• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제47권3호
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• pp.180-185
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• 2020

Objective: Tyrosine phosphorylation is an essential process in many biological systems, including the male reproductive system. The presence of tyrosine-phosphorylated (TyrPho) proteins has been well documented in male reproductive organs, but research in fertile females is still limited. Methods: The ovary, oviduct, and uterus of adult female Sprague-Dawley rats in the estrus phase were used to localize TyrPho proteins using an immunohistochemical technique. These proteins were separated and their expression patterns were examined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blot analysis, respectively. Results: TyrPho proteins were localized in the cytoplasm of the oocyte except the antral fluid; in the granulosa cells, theca cells, and stromal cells of the ovary; at the apical surface of oviductal epithelial cells; and in the basal epithelium and submucosa of the uterine wall. Moreover, we found that 72-, 43-, and 28-kDa TyrPho proteins were localized in the ovary, while 170-, 55-, and 43-kDa proteins were localized in the oviduct. In the uterus, we detected four major bands, corresponding to 61-, 55-, 54-, and 43-kDa TyrPho proteins. Conclusion: Given that these TyrPho proteins were found in major reproductive organs in the estrus phase, these proteins may play important roles in female fertility.

• 한국동물생명공학회지
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• 제38권2호
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• pp.54-61
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• 2023

Background: Germ cells undergo towards male or female pathways to produce spermatozoa or oocyte respectively which is essential for sexual reproduction. Mesenchymal stem cells (MSCs) have the potential of trans-differentiation to the multiple cell lineages. Methods: Herein, rat MSCs were isolated from bone marrow and characterized by their morphological features, expression of MSC surface markers, and in vitro differentiation capability. Results: Thereafter, we induced these cells only by retinoic acid supplementation in MSC medium and, could able to show that bone marrow derived MSCs are capable to trans-differentiate into male germ cell-like cells in vitro. We characterized these cells by morphological changes, the expressions of germ cell specific markers by immunophenotyping and molecular biology tools. Further, we quantified these differentiated cells. Conclusions: This study suggests that only Retinoic acid in culture medium could induce bone marrow MSCs to differentiate germ cell-like cells in vitro. This basic method of germ cell generation might be helpful in the prospective applications of this technology.

• 한국어류학회지
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• 제26권3호
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• pp.179-184
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• 2014

잉어과(Pisces, Cyprinidae)에 속하는 멸종위기 어류인 돌상어 Gobiobotia brevibarba의 난막미세구조 및 난자형성과정을 광학현미경과 주사전자현미경을 이용하여 관찰하였다. 2014년 5월의 돌상어 난소 내에는 다양한 발생단계의 생식세포들이 관찰되었다. 난모세포들의 상대면적은 성숙란(74.5%), 난황물질이 형성되는 난황구기(16.6%), 난황포기(6.6%), 그리고 미숙한 발달단계인 주변인기(2.3%) 순으로 구성되어 있었다. 주변인기 단계의 세포질은 hematoxylin에 강하게 염색되며, 핵막의 안쪽에는 다수의 인들이 존재하였다. 난황형성물질인 난황포기와 초기 난황구기 단계에서는 여포층과 방사대가 뚜렷하게 형성되기 시작되었으며, 방사대 위에는 미세융모의 난막구조가 더욱 뚜렷해졌다. 난황구기 및 성숙란의 단계에서는 난황구 일부가 융합되면서 강한 호산성을 보였다. 또한 성숙란의 표면에는 깔때기 모양의 난문이 관찰되었으며, $2{\sim}3{\mu}m$ 길이의 미세융모가 일정하게 분포하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제15권3호
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• pp.295-302
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• 2000

