• KSBB Journal
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• 제4권3호
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• pp.229-234
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• 1989

보효소고분자화를 위한 담체로서 $\beta$ - casein에 NAD$/^+$ 를 효소법으로 고정화하였다. 21개의 glutamine 잔기를 함유하는 수용성고분자물질로서 transglutaminase 촉매작용에 의해 NAD$/^+$analog의 amino기와 r-glutamylamine bond를 형성하여 결합하였다. $\beta$-Casein은 $/_a_s_1+$(1분자내에 15개의 glutamine잔기를 함유)에 비하여 효과적인 고정화담체이었으며 8-(6-amino hexyl) aminonicotinamide ade-nine dinucleotide는 N$^6$-[(6-aminohexyl)-carba-moylmethy]-NAD$^+$에 비하여 고정화수율이 높았다. 고정화에 있어 NAN$_3$의 첨가는 필수적이었다. 고정화 NAD$^+$ Km치는 NAD$^+$또는 NAD$^+$analog와 비슷하였으나 max.rate는 고정화하므로써 31% 감소되었다. 그러나 고정화하므로써 NAD$^+$의 alkaline pH에서의 안정성은 증대되었으며, 고정화 보효소를 칼슘침전하여 분리회수하였을 경우에도 보효소 활성을 유지, NAD$^+$형 (산화형)과 NADH형(환원형)으로 상호전환되므로써 재생되었다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1986년도 추계학술대회
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• pp.510.1-510
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• 1986

Many enzymes require the participation of readily dissociable coenzymes as NAD for thir catalytic activities. The continuous utilization of the enzymes requires the retention and regeneration of the coenzymes. For this purpose, several kinds of macromolecular NAD derivatives have been prepared by covalently attaching NAD to watersoluble polymers. We have prepared poly (ethylene glycol)-bound NAD (PEG-NAD) by coupling N$\^$6/-(2-carboxyethyl)-NAD to one terminal of ${\gamma}$ $\omega$-diaminoly (ethylene glycol) (Mr 3000) with water-soluble carbodiimide. PED-NAD thus obtained has one NAD moiety located at a terminal of the linear, flexible and hydrophilic chain of poly (ethylene glycol). PED-NAD has good coenzyme activity for various dehydrogenases and is applicable in a continuous enzyme reactor. To use these macromolecular NAD derivatives in an enzyme reactor, it si necessary to understand the behavior of the system in which the reactions of dehydrogenases are coupled by the recycling of the NAD derivative. We investigated the kinetic properties of a continuous enzyme reactor containing lactate dehydrogenase, alcohol dehydrogenase and PEG-NAD. The steady-state behavior of the enzyme reactor is explained by a simple kinetic model.

• Applied Biological Chemistry
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• 제35권3호
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• pp.157-164
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• 1992

미생물을 이용하여 pyridine계 보효소인 NAD를 생산하기 위하여, 12종의 효모로부터 NAD 함량이 높은 Saccharomyces sake KBA No. 6을 선별하였으며, NAD 생산에 미치는 여러 가지 효과를 검토하였다. NAD 생산에 있어서 탄소원으로는 4% glucose, 질소원으로는 2% bactopeptone이 가장 좋았으며 최적 PM와 온도는 각각 5.0과 $30^{\circ}$C$이었다. 한편 NAD 전구물질로서 nicotinamide와 adenine을 동시에 사용한 경우 NAD 생산이 가장 좋았으며 이때의 농도는 각각 4 mg/ml과 3 mg/ml이었다. 또한 NAD 생산을 증가시키기 위하여 배양시 2가 금속이온들을 사용하였으며 이들 중 $Zn^{2+}$가 매우 효과적이었다. 계면활성제의 영향은 음이온 계면활성제인 sodium dodecyl sulfate(SDS)를 사용하였을 때 효과적이었다. 상기의 최적 조건하에서, 144시간 배양 후에 최대 NAD 생산량은 배지 100 ml당 35 mg이었으며 전체량의 89%인 31mg의 NAD가 배지 중에 유리되었다.

