• 공업화학
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• 제5권5호
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• pp.801-807
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• 1994

락토오스 치환 스티렌 단량체, N-(p-vinylbenzyl)-D-lactonamide(VLA)는 락토오스락톤과 p-비닐벤질아민과의 아미드화반응을 따라 제조하였고, 비오틴 치환 스티렌 당량체, N-(p-vinylbenzyl)-biotinamide(VBA)는 비오틴의 카르복실기를 N, N'-dicyclohexylcarbodiimide 존재하에서 N-hydroxysuccinimide와 반응하여 활성화된 비오틴을 제조한 것을 이어서 p-비닐벤질아민과 아미드화시켜 합성하였다 합성한 이들 단량체(VLA와 VBA)의 반응 몰비를 바꿔가면서 라디칼 중합에 의하여 공중합체인 poly(vlnytbenzyl-lactonamide-co-vinylbenzylbiotinamide), p(VLA-co-VBA)을 합성하였고, 67~71%의 수율을 얻었다. 합성된 공중합체들은 친수성의 락토오스 부위와 소수성의 비닐벤질 부위 그리고 소량의 biotin 부위를 함께 갖고 있는 양친매성 중합체였음을 기기분석으로 확인하였다.

• 분석과학
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• 제18권6호
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• pp.460-468
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• 2005

The biotin-avidin complex, as a model recognition system, has been constructed through N-hydroxysuccinimide(NHS) reaction on a variety of substrates such as a smooth Au film, electrochemically roughened Au electrode and chemically modified mica. Stepwise self-assembled monolayers (SAMs) of biotin-avidin system were characterized by surface-enhanced resonance Raman scattering (SERRS) spectroscopy, atomic force microscopy (AFM) and surface plasmon resonance (SPR). A strong SERRS signal of rhodamine tags labeled in avidin from the SAMs on a roughened gold electrode indicated the successful complex formation of stepwise biotin-avidin recognition system. AFM images showed the circular shaped avidin aggregates (hexamer) with ca. $60{\AA}$ thick on the substrate, corresponding to one layer of avidin. The surface coverage and concentration of avidin molecules were estimated to be 90% and $7.5{\times}10^{-12}mol/cm^2$, respectively. SPR technique allowed one to monitor the surface reaction of the specific recognition with high sensitivity and precision.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권1호
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• pp.37-42
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• 1993

질트리코모나스(Trichomonasvqqin is)의 항원성 변이를 관찰하기 위해 원충의 표면 항원 (surface antigen)을 N-hydmwsuccinlmide-biotin(N반5-biotin)으로 표지 하고 표지된 표면 단백질과 토끼의 항혈청으로 면역침전(Immunoprecipitation; IP)시켰으며 sodium dodec낀 sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)와 전기영동이적법을 시 행하였다. 살아있는 원충을 NHS-biotin으로 표지하여 표면 단백질을 분리하고 이를 질트리코모나스에 면역된 토끼 항혈청과 면역침전 시켰던 바 46, 60, 68, 90, 130 그리고 220 kDa에서 6개의 단백질이 항원성을 나타내었으며 질토리코모나스의 분리주인 HY-1, HV-15 및 ATCC 50148 주간에 차이는 없어 이들 6개 분획이 표면 항원성 발현에 중요한 역할을 할 것으로 생각된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제32권9호
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• pp.1209-1216
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• 2022

To better understand the effects of PEGylation and biotinylation on the delivery efficiency of proteins, the cationic protein lysozyme (LZ) and anionic protein bovine serum albumin (BSA) were chemically conjugated with poly(ethylene glycol) (PEG) and biotin-PEG to primary amine groups of proteins using N-hydroxysuccinimide reactions. Four types of protein conjugates were successfully prepared: PEGylated LZ (PEG-LZ), PEGylated BSA (PEG-BSA), biotin-PEG-conjugated LZ (Bio-PEG-LZ), and biotin-PEG-conjugated BSA (Bio-PEG-BSA). PEG-LZ and Bio-PEG-LZ exhibited a lower intracellular uptake than that of LZ in A549 human lung cancer cells (in a two-dimensional culture). However, Bio-PEG-BSA showed significantly improved intracellular delivery as compared to that of PEG-BSA and BSA, probably because of favorable interactions with cells via biotin receptors. For A549/fibroblast coculture spheroids, PEG-LZ and PEG-BSA exhibited significantly decreased tissue penetration as compared with that of unmodified proteins. However, Bio-PEG-BSA showed tissue penetration comparable to that of unmodified BSA. In addition, citraconlyated LZ (Cit-LZ) showed reduced spheroid penetration as compared to that of LZ, probably owing to a decrease in protein charge. Taken together, chemical conjugation of targeting ligands-PEG to anionic proteins could be a promising strategy to improve intracellular delivery and in vivo activity, whereas modifications of cationic proteins should be more delicately designed.