The objective of this study was to compare different superovulation treatments using PMSG or PG600$^{ }$ and to determine the optimal time of oocyte recovery after hCG administration. A total of 90 prepubertal Yorkshire x Landrace gilts crossed with Duroc, 6~7 months old and 100~120 kg of body weight, were used. PMSG (1,500 IU/head) or 5~7.5 ml of PG600$^{ }$(400 IU of PMSG and 200 IU of hCG) were administrated subcutaneously, and then 1,000 IU of hCG were administered intramuscularly at 72 hours after PMSG or PG600$^{ }$ injection. At carious time of 44, 46, 48 and 50 hours after hCG injection, superovulated gilts were slaughtered in a local abattoir. Ovaries together with oviducts were excised from the body immediately after slaughtered and transported to laboratory in 39$^{\circ}C$ saline. Ovaries were examined fur the number of corpus hemorrhagicum and unovulated follicles present in the surface of ovary. The unovulated follicles were categorized into small (1~3 mm in diameter) and large (4~8 mm) groups according to their diameter. Oocytes were recovered by flushing both oviducts with micropipette tip (1~100 $\mu$l) attached to a 10-ml disposable syringe. The number of CH on ovary and recovered oocytes at 46, 48 and 50 hr after hCG injection in PG600$^{ }$ treated groups were significantly higher than the other group. Group of phCG 50 hr among PMSG treated groups had a greater number of CH and recovered oocytes(P<0.05). The number of CH on ovary and recovered oocytes at 50 hr after hCG injection in 1$\frac{1}{2}$ vial(7.5 ml) of PG600$^{ }$ treated groups was significantly higher than 1 vial(5 ml) of PG600$^{ }$ treated group(P<0.05). In conclusions, considering a number of corpus hemorrhagicum and recovered oocytes after superovulation in gilts, effective time of oocyte recovery by treatment with PMSG and hCG was post-hCG 50 hr and with PG600$^{ }$ plus hCG was post-hCG 46, 48 and 50 hr. Also, admini-stration of 1$\frac{1}{2}$ vial(7.5 ml) of PG600$^{ }$ treated group had a great number of CH and recovered oocytes.covered oocytes.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제17권5호
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• pp.612-616
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• 2004

This study was carried out to compare the semen characteristics, frozen-thawed sperm viability and testosterone concentration and in vitro fertilization (IVF) and development of in vitro matured pig oocytes between two Yorkshire boars. Semen and blood samples were collected once per week from October to November 2002 from two adult Yorkshire boars at 18 months of age with 170 kg body weight. Sperm were deep frozen in 5 ml maxi-straws with lactose-egg yolk and N-acetyl-D-glucosamine (LEN) diluent and stored in liquid nitrogen. Blood samples were obtained at 10 a.m. by inserting a 21 gauge, hypodermic needle attached to 10 ml syringe into surface veins in the ear. The concentration of testosterone was determined by Competitive Enzyme Immunoassay. Ovaries were collected from prepubertal gilts at a local slaughter house. Cumulus oocyte complexes were aspirated from antral follicles (3 to 6 mm in diameter). The medium used for oocyte maturation was modified TCM 199. After about 22 h of culture, oocytes were cultured without cysteamine and hormones for 22 h at $38.5^{\circ}C$, 5% $CO_2$ in air. For IVF, one frozen 5 ml straw was thawed at $52^{\circ}C$in 40 sec and was diluted with 20 ml Beltsville thawing solution at room temperature. Sperm were washed 2 times in mTLP-PVA and inseminated without preincubation after thawing. Oocytes were inseminated with $2{\times}10^7$/ml sperm concentration. Oocytes were coincubated for 6 h in 500 ${\mu}$l mTBM fertilization medium. At 6 h after IVF, oocytes were transferred into 500 ${\mu}$l NCSU-23 culture medium for further culture of 48 and 144 h. There were no significant differences in the semen volume, motility, normal acrosome morphology and sperm concentration of raw semen between A and B of Yorkshire boar. However, motility and normal acrosome of boar A were higher than those of boar B at 0.5, 2, 3, 4, 5 and 6 h incubations of frozen-thawed sperm. Testosterone concentration (3.75 ng/ml) of boar A was higher than that (2.34 ng/ml) of boar B. The rate of blastocyst formation (15.1%) of boar A was higher than that (10.4%) of boar B. In conclusion, serum testosterone concentration of boar showed very important role for the frozen-thawed sperm viability and the blastocyst formation of pig oocytes matured in vitro.