• Journal of Microbiology
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• 제33권3호
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• pp.234-238
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• 1995

The breakdown rate of NAD in Salmonella typhimurium was investigated both in aerobic and anaerobic conditions. After NAD is broken down to nicotinamide ring containing moiety, almost all the nicotinamide ring containing moiety recycles back to NAD pool. However almost none of the adenine containing moiety recycles back. We pulse-label the endogeneous NAD with [$\^$14/C]-adenine and [$\^$3/H]- niacin. The remaining [$\^$14/C]-radioactivity in NAD pool at each time was regarded as unbroken portion of NAD, WHERE AS THE OF [$\^$3/H] was served as a total amount of NAD to start with. Under aerobic condition, the half-life of NAD was around 2 hours. However, the breakdown rate was significantly reduced (around 3-5 fold) under anaerobic condition. The observation that under aerobic conditions, NAD turnover is considerably faster than under anaerobic conditions suggests that oxygen has important effect in NAD breakdown.

• 미생물학회지
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• 제39권4호
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• pp.223-229
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• 2003

2,4,6-Trinitrotoluene (TNT)을 분해할 수 있는 Stenotrophomonas sp. OK-5에서 분리한 NAD(P)H-nitroreductase의 특성을 조사하였다. 먼저 ammonium sulfate precipitation, DEAE-sepharose, 그리고 Q-sepharose 등의 일련의 정제 과정을 통하여 NAD(P)H-nitroreductase을 분리정제하였다. 분취기로부터 얻어진 시료로부터 NAD(P)H-nitroreductase의 효소활성을 가지는 3개의 다른 fractions (I, II 및 III)이 탐침되었다. NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II, 그리고 III의 비활성(specific activity)은 각각 5.06 unit/mg, 4.95 unit/mg, and 4.86 unit/mg이었으며, crude extract와 비교하여 각각 10.5배, 9.8배, 8.9배 이상 농축되었다. 이 실험에서 이들 3개의 fractions 가운데, fraction I이 가장 높은 비활성을 나타내었다. NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 효소활성에 영향을 미치는 몇 가지 요인을 조사하였다. 모든 NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 최적 온도는 30$^{\circ}C$이었으며, 최적 pH는 약 7.5이었다. 4Ag^+, Cu_2^+, Hg_2^+$ 등의 금속이온은 약 80%의 효소활성을 저해하였으나, $Mn_2^+ 이나 Ca_2^+$의 첨가 시에는 약 30~40% 정도의 활성이 감소되었다. 그러나 $Fe_3^+$은 이들 효소의 활성을 증진시켰다. SDS-PAGE에 의해 측정된 NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II 및 III의 분자량은 모두 약 27 kDa임이 확인되었다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제18권6호
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• pp.497-502
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• 2014

Extracellular nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) cleaving activity of a particular cell type determines the rate of the degradation of extracellular NAD with formation of metabolites in the vicinity of the plasma membrane, which has important physiological consequences. It is yet to be elucidated whether intact human neutrophils have any extracellular NAD cleaving activity. In this study, with a simple fluorometric assay utilizing $1,N^6$-ethenoadenine dinucleotide (etheno-NAD) as the substrate, we have shown that intact peripheral human neutrophils have scant extracellular etheno-NAD cleaving activity, which is much less than that of mouse bone marrow neutrophils, mouse peripheral neutrophils, human monocytes and lymphocytes. With high performance liquid chromatography (HPLC), we have identified that ADP-ribose (ADPR) is the major extracellular metabolite of NAD degradation by intact human neutrophils. The scant extracellular etheno-NAD cleaving activity is decreased further by N-formyl-methionine-leucine-phenylalanine (fMLP), a chemoattractant for neutrophils. The fMLP-mediated decrease in the extracellular etheno-NAD cleaving activity is reversed by WRW4, a potent FPRL1 antagonist. These findings show that a much less extracellular etheno-NAD cleaving activity of intact human neutrophils compared to other immune cell types is down-regulated by fMLP via a low affinity fMLP receptor FPRL1.

