-1.75%). The inoculated samples were then stored under aerobic and anaerobic conditions at 4, 7, 10, 12, and 15℃ for up to 60 d. Growth response data [growth (1) or no growth (0)] for each combination were determined by turbidity. The growth response data were analyzed using logistic regression to predict the growth probability of L. monocytogenes as a function of NaNO2 and NaCl. The model performance was validated with the observed growth responses. The effect of an obvious NaNO2 and NaCl combination was not observed under aerobic storage condition, but the antimicrobial effect of NaNO2 on the inhibition of L. monocytogenes growth generally increased as NaCl concentration increased under anaerobic condition, especially at 7-10℃. A single application of NaNO2 or NaCl significantly (p<0.05) inhibited L. monocytogenes growth at 4-15℃, but the combination of NaNO2 or NaCl more effectively (p<0.05) inhibited L. monocytogenes growth than single application of either compound under anaerobic condition. Validation results showed 92% agreement between predicted and observed growth response data. These results indicate that the developed model is useful in predicting L. monocytogenes growth response at low concentrations of NaNO2 and NaCl, and the antilisterial effect of NaNO2 increased by NaCl under anaerobic condition.
소아의 구강으로부터 분리한 비수용성 글루캔 형성 억제세균의 Streptococcus mutans 치태 형성에 대한 억제 정도와 분리 세균속의 타액내 농도가 타액내 전체 세균의 농도에 미치는 영향을 본 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 구강으로부터 분리한 비수용성 글루캔 형성 억제세균의 효과를 비커 와이어 검사로 본 결과, 교정용 와이어상에 형성된 치태의 무게가 Streptococcus mutans 단독배양시 152mg에서 Enterococcus durans, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus oralis와의 혼합배양시 각각 4mg, 78mg, 72mg으로 감소되었다. Streptococcus mutans의 생균수는 단독배양시 ml당 $3.6{\times}10^8$ 개에서 Enterococcus durans, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus oralis와의 혼합배양시 각각 ml당 $1.4{\times}10^6,\;5.6{\times}10^6,\;3.8{\times}10^6$으로 감소하였다. 소아로부터 얻은 타액을 BHI agar에 접종하였을 때의 생균수는 $4.8{\times}10^6$에서 $1.3{\times}10^9$이었으나, 이러한 전체 세균의 농도는 타액내 Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus mutans를 억제하는 Streptococcus의 농도와 관련이 없었다. 이상의 결과를 종합하면 소아의 구강으로부터 분리한 비수용성 글루캔 형성 억제 세균의 Streptococcus mutans 치태형성에 대한 억제는 Streptococcus mutans의 증식을 억제하여 일어났으며, Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus mutans를 억제하는 Streptococcus의 구강내 농도는 구강 즉 타액내 전체 세균의 농도에 영향을 미치지 않았다.
To document that effects of hyperbaric oxygen(HBO) and ${\alpha}-tocopherol$ on full-thickness skin grafts in rat, we performed full-thickness skin grafts bilaterally on each rats. The HBO-treated rats were received HBO twice daily for 90 minutes at 2 ATA. Surgical control rats were not treated with HBO. ${\alpha}-tocopherol$ treated rats were received the agent via oral gastric tube daily for 3 days preoperative and a fourth dose 1 to 2 hours postoperative. HBO plus ${\alpha}-tocopherol$ treated rats were received HBO and ${\alpha}-tocopherol$ as mentioned above. Biopsy specimens were taken from each rat at the time of grafting and on days 2, 4, 7, 10, 14, 21, and 28, then were processed for tissue-concentration of total glutathione(GSHt), oxidized/reduced glutathione level, and thiobarbituric acid-reactive substance(TBARS) levels. The percentage of viable graft on day 10 ranged from 67 to 93%, and was not significantly different among the each other groups. The percentage of viable graft were, however, higher in HBO plus ${\alpha}-tocopherol$ treated rats(78.6%) than in HBO alone treated rats(59.1%), ${\alpha}-tocopherol$ alone treated rats(66.7%) and surgical control rats(58.2%). TBARS concentration had a significant increase from preoperative concentration at day 2, and peak concentration at day 4(p<0.01). Concentration then decreased to preoperative concentration at day 28. GSHt concentration of free skin graft had a similar patteren of change in four groups and decreased significantly from preoperative concentration at day 2, returning to preoperative concentration by day 7(surgical control, HBO-treated, and ${\alpha}-tocopherol-treated$, alone) and 28(HBO plus ${\alpha}-tocopherol-treated$). Percentage of the concentration of reduced glutathione decreased in surgical control, HBO-treated and, ${\alpha}-tocopherol-treated$(p<0.05), and HBO plus ${\alpha}-tocopherol-treared$(p<0.01) on day 7 after surgery, whereas the concentration of oxidized increased significantly in HBO-treated(p<0.05), ${\alpha}-tocopherol-treated$(p<0.05), and HBO plus ${\alpha}-tocopherol-treated$(p<0.01).