• 한국수산과학회지
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• 제37권5호
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• pp.385-392
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• 2004

Gonadal development, gametogenesis, reproductive cycle, gonad index, and flesh weight rate of the murex shell (Ocenebra japonica) collected from the rocky intertidal zone of Buan-gun, Jeollabuk-do, Korea were investigated by means of histological method from January to December 2002. O. japonica had separate sexes, and was oviparous. The gonad was widely situated on the surface of the digestive gland located in the rear of the spiral flesh part in the shell. The male penis was located near the two tentacles. The ovary was composed of a number of oogenic follicles, and the testis was composed of several spermatogenic tubules. The size of ripe oocyte was approximately $140{\mu}m$ in diameter. The gonad index (GI) began to increase in March $(33.24{\pm}2.33)$ and reached the maximum in June $(47.77{\pm}1.90)$ Thereafter, the values decreased from July $(45.12{\pm}3.60)$ to October $(19.32{\pm}2.91)$. The flesh weight rate (FWR) began to increase in January $(25.93{\pm}1.32)$ and reached the maxium in May $(31.78{\pm}1.09)$ Thereafter, the values decreased from June $(31.50{\pm}0.66)$ to October $(24.09{\pm}1.60)$. The reproductive cycle could be classified into five successive stages: early active (October to April), late active (January to June), ripe (May to September), spawning (July to September) and recovery (September to February). The reproductive cycle was closely related to the seawater temperature.

• 한국가축번식학회지
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• 제17권4호
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• pp.339-346
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• 1994

정자의 구조와 기능을 이해하기 위해서는 정자세포구성분의 분리가 필요하다. 본 실험은 동결융해된 한우정액에 다양한 물리·화학적 처리를 하여 효과적인 정자세포구성분의 분리방법을 확립하고자 실시하였다. 물리적 분리방법으로는 vortexing 처리, 26 gauge needle 또는 strained 26 gauge needle을 1ml 주사기에 부착시킨 후 반복된 pumping, 동결보존액없이 반복된 동결융해처리등을 시행하였다. 또한, 화학적인 분리를 위해 trypsin, dithiothreitol, sodium dodecylsulfate, mercaptoethanol 등을 사용하였다. 모든 처리구중에서 가장 효과적인 정자두부와 미부의 절단을 strained 26 gauge needle이 부착된 주사기를 사용한 반복된 pumping에 의해 얻어졌다. 이러한 처리에 의해 95∼100%의 높은 정자구성분의 분리가 이루어졌다. 분리된 정자구성분의 두부표면의 보존여부를 알아보기 위해 250g/ml FITC-UEA 1 염색을 실시하였지만 특별한 두부표면변화는 관찰되지 않았다. 다른 물리적 처리방법들도 높은 정자구성분의 분리결과를 보여주었지만, strained 26 gauge needle를 사용한 방법에 비해서는 분리효율, 시간등 여러면에서 비효율적이었다. 화학적 처리에 의한 정자구성분의 분리결과는 물리적 처리에 비해 효과적이지 못했다. 분리된 정자두부와 미부를 각각 회수하기 위해 sucrose 용액을 2M, 1M, 0.5M, 0.25M 순으로 시험관에 넣은 후 1,000rpm에서 15분간 원심분리한 결과, 1M과 2M의 경계부분에 형성된 정자두부층을 얻을 수 있었다. 정자구성분의 효과적이고 간편한 분리방법이 본 실험에 의해 확립되어졌으며, 위의 방법에 의해 분리, 회수된 정자구성분은 생화학적 연구, 난자활성화기작의 이해등 다양한 응용연구의 기초자료로서 이용될 수 있을 것이다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권4호
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• pp.627-633
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• 1997

