The purpose of this study was to develop Peptoniphilus mikwangii-specific quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) primers based on the 16S ribosomal RNA (16S rDNA) gene. The specificity of the primers was determined by conventional PCR using 29 strains of 27 oral bacterial species including P. mikwangii. The sensitivity of the primers was determined by qPCR using the purified genomic DNA of P. mikwangii KCOM $1628^T$ (40 ng to 4 fg). The data showed that the qPCR primers (RTB134-F4/RTB134-R4) could detect P. mikwangii strains exclusively and as little as 40 fg of the genomic DNA of P. mikwangii KCOM $1628^T$. These results suggest that the developed qPCR primer pair can be useful for detecting P. mikwangii in epidemiological studies of oral bacterial infectious diseases.
Kim, Seo-Yoon;Noh, Ki-Pyo;Kim, Hak-Kyun;Kim, Su-Gwan;Kook, oong-Ki;Park, Soon-Nang;Kim, Min-Jung;Kim, Jae-Jin;Kim, Eun-Seok
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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v.35
no.5
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pp.312-315
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2009
Objective: It is important to sterilize oral cavity with antibacterial agent before surgery for preventing infection. The object of this study was to compare the effect on reduction of salivary bacterial counts according to applied time when povidone-iodine (PVI) and chlorhexidine gluconate (CHX), most broadly used materials in dentistry, were applied intraorally before the surgery. Methods: Sixty subjects were divided into 6 groups. PVI and CHX were applied in each group for 1, 2 and 3 minutes, respectively. Then salivary microbacteria taken before and after applying the materials were cultured using 5% sheep blood agar plate. Results: There was significant difference in reduction of microbacteria in both PVI and CHX and the effect did not show differences depending on time. When applied for a minute, PVI showed somewhat higher reduction rate than CHX, but in the other groups, there was no difference in reduction rate. Conclusion: We found that there was no significant difference in sterilization ability of PVI and CHX in all groups in this study. Therefore, both agents would get sufficient effect when applied for a minute.
The rapid detection of bacteria in the oral cavity, its species identification, and bacterial count determination are important to diagnose oral diseases caused by pathogenic bacteria. The existing clinical microbial diagnosis methods are time-consuming as they involve observing patients' samples under a microscope or culturing and confirming bacteria using polymerase chain reaction (PCR) kits, making the process complex. Therefore, it is required to analyze the development status of substances and systems that can rapidly detect and analyze pathogenic microorganisms in the oral cavity. With research advancements, a close relationship between oral and systemic diseases has been identified, making it crucial to identify the changes in the oral cavity bacterial composition. Additionally, an early and accurate diagnosis is essential for better prognosis in periodontal disease. However, most periodontal disease-causing pathogens are anaerobic bacteria, which are difficult to identify using conventional bacterial culture methods. Further, the existing PCR method takes a long time to detect and involves complicated stages. Therefore, to address these challenges, the concept of point-of-care (PoC) has emerged, leading to the study and implementation of various chair-side test methods. This study aims to investigate the different PoC diagnostic methods introduced thus far for identifying pathogenic microorganisms in the oral cavity. These are classified into three categories: 1) microbiological tests, 2) microchemical tests, and 3) genetic tests. The microbiological tests are used to determine the presence or absence of representative causative bacteria of periodontal diseases, such as A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, and T. denticola. However, the quantitative analysis remains impossible, and detecting pathogens other than the specific ones is challenging. The microchemical tests determine the activity of inflammation or disease by measuring the levels of biomarkers present in the oral cavity. Although this diagnostic method is based on increase in the specific biomarkers proportional to inflammation or disease progression in the oral cavity, its commercialization is limited due to low sensitivity and specificity. The genetic tests are based on the concept that differences in disease vulnerability and treatment response are caused by the patient's DNA predisposition. Specifically, the IL-1 gene is used in such tests. PoC diagnostic methods developed to date serve as supplementary diagnostic methods and tools for patient education, in addition to existing diagnostic methods, although they have limitations in diagnosing oral diseases alone. Research on various PoC test methods that can analyze and manage the oral cavity bacterial composition is expected to become more active, aligning with the shift from treatment-oriented to prevention-oriented approaches in healthcare.