한국사람으로부터 치마우식증의 원인규능로 알려진 S. mutans를 분리, 동정하였고, 이들과 기존의 실험실균주간의 생리 및 생화학적 특성과 이들이 합성하는 다당류의 구성당을 비교하였다. 분리배지인 MS. MST와 선택배지인 MSP. MSPT. MSB 그리고 MSBT에서 모두 생장하고, mannitol dehydrogenase를 분비하는 균주 108, 110 및 120이 S. mutans로 분리, 동정되었다. 분리균주와 기존의 실험실균주간의 생리 및 생화학적 특성을 비교한 결과, 본 연구에서 분리한 3균주 모두 기존의 실험실균주와는 달리 hippuraterktnqnsgogyth를 가지고 있었다. 또한 균주 108은 lactose 발효 능력이, 균주 110은 sorbitol, lactose, inulin, melibiose, raffinose 발효능력이 , 균주 120은 inulin. raffinose 발효능력이 없는 것으로 나타나 기존의 실험 실균주와는 물론 이들 각각도 다른 생리 및 생화학적 특성을 나타내었다. 상기의 결과와 같이 분리균주 108, 110 그리고 120은 생리, 생화학적 특성 및 자당으로부터 합성되는 glucan의 양에 있어서도 기존의 실험실균주와 다르게 나타나 이들을 각각 한국형 S. mutans KHC108, KHCH10, KHC120이라 명명하였다.
치과위생사의 감염관리 실천도를 측정하는 척도를 개발하고 타당화하기 위해 254명의 치과위생사를 대상으로 설문조사를 실시하였다. 예비척도는 리커트 4점 척도로서 21개의 문항으로 구성되었으며, 신뢰도 분석, 탐색요인분석, 확인요인분석을 통해 척도의 차원과 항목을 축소하고 신뢰도와 타당도를 검증하였다. 1. 탐색요인분석과 신뢰도 분석을 통해 4개 요인과 12개의 항목으로 척도를 수정하였다. 수정된 척도의 요인은 '예방접종 및 정기검진'(2항목), '기구 소독 및 멸균'(3항목), '손위생 관리'(4항목), '개인 보호'(3항목)가 추출되었으며, 전체분산 중 58.296%를 설명하고 있다. 예비척도 중 '환경 관리' 요인이 제외되었다. 2. 확인요인분석을 통해 한 문항을 제외하였다. 최종적인 측정모형은 4개 요인과 11개 항목으로 구성되었으며, 모형의 적합도는 $x^2$= 79.593(df = 38, 0 = 0.000), RMR= 0.045, GFI = 0.940, CFI = 0.904, AGFI = 0.896, NFI = 0.837, TLI = 0.861, RMSEA = 0.67로 나타나 대체로 기준을 충족하였다. 모든 측정변수의 요인부하량은 유의하였으나(p < 0.001), 세 변수만이 0.7 이상으로 나타났다. 평균분산추출값과 구성개념신뢰도는 대체로 기준을 충족하지 못하였으나, 모든 요인의 평균분산추출값은 각 요인간 상관관계제곱값 보다 크게 나타났다. 3. 요인분석을 통해 추출한 네 개의 요인이 치과위생사의 '감염관리 실천률 인식'에 미치는 영향을 알아보기 위해 네 요인을 독립변수로 선정하고 실천률 인식을 종속변수로 선정하여 회귀분석을 실시하였다. $R^2$는 0.304, 수정된 $R^2$은 0.431, F = 25.813, p = 0.000이며, '손위생 관리'를 제외한 세 변수의 회귀계수는 통계적으로 유의하게 나타났다.
