For the phylogenetic study of the genus Trichaptum, nuclear ribosomal DNA sequences from eight strains of four Trichaptium species were examined. Phylogenetic trees were constructed using molecular data on 18 rDNA and 5.8S rDNA and thei ITSs. Parsimony analyses of the Trichaptum species showed that T. biforme and T. laricinum made a monophyletic group respectively, suggesting that each species is phylogenetically independent. However, T. abietum represented a polyphyletic group and T. fusco-violaceum formed a polytomous group, suggesting that these species could be in the process of evolutionary differentiation. Examination of base substitutions of the 18S rRNA gene reveals that the C-T transition is most predominant and that there is a stronger transition bias between closely related organisms rather than between distantly related ones.
Nuclear 18S ribosomal RNA gene (18S rDNA or SSU rDNA) from the Porphyra dentata tissue was amplified and sequenced. Complete 18S rDNA has an 1822 bp exon and a 512 bp intron. The G+C contents of exon and intron were 49% and 55%, respectively. The exon sequence showed 97.1% homology to the GenBank accession number AB013183 of the Japanese P. dentata. The intron region that is inserted in upstream between 568 and 569 showed 52.1% homology to the AB013183.
DNA-based discrimination of species is a powerful way for morphologically otherwise similar species, like centric diatoms. Here, the author sequenced long-range nuclear ribosomal DNAs, spanning from the 18S to the D5 region of the 28S rDNA, of Stephanodiscus, particularly including a Korean isolate. By comparisons, high DNA similarities were detected from the rDNAs of nine Stephanodiscus (>99.4% in 18S rDNA, >98.0% in 28S rDNA). Their genetic distances, however, were significantly different (Kruskal-Wallis test, p < 0.01) compared to two related genera, namely Cyclotella and Discostella. In addition, genetic distances of 18S rDNAs were significantly different (Student’s t-test, p = 0.000) against those of the 28S rDNAs according to individual genera (Cyclotella, Discostella, and Stephanodiscus). Phylogenetic analyses showed that Stephanodiscus and Discostella showed a sister taxon relationship, and their clade was separated from a cluster of Cyclotella (1.00 PP, 100% BP). This suggests that Stephanodiscus has highly conserved sequences of both 18S and 28S rDNA; however, Stephanodiscus is well-separated from other freshwater centric diatoms, such as Cyclotella and Discostella, at the generic level.
In the present study, we aimed to examine the inhibition of genomic DNA from Lactiplantibacillus plantarum (LpDNA) on Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide (PgLPS)-induced inflammatory responses in RAW264.7 cells. Pretreatment with LpDNA for 15 h significantly inhibited PgLPS-induced mRNA expression and protein secretion of interleukin (IL)-1β, IL-6, and monocyte chemoattractant protein-1. LpDNA pretreatment also reduced the mRNA expression of Toll-like receptor (TLR)2 and TLR4. Furthermore, LpDNA inhibited the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and the activation of nuclear factor-κB (NF-κB) induced by PgLPS. Taken together, these findings demonstrate that LpDNA attenuates PgLPS-induced inflammatory responses by regulating MAPKs and NF-κB signaling pathways through the suppression of TLR2 and TLR4 expression.
Soybean nuclear extracts and S-100 were prepared to examine the soybean embryo factors which bind to the upstream region of soybean ${\beta}-conglycinin$${\alpha}'$ subunit gene. SEF3(soybean embryo factor 3), which is presumed to be a trans-acting factor for the expression of the gene, was detected in gel mobility shift assay using the DNA probe containing two AACCCA hexanucleotides. DNA probe containing CATGCAT or AACACA was used to find any other soybean embryo factor interacting with the upstream region of ${\beta}-Conglycinin$${\alpha}'$ subunit gene. It was found that there was no common DNA binding protein detected both in nuclear extracts and S-100. The relative levels of SEF3 binding activity both in nuclear extracts and S-100 of maturing soybean seeds were determined. SEF3 activity of nuclear extracts was first detected around 20 days after pollination and significantly increased around 32 days after pollination.
Human foamy virus (HFV) integrase mediates integration of viral c-DNA into cellular DNA. In this process, HFV prointegration complex (PIC) in which integrase is a key component moves to nuclei of the infected cells and leads to integration of viral DNA to the cellular genome, which is essential in viral life cycle. In general nuclear localization signals (NLS) have been suggested to be involved in localizing retroviral PIC to nuclei, but the mechanisms for nuclear localization of the HFV PIC remains unclear. To functionally identify the NLS of HFV integrase, various subdomains of the protein were expressed as GFP fusions and their subcellular locations were analyzed with confocal laser scanning microscopy. Wild type HFV integrase was karyophilic by targeting the fusion protein to nuclei of the COS-1 and 293T cells. Our results showed that strong NLS of HFV integrase was mapped to the C-terminal regions. In addition the karyophilic properties of N-terminal and central regions are not individually strong enough to direct localization of the fusion proteins to nuclei, but their cooperative activity for nuclear import was confirmed.
