새로 육성된 품종의 보호를 위한 분자마커를 대상 작물에 전이시키는 체계를 확립하고자 본 실험을 실시하였다. 식물에서는 전혀 존재하지 않는 mouse adenosine deaminase(ADA) gene으로부터 분자마커로 활용 가능한 크기의 DNA 단편을 획득하고 이를 pBI101에 삽입하여 chimeric gene을 만들었다. 분자마커를 포함하는 형질전환된 담배를 획득하기 위해 A. tumefaciens LBA4404를 이용하여 형질전환을 실시하였다. 담배 절편체에서 형질전환된 신초를 얻기 위해 BAP $1.5mg{\cdot}L^{-1}$, kanamycin $50mg{\cdot}L^{-1}$과 cefotaxim $200mg{\cdot}L^{-1}$이 혼용된 MS배지에서 선발하였으며 신초 발생후 kanamycin의 농도를 2배, 4배로 증가시켜 chimeric gene이 완전하게 전이되어 저항성을 가진 8개체를 얻었다. 항생제에 의해 선발된 8개체를 분자마커 primer로 PCR분석하여 분자마커가 식물체의 genome내로의 전이를 확인하였다.
동물유전자인 mouse adenosine deaminase (ADA)유전자가 안정적으로 연초 형질전환체에서 발현되었다. ADA cDNA 을 연초에서 강력히 발현시키기 위해서 35S/35S/AMV promoter을 부착시켰으며 식물세포에 도입을 위해서 binary vector인 pRD400을 이용하였다. 연초의 형질전환은 Tri- parental mating에 의해서 도입된 ADA 유전자 함유 binary vector와 disarmed Ti-plasmid을 함유하고 있는 Agrobacterium tmefacience MP9O을 사용하였다. 동시배양은 연초의 잎 disc을 이용해서 kanamycin이 첨가된 배지로부터 직접 shoots을 선발하여 형질전환체로 유도하였다. 형질전환 체에 ADA 유전자의 삽입여부는 PCR을 이용하였으며, 실험결과 ADA 유전자를 확인할 수 있었다. 또한 도입된 mouse ADA 유전자로부터 mRNA 및 단백질 합성여부를 각각 northern blot 및 immunoblot 분석한 결과 형질전환체 에서는 공히 확인되었다.
Um, Yu-Rry;Cho, Eun-Jeong;Shin, Ha-Jeong;Kim, Ho-Bang;Seok, Yeong-Seon;Kim, Kwan-Suk;Lee, Yi
한국연초학회지
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제30권2호
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pp.85-93
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2008
This report describes a set of seven informative single-nucleotide polymorphisms (SNPs) and one insertion-deletion (INDEL) distributed over 24 cultivars that can be used for tobacco (Nicotiana tabacum L.) cultivar identification. We analyzed 163,000 genomic DNA sequences downloaded from Tobacco Genome Initiative database and assembled 31,370 contigs and 60,000 singletons. Using relatively long contigs, we designed primer sets for PCR amplification. We amplified 61 loci from 24 cultivars and sequenced the PCR products. We found seven significant SNPs and one INDEL among the sequences and we classified the 24 cultivars into 10 groups. SNP frequency of tobacco, 1/8,380 bp, was very low in comparison with those of other plant species, between 1/46 bp and 1/336 bp. For exact identification of tobacco cultivars, many more SNP markers should be developed. This study is the first attempt to identify tobacco cultivars using SNP markers.
Phenylalanine ammonia-lyase (PAL), a key enzyme of the phenylpropanoid biosynthesis pathway, is activated by a number of developmental and environmental cues. The coding region of the NtPAL4 gene was 2,154 bp in length, and its deduced protein was composed of 717 amino acids. Sequence analysis of NtPAL4 cDNA from tobacco (Nicotiana tabacum L.) revealed high structural similarity to PAL genes of other plant species. The NtPAL4 gene exists as a single copy in the tobacco plant, and its transcripts were strongly expressed in flowers and leaves. NtPAL4 expression was significantly induced in response to NaCl, mannitol, and cold treatments, but it was not induced by abscisic acid (ABA). NtPAL4 expression decreased gradually after treatment with ABA and $H_2O_2$; however, NtPAL4 transcripts accumulated after treatment with methyl viologen (MV). Our results suggest that the NtPAL4 gene may function in response to abiotic stresses.