Cytokines expressed specifically in leukocytes subsets and in activated cells, which are involved in chemotaxis and activation of leukocytes, are recently defined as chemokines. Macrophage inflammatory $protein-1{\alpha}(MIP-1{\alpha})$ and $MIP-1{\beta}$ are members of C-C chemokine subfamily which produces wide immunomodulatory, proinflammatory, and hematopoietic modulatory actions. We have studied their gene expression by using Northern blot analysis in various blood cells such as cytolytic T lymphocyte(CTL), helper T lymphocyte(HTL), macrophage, and B lymphocyte. Resting CTL line CTLL-R8 expressed $MIP-1{\alpha}$ mRNA which was downregulated by ConA stimulation. Both of resting and ConA stimulated HTL line Hut78 and Jurkat did not express $MIP-1{\alpha}$ mRNA. There was detectable $MIP-1{\alpha}$ transcript in HTL hybridoma 2B4.11 which was a little upstimulated by ConA stimulation. B cell line 230, and macrophage cell line RAW264.7 and WR19M.1 showed distinct $MIP-1{\alpha}$ message which were induced after LPS stimulation. Expression pattern of $MIP-1{\beta}$ in all cell lines or cell were almost identical to that of $MIP-1{\alpha}$. Also strategies employed to identify and characterize the biological functions was preceded by receptor cloning to trace the shorcut to the final goal of cytokine research. For the cloning of $MIP-1{\alpha}$ receptor(R), we used synthetic oligonucleotides of transmembrane(T) conserved sequences of already cloned human(h) IL-8-R, and performed reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) amplification using murine(m) macrophage cell line mRNA. Among 5RT-PCR products, we isolated a homologous cDNA with hIL-8-R which were shown to be putative mIL-8-R cDNA.
Human polymorphonuclear leukocytes(PMN) are the most numerous host cell in periodontal pockets and their presumed role is to form a protective barrier between the bacteria and periodontal tissues. Microbial component LPS activates macrophages to produce $IL-1{\beta}$, $MIP-1{\alpha}$, $-1{\beta}$, $TNF-{\alpha}$ and IL-6, etc. These cytokines have autocrine function to the macrophages, and paracrine function to other cell such as PMN and affect them to produce some biological functions. In the present study, human PMN were tested for the expression of $IL-1{\beta}$ and $MIP-1{\alpha}$ mRNA. Also we performed the receptor binding assay and in vitro assay for the antimicrobial action of HL-60 cell to determine whether HL-60 can replace the peripheral PMN in analyzing the biological functions. PMN were stimulated with $IL-1{\beta}$, TPA, $MIP-1{\alpha}$, LPS, IL-2 and total cytoplasmic RNA were extracted for the northern blot analysis. In order to determine the induction kinetics of $IL-1{\beta}$ or $MIP-1{\alpha}$ mRNA expression, cells were stimulated for 0,1,2,3 hours. We found peak expression of $IL-1{\beta}$ mRNA after 1hr of induction with $IL-1{\beta}$, LPS and after 2hr of induction with TPA. $MIP-l{\alpha}$ also induced but a scarce $IL-l{\beta}$ message from PMN. In contrast to the $IL-l{\beta}$ mRNA expression, $MIP-1{\alpha}$ were not induced from PMN in any culture conditions. Receptors for $MIP-1{\alpha}$ were identified on dibutyryl cyclic AMP(dbcAMP)-treated HL-60 as well as peripheral PMN. dbcAMP treatment significantly enhanced antimicrobial action of undifferentiated HL-60 cell. MIP-1 further increased enhancing effect of dbcAMP. $IL-1{\beta}$, to a lesser extent, also increased dbcAMP-induced enhancing effect of antimicrobial action of HL-60 cell.
The long term success of periodontal treatment is dependent upon the effectiveness of the main-tenance care program after active treatment. The purpose of this study was to evaluate whether nutraceutical containing PRF-K2 as natural product from plant and seaweed has beneficial effects on clinical parameters, gingival crevicular fluid (GCF) volume and GCF cytokine levels during main- tenance phase after periodontal treatment. Among the generally healthy and non-smoking. moderate to severe chronic periodontitis patients during maintenance phase in Department of Periodontics, Chonnam National University Hospital, twenty eight patients took nutraceutical containing PRF-K2 (Oscotec Inc. Cheonan, Korea) for 3 months as experimental group and sixteen patients received only maintenance care as control group. Clinical examination and GCF collection were performed at baseline, 1, 2 and 3 months of experiment. Total amounts and concentrations of GCF IL-1{\beta}, IL-1ra and $PGE_2$ were evaluated using ELISA kit. In probing pocket depth, experimental group showed the tendency of more reduction than control group after 3 months of experiment. Sulcus bleeding index (SBI) and GCF volume were significantly decreased in experimental group(p<0.05), whereas they were increased in control group. GCF IL-1{\beta} level tended to decrease in both experimental and control group and IL-1ra concentration tended to increase in experimental group and to decrease in control group. IL-1ra/IL-1{\beta} ratio tended to increase in experimental group and to decrease in control group during experimental period. GCF $PGE_2$ amount did not show any change in experimental group and tended to increase in control group. These results suggest that nutraceutical supplement which contain PRF-K2 could improve perio-dontal condition during maintenance phase after periodontal therapy.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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