• Applied Biological Chemistry
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• 제36권6호
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• pp.557-561
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• 1993

Polyethylene glycol(PEG)법 또는 electroporation법으로 제라니움 원형질체에 neomycin phosphotransferase II(nptII) 유전자를 옮기고, 세포내에 도입된 nptII DNA의 존재유무와 발현여부를 조사하였다. Polymerase chain reaction(PCR)을 이용하여 검토한 결과, PEG법을 사용했을 때나 electroporation법을 사용했을 때 모두 세포내에 도입된 nptII DNA가 있음이 확인되었다. 또 이들 세포의 추출물을 전기영동하여 neomycin phosphotransferase 활성을 조사한 결과, 효소활성을 보이는 band가 검출되어 marker gene 으로 도입된 notII 유전자가 세포내에서 발현된다는 것이 확인되었다.

• 한국산림과학회지
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• 제84권1호
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• pp.77-86
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• 1995

임목을 대상으로 삽입된 외래 유전자의 공간적, 시기별 발현 특성을 이해하기 위한 기초연구로서 온실에서 생육 중인 형질전환된 2년생 잡종 포플러 (Populus alba X P. grandidentata) Hansen 클론을 대상으로 삽입된 외래 유전자의 발현정도를 각 기관별로 조사하였다. Agrobacterium binary vector pRT45, pRT102 및 pRT104에 의해서 형질전환된 3계통의 형질전환체 Tr15, Tr345, Tr665 모두는 선발가능한 표식 유전자로서 nos promoter-NPT II 유전자가 대상 식물체의 genome에 삽입되어 있으며, 그외에, pin2 promoter-CAT 유전자(pRT45), nos promoter-PIN2 유전자(pRT102), Cauliflower Mosaic Virus 35s promoter-PIN2 유전자(pRT104)가 3계통의 형질전환체에 제각각 삽입되어 있는 잡종 포플러이다. 이들 3계통의 형질전환 포플러 식물체의 DNA를 PCR 검정 기법을 이용하여 분석해 본 결과 선발 가능한 표식 유전자인 NPT-II가 삽입되어 있음이 입증되었다 발현 정도를 비교 분석하기 위해서 NPT-ELISA 검정을 실시하였다. 삽입된 NPT II 유전자는 형질전환된 포플러의 잎, 엽병, 형성층 조직, 줄기의 목질부, 뿌리에서 발현되었으며, 발현 정도는 형질전환된 식물체의 계통에 따라서, 그리고 형진전환된 식물체의 부위에 따라서 다양하게 나타났다. pRT45에 의해서 형질전환된 Tr15 형질전환체의 경우, 늙은 잎과 엽병에서 NPT II 유전자가 가장 높은 수준으로 발현되었으며, 어린 잎과 뿌리 조직에서 가장 낮게 발현되었다. 삽입된 외래 유전자가 각 식물체간에, 각 기관에 따라서 각각 상이한 발현 정도를 나타내는 이와 같은 결과는 형질전환된 식물체에 대한 효과적인 선발과정이 요구됨을 의미함은 물론이고, 형질전환 식물체의 발달 과정에 따라서 삽입된 외래 유전자가 공간적, 시기적으로 각각 다르게 발현할 수 있다는 것을 나타낸다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제6권1호
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• pp.15-19
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• 2004

The expression of a chimeric transgene (nos-npt II) has been examined in 9 years old transgenic poplars (Populus koreana x P. nigra) growing in a nursery. The expression of the gene in twenty six independentely transformed plants were examined by 1) enzyme (NPT II) assay, 2) RT-PCR, and 3) resistance to kanamycin. High NPT II activities in young leaves of all the transformed plants were found even without a selection pressure for antibiotics for 9 years. However, the activity varied with the positions of leaves in the stem in that young leaves showed higher activity than did mature tissues. When leaf segments were cultured in the presence of 150 mg/l kanamycin, only those from young leaves produced vigorously growing callus. However, as in the case of NPTII assay, the leaf segments from mature leaves did not form callus well on the media. RT-PCR with nptII specific primers also showed that amplification products were observed only when RNAs from young tissues were used. The total RNA gel showed that while RNA in young leaves are relatively stable and in a large quantity, those in old leaves were mostly degraded. All the above results suggest that the gene is transcriptionally active only in young tissue even though it is attached to a constituitive promoter. Therefore, the expression of foreign gene in poplar plants seemed to be affected by the metabolic state of the cells and thus vary greatly with the developmental stages and the age of tissue.

• Plant Resources
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• 제4권1호
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• pp.36-40
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• 2001

Transgenic Petunia hybrida cv. Rosanpion was produced by Agrobactepium tumefaciens LBA4404 harboring a binary vector pBI 121 containing $\beta$-glucuronidase (gus) and neomycin phosphotransferase (nptII). For genetic transformation, leaf discs were precultured on MS medium supplemented with 0.5 mg/L NAA and 1.0 mg/L BA (MNB) for 2 days and cocultured for 15 mins with A. tumefaciens. For selection of transformant, leaf discs were transferred to fresh MNB containing 50 mg/L kanamycin and 500 mg/L cefotaxime. Eighteen plants were regenerated and four were confirmed by PCR for detection of gus and nptII gene integrated into the nuclear genome of petunia ‘Rosanpion’. Using this transformation system, we expect that transgenic petunia ‘Rosanpion’ incorporating a useful gene can be produced.