Seven flue-cured tobacco(Nicotiana tabacum) varieties and their 21 progenies in Fl and F2 generation, half diallel crosses(no reciprocal), were tested for the degree of heterosis and combining abilities in sucker producing character according to topping and suckering treatment. Significant difference in number and weight of sucker was observed among seven cultivars. The values of general combining ability(GCA) were greater than those of specific combining ability(SCA) in weight and number of sucker in F$_1$ generation. In topping and suckering plot, Cocker 86, McNair 944, and Va 115 revealed the significant negative GCA effects for number and weight of sucker, but By 104 and Speight G-28 did positive GCA. Without topping and suckering, GCA effects for sucker weight in Cocker 139 and Cocker 86 were negative and those for sucker number in Va. 115 were also negative. Negative SCA values in sucker weight could be observed in F$_1$ generation of Cocker 86 X BY 104 and Speiht G-28 X Cocker 86, in F$_2$ of Hicks $\times$ Speight G-28 and McNair 944 $\times$ BY 104 in topping and suckering plot. SCA in F$_1$ of McNair 944 X Cocker 86 and Speight G-28 X Cocker 139 was negative without topping and suckering. The value of heterosis in sucker producing character of F$_1$ hybrids was positive
To obtain the genetic information about DVT( $\alpha$- and $\beta$-4,8,13- duvatriene-1,3-diols) and cis-abienol contents, two burley(Burley 21, KB 108), three sun-cured cultivars(N. tabacum L. cv. Yonbyun 3, Jahengyon and Jaraehong), TI 1068, and thirty F$_1$ hybrids derived from them were sampled and the diterpenes were analysed using thin layer chromatography (TLC) procedures. DVT exudation from the leaf scerface could Ie detected in all coltivars and F$_1$ hybrids tested. TI 1068 and Yonbyun 3 had cis-abienol exdudates. Burley 21, KB 108, Jaheungyon, and Jaraehong had no spot of cis-abienol. It is considered that cis-abienol exdudation might be controlled by dominant gene(s). The cytoplasmic effect on the cis-abienol exdudation was not detected.
This experiment was conducted to obtain basic information on breeding of flue-cured tabacco varieties . Nine cultivars and partial diallel set of 36 Fl hybrids were grown at Daegu Experiment Station, Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1983. Partial dominance with high additive gene effect was observed for yield, leaves per plant , days to flower, leaf weight, nicotine and reducing sugar content. partial dominance with additive and dominant gene effect was observed for stalk height , leaf width midrib weight Overdominance with high dominant gene effect was observed for leaf length and midrib width. The directions of dominance were positive for yield, stalk height, leaf weight, leaf length, leaf width, midrib weight, midrib width and reducing sugar content, and the negative was days to flower. The estimates of effective genes were 1 for leaves per plant, 2 for stalk height, days to flower and leaf shape. 3 to 6 for leaf length, leaf width, leaf weight and midrib weight.
To classify the inheritance of resistance to potato virus Y, crosses between susceptible flue-cured tobacco variety NC 95 and resistant variety McNair 30 were conducted. The parents, $F_1$ plants, $F_2$ populations, and haploid plants derived from anthers of $F_1$ plants were screened for a resistance of two potato virus Y strains (PVY-VB and PVY-VN) isolated in Korea. The Chi-square values for the $F_3$ populations and haploids of $F_1$ fitted 1 :3 and 1 :1 ratios of resistant to susceptible for two strains, respectively. Therefore, it was found that the resistance of McNair 30 for the potato virus Y was controlled by a single recessive gene. Moreover the resistance to two strains screened was inherited dependently.
The experiment was conducted to obtain basic information on breeding of flue-cured tobacco varieties. Nine cultivars and partial diallel set of 36 F1 hybrides were grown at Taegu Experiment Station, Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1983. Estimated heritability in the narrow-sense ranged from 66.21% to 94.12% for yield, leaves per plant, days to flower, leaf weight, leaf width, leaf shape, nicotine content and reducing sugar content, while that for stalk height, leaf length, midrib weight and midrib width ranged from 28.12% to 56.25%. The genotypic correlations were positive among yield, leaf weight, leaf length, leaf width, midrib weight and midrib width in the middle leaves, days to flower, nicotine content and reducing correlated with leaf length than leaf width. At the path coefficient analysis of the effect of leaf and midrib characters upon yield according to stalk position, leaf weight, leaf width and midrib width in the middle leaves, and leaf weight, and leaf width in the top leaves showed high direct effects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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