1995년 11월부터 1996년 10월까지 부산 수영만 인근해역에서 채집된 쭈굴감펭, Scorpaena miestoma의 생식소 구조, 생식세포의 발달 및 생식주기 등이 광학현미경 조직표본을 기초로 연구되었다. 정소의 내부조직상은 다수의 곡정세관으로 구성된다. 각각의 곡정세관은 여러개의 소낭 구조를 가지는데 각 소낭내의 생식세포들은 같은 단계의 발달상태를 보인다. 난소내부는 난소외막으로 부터 시작된 여러장의 난소박판으로 구성되어 있다. 난원세포는 난소박판의 내부상피에서 유래하며, 난모세포로 성장하면서 난소강쪽으로 돌출되어 난병에 의해 난소박판에 연결된다. 생물학적최소형은 암${\cdot}$수 모두 전장 12.5cm로 조사 되었다. 생식소숙도지수는 암 (3.81)${\cdot}$수(0.23) 모두 10월에 연중 최고치를 나타냈다. 암컷의 생식주기는 성장기 ($5\~8$월), 성숙기 ($9\~10$월), 완숙 및 산란기 ($11\~12$월) 그리고 회복 및 휴지기 ($1\~4$월)로 나눌 수 있다. 수컷의 생식주기는 성장기 ($6\~8$월), 성숙기 ($9\~10$월), 완숙 및 방정기 ($11\~l$월) 그리고 회복 및 휴지기 ($2\~5$월)로 나눌 수 있다.

• Applied Microscopy
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• 제37권2호
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• pp.65-72
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• 2007

참붕어의 난자형성과정과 수정란 난막의 미세구조를 광학현미경과 전자현미경으로 관찰한 결과는 다음과 같다. 참붕어에서 난원세포의 세포질은 호염기성이었고 핵막 내에 많은 인들이 분포하고 있었다. 제1난모세포의 경우 난황포가 단지 난세포 가장자리에만 배열되어 있었고 난막의 형성은 관찰되지 않았다. 제2난모세포에서는 난막이 형성되었고 제1난모세포에 비해서 난황포가 점점 핵쪽으로 증식된 경향을 보였다. 발생이 진행됨에 따라서 호염기성 물질들은 점점 감소하는 경향을 보였고 후에 난막주위에만 국한적으로 분포하였으며, 난막의 두께와 난자의 크기는 점점 증가되었다. 또한 성숙란으로 발생이 진행되면서 난황포들은 난황괴로 변화되었다. 참붕어의 수정란은 타원형으로 부착성이었으며 동물극쪽에서 난문이 관찰되었다. 수정란의 난막은 모두 3층으로, 부착성인 외층, 전자밀도가 서로 다른 6층상구조를 가진 중층 및 전자밀도가 높은 내층으로 구성되어 있었으며 난막표면은 부착성 섬유상 구조물로 덮여 있었다. 이상과 같이 참붕어의 난자형성과정은 생식세포의 크기 증가, 난황의 형성과 축적 및 세포질의 호염기성물질 감소로 될 수 있으며 수정란 난막의 미세구조적 특징들은 경골어류의 계통분류학에서 분류형질도 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국수산과학회지
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• 제31권1호
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• pp.8-16
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• 1998

1995년 11월부터 1996년 10월까지 경남 삼천포 인근해역에서 채집된 불볼락의 성숙 및 생식주기를 주로 조직학적 방범에 의해 연구하였다. 난소내부는 난소외막으로부터 시작된 여러겹의 난소박판으로 구성되며 이곳에서 난원세포가 유래한다 난모세포는 성장하면서 난소박판 내부에서 부터 난소강쪽으로 돌출되어 난병에 의해 난소박판에 연결된다. 정소의 내부조직상은 다수의 정세관으로 구성된다. 각각의 정세관은 여러개의 소낭구조를 가지는데 각 소낭내의 생식세포들은 같은 단계의 발달상태를 보인다. 생물학적 최소형은 암컷은 전장 19.5cm, 수컷은 전장 21.5cm이다. 암컷의 생식소중량지수는 3월에 9.56으로 연중 최고치를 나타냈으며, 8월에는 0.15로 최저치를 나타냈다. 수컷의 생식소중량지수는 2월에 0.25로 최고치를 나타냈으며, 7월에는 0.04로 연중 최저치를 나타냈다. 생식주기는 암컷은 성장기 ($10\~11$월), 성숙기 ($12\~2$월), 임신기 (3월), 출산 및 회복기 ($4\~6$월) 그리고 휴지기 ($7\~9$월)로 나눌 수 있다. 수컷의 생식주기는 성장기 ($9\~11$월), 성숙기 ($12\~1$월), 완숙 및 교미기 ($2\~3$월) 그리고 퇴화 및 휴지기 ($4\~8$월)로 나눌 수 있다.