To obtain primary idea on oral bacterium species that are generally present in periodotally healthy Koreans, the oral bacterial flora in the saliva of four periodontally healthy Koreans at different ages (5, 32, 35, 65) was investigated in this study. For this investigation, 16S rRNA gene clone libraries were generated from the saliva of the four healthy Koreans, and 50 clones were randomly selected from each saliva clone library and sequenced. Totally, 37 different kinds of bacterial 16S rRNA gene sequences were identified based on sequence homology search through GenBank database. The 37 kinds of saliva clone sequences were classified to 14 genera and 2 uncultured and 1 unidentified bacteria. Among the 14 identified genera, Streptococcus, Prevotella, and Veillollella were common genera, and Streptococcus was dominant genus that accounted for 7 different species. Among the seven Streptococcus species, S. salivarius appeared as the most common species. More numbers of species belonging to the genera Streptococcus and Prevotella was present in saliva from ages 32 and 35. While saliva from ages 5 and 65 showed more numbers of species belonging to the genera Rothia, including potential pathogenic species. Overall, saliva of a young child and a senior showed higher bacterial diversity than that of young adults.
Bacteremia occurs in a wide variety of clinical procedures in oral cavity. Reduction of the number of causative microorganisms of infective endocarditis in oral cavity by local administration of antimicrobial agents decreases the magnitude of bacteremia and possibility of infective endocarditis. The effects of chlorhexidine on Streptococcus sanguis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii, Staphylococcus aureus, and Staphylococcus epidermis were investigated by measurement of turbidity. The effects of 0.1% chlorhexidine gargling for 7 days on oral bacterial flora, total streptococci, S. mutans, S. aureus, and S. epidermis in whole saliv a of 7 healthy human subjects, were investigated by measurement of Colony Forming Units (CFU). The obtained results were as follows : 1. Chlorhexidine showed significant antimicrobial effects on Streptococcus snaguis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii, Staphylococcus aureus, and Staphylococcus epidermis. However, the effects on S. sanguis and S. gordonii were not apparent compared with other microorganisms. 2. Oral gargling of 0.1% chlorhexidine decreased the CFU values of normal oral bacterial flora, total streptococci, S. mutans, S. aureus, and S. epidermis in whole saliva. The antimicrobial effects were significant after 4 days of chlorhexidine gargling. 3. Local antimicrobial administration in addition to systemic antibiotic prophylaxis can be highly recommended as an effective adjunct regimen for prevention of infective endocarditis.
Minimal inhibitory concentration (MIC) is the lowest concentration of antibiotics that inhibits the visible growth of bacteria. It has been reported that sub-MIC of antibiotics may result in morphological alterations, along with the biochemical and physiological changes in bacteria. The purpose of this study was to examine morphological changes of Aggregatibacter actinomycetemcomitans, after the treatment with sub-MIC metronidazole and penicillin. The bacterial morphology was observed with scanning electron microscope, after incubating with sub-MIC antibiotics. The length of A. actinomycetemcomitans was increased after the incubation with sub-MIC metronidazole and penicillin. Sub-MIC metronidazole and penicillin inhibited bacterial division and induced long filaments. Our study showed that metronidazole and penicillin can induce the morphological changes in A. actinomycetemcomitans.
This study aimed to develop Lautropia mirabilis-specific quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) primers based on the sequence of DNA-directed RNA polymerase subunit beta gene. The PrimerSelect program was used in designing of the qPCR primers, RTLam-F4 and RTLam-R3. The specificity of the qPCR primers were performed by conventional PCR with 37 strains of 37 oral bacterial species, including L. mirabilis. The sensitivity of the primers was determined by qPCR with the serial dilution of purified genomic DNA of L. mirabilis KCOM 3484, ranged from 4 ng to 4 fg. The data showed that the qPCR primers could detect only L. mirabilis strains and as little as 40 fg of genome DNA of L. mirabilis KCOM 3484. These results indicate that this qPCR primer pair (RTLam-F4/RTLam-R3) may be useful for species-specific detection of L. mirabilis in epidemiological studies of oral bacterial infectious diseases such as periodontal disease.
