In order to study functional nucleotides in prototype foamy virus (PFV) DNA on specific recognition by PFV integrase (IN), we designed chimeric U5 long terminal repeat (LTR) DNA substrates by exchanging comparative sequences between human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) and PFV U5 LTRs, and investigated the 3'-end processing reactivity using HIV-1 and PFV INs, respectively. HIV-1 IN recognized the nucleotides present in the fifth and sixth positions at the 3'-end of the substrates more specifically than any other nucleotides in the viral DNA. However, PFV IN recognized the eighth and ninth nucleotides as distinctively as the fifth and sixth nucleotides in the reactions. In addition, none of the nucleotides present in the twelfth, sixteenth, seventeenth, eighteenth, nineteenth, and twentieth positions were not differentially recognized by HIV-1 and PFV INs, respectively. Therefore, our results suggest that the functional nucleotides that are specifically recognized by its own IN in the PFV U5 LTR are different from those in the HIV-1 U5 LTR in aspects of the positions and nucleotide sequences. Furthermore, it is proposed that the functional nucleotides related to the specific recognition by retroviral INs are present inside ten nucleotides from the 3'-end of the U5 LTR.
This review provides an overview of dietary nucleotides as an alternative to in-feed antibiotics for weaning pigs. Dietary nucleotides are composed of DNA or RNA molecules and are normally contained in protein-rich feed ingredient, brewer's yeast, yeast extract, and milk. Weaning pigs are suffering from several stresses, such as environmental challenges (i.e. crowding, transportation, and feeding). Such stressors can damage the intestinal epithelium and cause an invasion by Escherichia coli, secondary inflammatory responses, and post weaning diarrhea. To overcome weaning disorder, people often use antibiotics which reduce symptoms and boost growth performance. However, since antibiotics were banned due to concerns of antibiotic resistant bacteria, researchers are studying alternative materials to antibiotics. Dietary nucleotides are one of the alternative materials for replacing antibiotics and can be used in abnormal conditions, such as weaning diarrhea, low digestibility, and disease condition. Nucleotides have substances that have important roles in cell division and cell growth, affecting growth performance, intestinal condition, and immunological effect at the weaning stage. However, nucleotides' composition is very different between sources and this aspect makes it difficult to utilize nucleotides at the weaning stage. Therefore, this review paper focuses on i) the characteristics and functions of dietary nucleotides and ii) the effect of dietary nucleotides on the growth performance and immune system of pigs.
Diphtheria toxin repressor (DtxR) binds to approximately 30 to 35-bp regions containing an interrupted 9-bp inverted repeat within a 19-bp core sequence. The core sequence is fairly conserved and critical for DtxR binding. The flanking regions that are consisted of 5 to 8 more of nucleotides from the core are also required for DtxR binding. The nucleotides in both flanking regions are A-T rich. To examine whether the A-T nucleotides in both flanking regions from the core have significant roles for DtxR binding, a DNA fragment was constructed based on the diphtheria tox promoter/operator, and DNA fragments with substitution of A and T nucleotides In the flanking regions to G and C were also constructed. To assess the effect of these substitutions on binding of DtxR and repressibility by DtxR, $\beta$-galactosidase activity from lacZ fused to the region was assessed. Gel mobility shift of the region by purified DtxR was also examined. The DNA fragments containing the mutations in the flanking regions still exhibited repression and mobility shift with DtxR. The core segment with the mutation is still, therefore, recognized by DtxR. Nonetheless, the results from the assays indicated that the substitution significantly decreased repression of the operator by DtxR in vivo under high-iron condition and decreased binding of DtxR to the operator. These results suggest that A and T nucleotides fur both flanking regions are preferred for the binding of DtxR.