• 한국수산과학회지
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• 제33권1호
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• pp.55-59
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• 2000

무지개 송어의 뇌하수체 및 배양액에 존재하는 GTH II 농도를 측정하기 위해 Avidin- Biotin complex를 이용한 sandwich EIA 계을 개발했다. Protein A sepharose affinity chromatography을 통해서 얻어진 연어 GTH II의 rabbit IgG에 biotinylation시킨 것 (Biotin-salmon GTH II rabbit IgG)을 제2 항체로 사용하였고, Non-Biotin salmon GTH II rabbit IgG는 단지 protein A sepharose affinity chromatography에서 얻어진 IgG를 제 1 항체로 사용하였다. EIA는 sandwich법에 의해서 이루어졌으며, 효소반응 기질로는 TMB(3,3'5,5-tetramethylbenzidine)를 이용했으며, 반응후 450 nm의 흡광도에서 automatic microplate reader로 측정하였다. 그 결과, $0.12\;{\~}\;125\;ng/ml$의 범위에서 용량반응곡선을 얻었으며, 측정감도 (최소 검출량)는 거의 0.58 ng/ml 정도 였다. 그리고 뇌하수체 추출물 및 배양액 각각의 희석곡선은 GTH II 표존곡선과 일치 하였다. 또한 이러한 GTH II의 표준곡선는 뇌하수체내 다른 peptide hormone와는 교차반응을 거의 나타내지 않았다. Testosterone을 처리한 미성숙 무지개 송어의 뇌하수체 세포배양계를 이용하여 sGnRH에 의한 GTH II 분비량을 본 sandwich EIA계와 RIA계를 비교 조사한 결과, 거의 같은 분비량을 나타냈을 뿐만아니라 같은 분비 pattern을 나타냈다. 이러한 결과로부터 본 sandwich법 EIA계에 의해서 연어과 어류의 뇌하수체 추출물 및 뇌하수체 배양액 중의 GTH II 함량 및 분비량을 측정하는데 있어서 안정된 assay계라고 생각되어진다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제32권4호
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• pp.243-248
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• 1994

질편모충 항원 분석의 일환으로 막항원의 분석을 시도하였다 수확 세척된 질편모충 HY-l의 homogenate를 sucrose step-gradient를 이용하여 differential centrifugation하였으며 25%/45%의 sucrose 경계면으로녁터 막분회을 얻었다. 분리된 막분회은 transmission electron microscopy를 통하여 순수 분리되었는지 확인하였고 효소면역 전기영동 이적법(EITB)을 이용하여 항원성을 관찰하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 분리된 막분획은 투과전자 현미경상에서 extended sheet나 concentric vesicle의 형태가 거의 균질하게 분포하고 있었으며 막 분획에서 특징적으로 나타나는 trilaminal appearance를 보여 질편모충의 막분획이 순수 분리된 것으로 간주할 수 있었다. 분리된 막분획은 EITB상에 토끼의 항혈청과 반응하였을 때 46, 60, 110, 120, 130 및 150 kfDa에서 항원성이 있는 반응대가 관찰되었으며 N-hydroxysuccinimido-biotic으로 표지하여 분리된 표면항원의 녁획과 비교하였을 때 60 KDa의 항원 분획이 서로 일치하는 것으로 나타났다. 따라서 60 kfDa 의 항원 분획은 료면 항원임을 확신할 수 있었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제24권1호
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• pp.70-74
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• 2003

The heterogeneous bioluminescence immunoassay for digoxin was developed using photoprotein, native aequorin as a label and the site-directed immobilization technique based on avidin/biotin interaction. Aequorin is a bioluminescence protein, originally isolated from the jellyfish Aequoria Victoria and an attractive label in analytical applications because of sensitive detection due to virtually no background bioluminescent signal. Digoxin is a cardioactive drug, and its therapeutic level in serum is at low concentration with very narrow therapeutic index. The aequorin-digoxigenin conjugates were synthesized by the N-hydroxysuccinimide ester method and characterized in terms of bioluminescent residual activity. The resulting dose-response curve shows that the detection limit is $1.0\;{\times}\;10^{-10}\;M$ and a dynamic range is three orders of magnitude, which was obtained by $1.0\;{times}\;10^{-10}\;M$ conjugate and 0.9 μg/mL anti-digoxin antibody. Three structurally similar molecules to digoxin were examined for their cross-reactivity. None of these three compounds showed any crossreactivity with digoxin antibody employed in this study. Standard amounts of digoxin corresponding to the therapeutic range were spiked into the each serum solution. Study of the serum matrix effect indicated that correlation coefficient shows good agreement between luminescence light intensity between in buffer and in serum.