Chrysanthemum indicum is widely used to treat immune-related and infectious disorders in East Asia. C. indicum flower oil contains 1,8-cineole, germacrene D, camphor, ${\alpha}$-cadinol, camphene, pinocarvone, ${\beta}$-caryophyllene, 3-cyclohexen- 1-ol, and ${\gamma}$-curcumene. We evaluated the safety of C. indicum flower oil by conducting acute oral toxicity, bone marrow micronucleus, and bacterial reverse mutation tests. Mortality, clinical signs and gross findings of mice were measured for 15 days after the oral single gavage administration of C. indicum flower oil. There were no mortality and clinical signs of toxicity at 2,000 mg/kg body weight/day of C. indicum flower oil throughout the 15 day period. Micronucleated erythrocyte cell counts for all treated groups were not significantly different between test and control groups. Levels of 15.63~500 ${\mu}g$ C. indicum flower oil/plate did not induce mutagenicity in S. Typhimurium and E. coli, with or without the introduction of a metabolic activation system. These results indicate that ingesting C. indicum flower oil produces no acute oral toxicity, bone marrow micronucleus, and bacterial reverse mutation.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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v.45
no.2
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pp.68-75
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2019
Chronic recurrent multifocal osteomyelitis (CRMO) is one of the most severe form of chronic non-bacterial osteomyelitis (CNO), which could result in bone and related tissue damage. This autoinflammatory bone disorder (ABD) is very difficult for its clinical diagnosis because of no diagnostic criteria or biomarkers. CRMO in the jaw must be suspected in the differential diagnosis of chronic and recurrent bone pain in the jaw, and a bone biopsy should be considered in chronic and relapsing bone pain with swelling that is unresponsive to treatment. The early diagnosis of CRMO in the jaw will prevent unnecessary and prolonged antibiotic usage or unnecessary surgical intervention. The updated researches for the identification of genetic and molecular alterations in CNO/CRMO should be studied more for its correct pathophysiological causes and proper treatment guidelines. Although our trial consisted of reporting items from Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA), there are very few articles of randomized controlled trials. This article was summarized based on the author's diverse clinical experiences. This paper reviews the clinical presentation of CNO/CRMO with its own pathogenesis, epidemiology, recent research studies, and general medications. Treatment and monitoring of the jaw are essential for the clear diagnosis and management of CNO/CRMO patients in the field of dentistry and maxillofacial surgery.
Song, Won sub;Lee, Jae-Kwan;Park, Se Hwan;Um, Heung-Sik;Lee, Si Young;Chang, Beom-Seok
Journal of Periodontal and Implant Science
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v.47
no.4
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pp.219-230
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2017
Purpose: The purpose of this study was to compare the characteristics of single- and dualspecies in vitro oral biofilms made by static and dynamic methods. Methods: Hydroxyapatite (HA) disks, 12.7 mm in diameter and 3 mm thick, were coated with processed saliva for 4 hours. The disks were divided into a static method group and a dynamic method group. The disks treated with a static method were cultured in 12-well plates, and the disks in the dynamic method group were cultured in a Center for Disease Control and Prevention (CDC) biofilm reactor for 72 hours. In the single- and dual-species biofilms, Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalis were used, and the amount of adhering bacteria, proportions of species, and bacterial reduction of chlorhexidine were examined. Bacterial adhesion was examined with scanning electron microscopy (SEM) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). Results: Compared with the biofilms made using the static method, the biofilms made using the dynamic method had significantly lower amounts of adhering and looser bacterial accumulation in SEM and CLSM images. The proportion of P. gingivalis was higher in the dynamic method group than in the static method group; however, the difference was not statistically significant. Furthermore, the biofilm thickness and bacterial reduction by chlorhexidine showed no significant differences between the 2 methods. Conclusions: When used to reproduce periodontal biofilms composed of F. nucleatum and P. gingivalis, the dynamic method (CDC biofilm reactor) formed looser biofilms containing fewer bacteria than the well plate. However, this difference did not influence the thickness of the biofilms or the activity of chlorhexidine. Therefore, both methods are useful for mimicking periodontitis-associated oral biofilms.
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