Objective: The aim of this study was to investigate the protective effect of wheat phytase as a structural decomposer of inflammatory nucleotides, extracellular adenosine triphosphate (ATP), and uridine diphosphate (UDP) on HT-29 cells. Methods: Phosphatase activities of wheat phytase against ATP and UDP was investigated in the presence or absence of inhibitors such as L-phenylalanine and L-homoarginine using a Pi Color Lock gold phosphate detection kit. Viability of HT-29 cells exposed to intact- or dephosphorylated-nucleotides was analyzed with an EZ-CYTOX kit. Secretion levels of pro-inflammatory cytokines (IL-6 and IL-8) in HT-29 cells exposed to substrate treated with or without wheat phytase were measured with enzyme-linked immunosorbent assay kits. Activation of caspase-3 in HT-29 cells treated with intact ATP or dephosphorylated-ATP was investigated using a colorimetric assay kit. Results: Wheat phytase dephosphorylated both nucleotides, ATP and UDP, in a dose-dependent manner. Regardless of the presence or absence of enzyme inhibitors (L-phenylalanine and L-homoarginine), wheat phytase dephosphorylated UDP. Only L-phenylalanine inhibited the dephosphorylation of ATP by wheat phytase. However, the level of inhibition was less than 10%. Wheat phytase significantly enhanced the viability of HT-29 cells against ATP- and UDP-induced cytotoxicity. Interleukin (IL)-8 released from HT-29 cells with nucleotides dephosphorylated by wheat phytase was higher than that released from HT-29 cells with intact nucleotides. Moreover, the release of IL-6 was strongly induced from HT-29 cells with UDP dephosphorylated by wheat phytase. HT-29 cells with ATP degraded by wheat phytase showed significantly (13%) lower activity of caspase-3 than HT-29 cells with intact ATP. Conclusion: Wheat phytase can be a candidate for veterinary medicine to prevent cell death in animals. In this context, wheat phytase beyond its nutritional aspects might be a novel and promising tool for promoting growth and function of intestinal epithelial cells under luminal ATP and UDP surge in the gut.
We isolated a cDNA clone, BLSC1, encoding 5' exon of ATP synthase CF0 subunit I from broccoli. BLSC1 is 285 nucleotides long which consists of a 5' noncoding region of 34 nucleotides, a 5' exon of 145 nucleotides and an intron of 106 nucleotides. The 5' exon codes for 48 amino acids which reveals mostly hydrophobic. The amino acid sequence deduced from BLSC1 shares 83%, 83% and 91% identities with the genes coding for atpF from wheat, rice and spinach, respectively. Genomic Southern blot analysis for BLSC1 showed a typically strong signal for a gene located in the chloroplast genome. Northern blot analysis identified three major classes of transcripts showing strong positive signals in the leaves, but only trace amounts of the transcripts were identified in the other organs like stems, flowr buds and roots.
Tobacco mosaic virus (TMV) tomato strain was isolated from tomato "Seo-Kwang" in Korea. The virion was purified by density gradient centrifugation, and total viral RNA was isolated from the purified particles. Coat protein (CP) cDNA of the virus was synthesized by RT-PCR, and the purified cDNA fragment was subcloned to pBluescript II SK-. The analysis of nucleotide sequence showed that this cDNA was 693 nucleotides long from the insert of clone p1571 and p1572 which contain complete codons of the viral coat protein gene (474 nucleotides) and 3' untranslated region. The nucleotides of coat protein encoding cDNA of the strain were 6 nucleotides less than that of TMV common strain isolated from tobacco plant in Korea. The CP gene showed 70% maximum homology with that of the common strain in the nucleotide level and 86% maximum homology in amino acid level.cid level.