• 한국작물학회지
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• 제46권5호
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• pp.375-379
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• 2001

Transgenic plants from hypocotyl segments of buckwheat were produced with the Agrobacterium strain LBA4404 harboring the binary vector pBI121 containing chimeric genes of neomycin phosphotransferase II (npt II) and $\beta$-glucuronidase (gus). Two weeks after co-cultivation with Agrobacterium, most of the hypocotyl segments gradually became brown and died on the selection medium containing 100mg/$\ell$ of kanamycin. Plants regenerated from the hypocotyl explants grown on selection medium were GUS-positive in the leaf, stem and vascular tissues by histochemical assay, and varied in gus activity (440-2568 pmol, 4-MU/mg protein) by fluorimetry. The plants showing GUS activity were confirmed of containing GUS and NPT-II genes by polymerase chain reaction (PCR). Within 3 months, transgenic buckwheat plants were able to obtained from the hypocotyl segments.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권4호
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• pp.260-264
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• 1996

Cymbidium속 난의 형질전환계를 확립하기 위해서, microprojectile bombardment 방법을 이용하여 춘란(Cymbidium virescence)의 rhizome 조직세포에 외래 유전자를 도입하는 조건을 검토하였다. 각 parameter별 적정조건으로서 텅스텐 입자의 크기는 $1.11\;{\mu}m$, He 가스 압력은 $77.33kg/cm^2$, gap distance는 6.35mm, target distance는 7.0cm 이었다. DNA피복입자를 투사한 $400{\mu}m$ 두께의 rhizome 절편을 2개월간 배양한 뒤 GUS 활성을 조사한 결과 이 유전자가 발현되는 세포들이 관찰되었다. Kanamycin (100 mg/L)을 첨가한 배지에서 6개월 동안 선택배양을 통해 얻은 rhizome의 DNA를 PCR로 분석한 결과 nptII 유전자의 삽입을 확인할 수 있었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권1호
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• pp.13-17
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• 2004

형질전환 효율을 높이기 위하여, NPTII와 GUS유전자를 포함하고 있는 pIG121Hm을 미세 입자에 코팅하여 particle bombardment를 수행한 후 pIG121Hm가 도입된 Agrobacterium tumefaciens EHA101와 3일간 공동 배양하였다. 그 후 캘러스를 1mg/L 2,4-D, 0.1mg/L BAP, 100mg/L kanamycin, 그리고 200mg/L carbenicillin이 포함된 MS배지로 옮겨 4주간 성장시킨 후 kanamycin저항성 캘러스를 선발하여 GUS 발현을 관찰하였고, PCR 분석을 통하여 700 bp의 NPT II 유전자가 도입된 것을 확인하였다. Particle bombardment 후 Agrobacterium과 공동배양 한 처리구가 Agrobacterium과 공동배양만 한 처리구보다 GUS발현 분석에 의한 형질전환 효율이 3배정도 더 높았다 형질전환 된 재분화 식물체를 얻기위해 다시 선발된 kanamycin저항성 캘러스는 1mg/L NAA와 1mg/L BAP가 포함된 재분화 배지에 옮겨져 4주 후 형질전환 된 소인경을 형성하였다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제19권3호
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• pp.162-165
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• 2003

Transformation of Fuji apple (Malus domestica 'Fuji') was performed using Agrobacterium tumefaciens harboring a coat protein (CP) gene of Cucumber mosaic virus (CMV). A plasmid DNA containing the virus CP and NPT II genes was introduced into the loaves of apple by th e Agrobacterium - mediated transformation procedure. Regenerated transformants of the apple were obtained by kanamycin resistance conferred by the introduced NPT II gene. PCR analysis showed that 3 out of 20 putatively selected R0 plant lines contain the CMV-CP gene. Nine putative transgenic lines out of 20 lines were investigated with the PCR analysis; 5 regenerants produced a 450 bp DNA band and 3 regenerants showed a 671 bp DNA band for the NPT II and CMV-CP genes, respectively. Southern hybyidization results demonstrate the successful integration of the CMV-CP gene into the genome of the apple. This is the first report on the generation of useful vius resistance source of transgenic apple for molecular breeding program.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권3호
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• pp.198-202
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• 2011

Agrobacterium과 자엽절 절편 공동배양으로 오이 형질전환체를 생산하였다. 오이 자엽절 절편 (c.v. Eunsung)은 선발 마커로서 nptII유전자와 유용유전자로서 DQ유전자가 포함된 pPZP211를 EHA101에 형질전환하여 공동 배양하였다. 3회 반복실험으로부터 평균 형질전환 빈도는 4.01%를, 최대 빈도는 5.97%를 보여 주었다. Paromomycin항생제 저항성을 갖는 9개의 식물체를 선발과정을 통해 얻었으며, Southern blot 분석에 의해 6개 식물체의 genome에 nptII유전자자 안정적으로 도입되어 있음을 확인할 수 있었다.

• 원예과학기술지
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• 제18권6호
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• pp.797-801
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• 2000

본 연구는 고추에서 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질 전환시 형질전환율을 높이기 위하여 A. tumefaciens와의 접종시간과 인위적인 상처처리에 따른 효과를 조사하였던 바 고추 형질전환시 자엽절편체의 재분화는 인위적 상처처리 및 A. tumefaciens 접종시간에 의해 영향을 받았다. 접종시간을 3600초로 한 경우의 재분화는 상처처리에 의해 급격히 감소하였으며 자엽 절편체에 대한 인위적인 상처처리가 20초 또는 120초간의 접종시간처리와 병행됨으로써 형질 전환율을 58-72% 이상으로 높이는 효과를 보였다. 형질전환여부의 확인을 ${\beta}$-glucuronidase 염색법과 npt II primer를 이용한 polymerase chain reaction 분석에 의해 수행 한 바 효과적인 것으로 판단되었다.