• Animal cells and systems
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• 제4권2호
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• pp.141-144
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• 2000

Effects of deamido-$\textrm{NAD}^{+}$on self-splicing of primary transcripts of the phage T4 thymidylate synthase gene (td) was investigated. The self-splicing was not affected by deamido-$\textrm{NAD}^{+}$- at concentrations up to 2 mM. However, it began to decrease at 5 mM and the formation of splicing products such as the linear intron, intron-exon 2 and exon 1-exon 2, was slightly reduced. At 20 mM the self-splicing activity was almost completely abolished. This analog of the coenzyme $\textrm{NAD}^{+}$- inhibits the self-splicing of td intron RNA although it does not possess a guanidine group in its structure. The analysis of inhibitory concentrations and structural examination suggests that the key structural features of deamido-$\textrm{NAD}^{+}$ responsible for the inhibition of splicing may be the ADP-ribose moiety.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제42권1호
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• pp.19-24
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• 1999

Plants have been shown to contains $Ca^{2+}$/calmodulin-stimulated GAD and NAD kinase. To test how calmodulin and calmodulin methylation affect the activation of GAD and NAD kinase, GAD and NAD kinase were partially purified from tobacco plants. GAD was also partially purified from E. coli transformed with a plasmid carrying a cloned tobacco GAD gene. We find that GAD from the transformed E. coli showed 60-fold $Ca^{2+}$/calmodulin-dependent activation. However, GAD from tobacco plants was stimulated only about 3.8-fold by the addition of calmodulin in the presence of calcium, suggesting high background activity of the enzyme was possibly due to bound endogenous tobacco calmodulin. There were no significant differences in the tobacco GAD activator properties between calmodulins. A monoclonal antibody against petunia GAD interacted strongly with both GAD from tobacco plants and GAD from cloned gene. NAD kinase from tobacco plants showed a complete $Ca^{2+}$/calmodulin dependency for activity. Unmethylated calmodulins activated GAD in a manner similar to methylated calmodulin. However, the maximum level of NAD kinase activation obtained with unmethylated calmodulins is approximately 4-fold higher than methylated calmodutins. These data suggested that endogenous tobacco calmodulin may interact more tightly with GAD than NAD kinase and that calmodulin methylation affects the activator properties of calmodulins for tobacco NAD kinase but not for GAD.

• KSBB Journal
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• 제7권3호
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• pp.179-185
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• 1992

NAD재생형 bioreactor를 구축함에 있어 음이온 하전막을 이용하고자 하였다. 사용한 막은 용액상의 NAD의 통과를 저지하여 80.9%를 bioreactor내에 존속시켰는데 NAD의 bioreactor내에의 존속율은 Tris-maleate완충용액을 사용하고 albumin을 첨가하므로써 증가되었다. 음이온하전막을 장착한 bioreactor내에서 주반응 효소로서 sorbitol dehydrogenase와 재생반응효소로서 alcohol dehydrogenase를 사용하여 NADH로의 재생과 함께 fructose로부터 sorbitol의 생산을 행하였다. 반응형식은 반복회분조작을 행하였는데 매 회분마다 70%의 전환율이 될 때까지 반응기킨 후 반응액의 90%를 회수한 후 fructose와 ethanol을 feed하여 다음의 회분반응을 행하였다. Sobitol의 생산량은 198시간의 반응에서 47g/L이었다. 한편 사용한 막의 NAD존속율은 반응종료후에도 거의 감소되지 않았다.

• 청정기술
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• 제13권3호
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• pp.208-214
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• 2007

본 연구에서는 비수계 분산중합(NAD)을 이용하여 $0.1\;{\mu}m$에서 $1\;{\mu}m$ 크기의 입자를 가지는 환경친화적인 아크릴 수지를 제조하였다. 1 단계에서 안정제를 제조한 후 2 단계에서 안정제에 아크릴 단량체를 투입하여 NAD수지를 제조하였다. 적정 점도의 NAD수지를 합성하려면 안정제도 1000 cP 이상의 점도를 가진 것을 사용하여야 하는 것으로 나타났고 이를 위해서는 안정제 중합 시 단량체와 개시제를 단계적으로 투입하는 것이 필요한 것으로 관찰되었다. 또한 NAD수지 중합시 안정제의 양은 적정량을 투입하는 것이 필요하고 적정량 이상에서는 더 이상 NAD수지의 점도가 증가하지 않는 것으로 나타났다. 중합 단량체의 조성 선택 시에도 용해도 상수 차이 등의 요인으로 입도분포가 두 가지로 나올 수 있으므로 이를 고려하여 단량체를 투입하여야 하는 것으로 관찰되었다.