고추냉이에 모자이크 병징을 나타내는 이병주로부터 고추냉이 모자이크 바이러스를 분리하였다. 고추냉이 모자이크 바이러스의 genomic RNA를 추출하여 전체 유전자 구조를 결정하였다. 유전자 전체길이는 6,298 염기를 가지고 있었으며, 4개 ORF로 구성 되어 있었다. ORF 1은 180KD 단백질, ORF 2는 130KD 단백질 , ORF 3은 30KD 단백질, ORF4는 18KD로 외피단백질로 구성되어 있었다. ORF 유전자간에는 ORF4와 ORF 3 유전자간 130개의 염기, ORF 2와 ORF 3 유전자갈 20개 염기 그리고 ORF 1 과 ORF2 유전자간에는 40개의 염기로 overlaps되어 있었다 3'NCR부분은 238개 염기, 외피단백질은 537개 염기, 30KD 이동단백질은 825개 염기, 130KD 단백질은 1,896개 염기와 180k단백질의 2,958개의 염기로 구성되어 있었다. TMV-WTF전체 염기 서열의 유전자 상동성에서는 비교 유전자에서 미보고된 일본의 TMV-WSF와 러시아의 TMV-crucifer와 각각 98.6%와 82.4%로 매우 높았다.
1. 검정곰팡이 (Aspergillus niger)를 실험재료로 하여 동조적으로 액침배양한 결과 포자의 발아로 부터 균사의 생장, 생식기관의 성숙 및 무성포자의 형성까지를 재현시킬 수 있었다. 2. 각 분화과정에서의 균체로 부터 고인산화뉴를레오티드를 추출하여 P.E.I. Cellulose TLC법으로 전개시켰다. 3. 포자형성 직전의 균체로 부터 얻은 추출물 중에 구아노신테트라포스페이트 $(GP_4)$가 존재함을 확인하였다. 4. 분화과정에 따른 균체로부터 추출한 유리아미노산의 총량은 포자형성 직전에 급격히 증가함을 알았다. 5. 정낭과 경자가 완성된 균체에 8-아자구아닌과 시클로헥시미드를 처리한 바 포자형성이 억제되었다. 6. 전낭과 경자가 완성된 균체에 이노신산과 구아닌산을 처리한 바 포자형성이 촉진되었다.
Powder and liquid products of the seasoned and smoked fish were manufactured with small-sized skipjack tuna (Euthynus pelamis) captured in the East Sea, Korea. The property changes of nucleotides and their related compounds, amino acid, and sensory attribute during storage were analyzed. IMP content was the highest among the nucleotides and their related compounds followed by inosine in both powder and liquid products. Nucleotides and their related compounds of the powder product increased slightly as storage period increased, while those of liquid product were constant. Glutamic acid $(15.6{\%})$, aspartic acid $(10.7{\%})$, and lysine $(9.3{\%})$ were major amino acids of the power product, while histidine $(36.2{\%})$ and taurine $(10.6{\%})$ were high in the liquid product. Free amino acid contents of liquid product increased during storage periods. There was no significant difference In the concentration of nucleotides and their related compounds, and composition of free amino acid between the products with/without liquid smoke. Aroma and acceptance were good in both products, while bitterness and sweetness were poor.
Accumulation of modified nucleotides is defective to various cellular processes, especially those involving DNA and RNA. To be viable, organisms possess a number of (deoxy)nucleotide phosphohydrolases, which hydrolyze these nucleotides removing them from the active NTP and dNTP pools. Deamination of purine bases can result in accumulation of such nucleotides as ITP, dITP, XTP and dXTP. E. coli RdgB has been characterised as a deoxyribonucleoside triphosphate pyrophosphohydrolase that can act on these nucleotides. S. cerevisiae homologue encoded by YJR069C was purified and its (d)NTPase activity was assayed using fifteen nucleotide substrates. ITP, dITP, and XTP were identified as major substrates and kinetic parameters measured. Inhibition by ATP, dATP and GTP were established. On the basis of experimental and published data, modelling and simulation of ITP, dITP, XTP and dXTP metabolism was performed. (d)ITP/(d)XTPase is a new example of enzyme with multiple substrate-specificity demonstrating that multispecificity is not a rare phenomenon
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[게시일 2004년 10월 1일]
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