Park, Joshua;Liang, Debbie;Kim, Jung-Woo;Luo, Yongjun;Huang, Taesheng;Kim, Soo-Young;Chang, Seong-Sil
Journal of Preventive Medicine and Public Health
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v.45
no.4
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pp.235-243
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2012
Objectives: Nail has been a substitute DNA source for genotyping. To investigate the integrity and consistency of nail DNA amplification for biomarker study, nail clippings from 12 subjects were collected at monthly intervals. The possibility of longer amplification and existence of GAPDH RNA/protein, were also investigated with three nail samples. Methods: Three primer sets were designed for quantitative amplification of nuclear and mitochondrial genes and analysis of their consistency. The mean threshold cycles in amplification of the target genes were compared to test the consistency of polymerase chain reaction (PCR) performance among individual factors including age groups, sex, family, the nail source, and by the size of the amplification segments. Results: The amplification of the target genes from nail DNA showed similar integrity and consistency between the nail sources, and among the serial collections. However, nail DNA from those in their forties showed earlier threshold cycles in amplification than those in their teens or seventies. Mitochondrial DNA (mtDNA) showed better DNA integrity and consistency in amplification of all three targets than did nuclear DNA (nucDNA). Over 9 kb of mtDNA was successfully amplified, and nested quantitative PCR showed reliable copy numbers (%) between the two loci. Reverse transcription PCR for mRNA and immunoblotting for GAPDH protein successfully reflected their corresponding amounts. Regarding the existence of RNA and protein in nails, more effective extraction and detection methods need to be set up to validate the feasibility in biomarker study. Conclusions: Nail DNA might be a feasible intra-individual monitoring biomarker. Considering integrity and consistency in target amplification, mtDNA would be a better target for biomarker research than nucDNA.
We described two brownish freshwater Cryptomonas species, C. marssonii Skuja and C. pyrenoidifera Geitler as first records in Korea. The identification was based on light microscopy, scanning electron microscopy, and nuclear SSU rDNA sequences analysis. Cryptomonas marssonii is characterized by its sigmoid shape with a sharply pointed and dorsally curved antapex, dorso-ventrally flattened cell, two lateral plastids without pyrenoid, and its dimension of 18-25 μm in length and 8-13 μm in width. Cryptomonas pyrenoidifera is characterized by ovoid to elliptical shape with a partially twisted or rounded antapex, dorso-ventrally biconvex cell, lateral plastids with two pyrenoids, and the dimensions of 15-22 μm in length and 10-14 μm in width. Nuclear SSU rDNA sequences between C. marssonii WCK01 from Korea and CCAC0086 from Gernmay, and between C. pyrenoidifera WCK02 from Korea and CCMP152 from Australia were identical, respectively.
By considering the biological properties of a tumor, it should be possible to realize better results in cancer therapy. PET imaging offers the opportunity to measure tumor growth non-invasively and repeatedly as an early assessment of response to cancer therapy. Measuring cellular growth instead of energy metabolism showed offer significant advantages in evaluating therapy. Thymidine and its derivative nucleoside compounds can be changed to mono, di- and tri- phosphate compounds by thymidine kinase and then be incorporated into DNA. Their bindings are increased in highly proliferating cells due to the high DNA synthesis rate. To evaluate cell proliferation, many kinds of thymidine and uridine derivatives have been labeled with positron emitter and radioactive iodine. Compared to radiopharmaceuticals which have radioisotope labeled base ring such as pyirmidine, the radiopharmacuticals which have radioisotope labeled sugar ring are more stable in vivo and have metabolic resistance. The biological properties such as DNA incorporation ratios are highly dependent on their chemical structures and metabolic processes. This overview describes synthesis of radiopharmaceuticals and their biological properties for imaging of tumor cell proliferation.
The R3V6 peptide includes a hydrophilic arginine stretch and a hydrophobic valine stretch. In previous studies, the R3V6 peptide was evaluated as a gene carrier and was found to have low cytotoxicity. However, the transfection efficiency of R3V6 was lower than that of poly-L-lysine (PLL) in N2A neuroblastoma cells. In this study, the transfection efficiency of R3V6 was improved in combination with high mobility group box 1A domain (HMGA). HMGA is originated from the nuclear protein and has many positively-charged amino acids. Therefore, HMGA binds to DNA via charge interaction. In addition, HMGA has a nuclear localization signal peptide and may increase the delivery efficiency of DNA into the nucleus. The ternary complex with HMGA, R3V6, and DNA was prepared and evaluated as a gene carrier. First, the HMGA/DNA complex was prepared with a negative surface charge. Then, R3V6 was added to the complex to coat the negative charges of the HMGA/DNA complex, forming the ternary complex of HMGA, R3V6, and DNA. A physical characterization study showed that the ternary complex was more stable than the PLL/DNA complex. The HMGA/R3V6/DNA complex had a higher transfection efficiency than the PLL/DNA, HMGA/DNA, or R3V6/DNA complexes in N2A cells. Furthermore, the HMGA/R3V6/DNA complex was not toxic to cells. Therefore, the HMGA/R3V6/DNA complex may be a useful gene delivery carrier.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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