H. erinaceum의 기능성 소재화 연구의 일환으로, 지금까지 체계적으로 연구된 바 없는 H. erinaceum의 액체배양을 시도하고. 이 버섯의 서로 다른 생물반응기하의 액체배양 특성을 규명하고 대량생산을 검토하였다. 5 L 용량의 jar fermenter와 air-lift fermenter에서의 액체배양의 비교실험을 통해 air-lift fermenter의 사용이 종균 배양에 적합한 것으로 나타났으며, 형태 분석을 통해 적정 크기($2{\sim}4mm$)의 pellet 형태의 유지가 대량 생산의 중요인자인 것을 규명하였다. Air-lift fermenter 하의 배양을 종균으로 하고, 적정 크기의 pellet을 유지하는 500 L까지의 jar fermenter를 사용한 회분 배양의 scale-up 실험결과, 30 및 500 L에서의 교반 및 통기속도는 각각 200 rpm, 1 vvm 및 150 rpm, 1 vvm이었다. 이 조건하에서 배양의 전 기간 중 적정 pellet을 유지하였으며, 최대 균사체량은 약 $13{\sim}14g/L$이었다.
Sclerotinia sclerotiorum attacks most of the vegetable crops in the Jordan valley. Twenty-five samples/isolates were obtained in a complete coverage of that region. They were characterized for their mycelium incompatibility, and specific gene amplified using the primer SSREV/SSFWD. All isolates gave similar single band around 278 bp. Thirteen isolates were completely incompatible with the other 12 ones. The latter ones fell into four subgroups of mycelium incompatibility. RAPD analysis using three primers (OPA-2, OPA-10, and OPA-18) clustered the 25 isolates into subgroups in agreement with their morphological separation, indicating close correlation between amplified gene(s) and the gene(s) of incompatibility. All highly virulent isolates were among the group of 13, indicating a well established genomic type pathogen in this region.
The effect of agitation speed on the production of mycelial growth and exo-biopolymer in bioreaetor culture was investigated. The maximum production of mycelia and exo-biopolymer was obtained at 350 rpm, where the maximum concentrations of mycelial growth and exo-biopolymer were 62 g/L and 23 g/L, respectively. The effect of agitation speed on the hyphal length and the number of tips was examined. The hyphal length and the number of tips of Cordyceps sinensis 16 in bioreaetor culture at 350 rpm were increased up to 660 ${\mu}m$ and 14/ml, respectively.
The effects of pH on the cell growth, the elaboration of pullulan, and the morphology of Aureobasidium pullulans IFO 4464 were examined. A. pulluans grew in yeast-like form at constant pH7.5 and in mycelial form at constant pH2.5. At the both pH conditions, the elaboration of pullulan was very low, about 6.0~6.5g/l. The mixture of yeast-like form and mycelial form of cells was found at the constant pH4.5, at which condition, the elaboration of pullulan was high, about 24.5g/l. The pH shift experimemts showed that the specific production rates of pullulan were 0.048($hr^{-1}$)for the mycelial form and 0.058($hr^{-1}$)for the yeast like form, which indicated that the yeast-like form has the similar, only slightly higher, biosynthetic activity of pullulan to the mycelial form at pH4.5 and the pH of culture broth is more important factor for the elaboration of pullulan than the morphology of A. pullulans.
느타리버섯 8품종의 균사생장은 $25{\sim}30^{\circ}C$의 온도 범위와 $5.5{\sim}6.5$의 pH 범위에서 가장 우수하였다. 영양원의 선발시험에서 탄소원으로서는 황백당, 밀가루 및 옥수수가루가, 그리고 질소원으로서는 대두분이 공시균주의 균사생장이 가장 우수하였다. 농업적으로 이용성이 우수한 황백당 3%, 대두분 0.3%, 인산칼륨 0.05%, 황산마그네슘 0.05%를 배지 조성으로 하는 농업용 액체배지를 선발하였다. 삼각플라스크 배양에서는 250 ml의 erlenmeyer flask에서 보다는 250ml의 shake flask에서 직경 6 mm의 균사절편을 2개 접종하여 배양액량 100ml에서 배양했을 때 공시균주의 균사체 생산이 우수하였다. 그리고 erlenmeyer flask에서 배양방법을 달리하여 느타리버섯의 균사를 배양하였을 때, $45^{\circ}$ 경사배양한 처리구에서 균사체 생산이 가장 우수하였으며, 길이 $50mm{\times}$ 직경 10mm의 유리막대를 넣고 배양한 처리구에서는 균체량이 가장 적었지만 펄프형의 균사생육을 유도할 수 있었다.
본 연구는 인공배지(Rice Polish Agar) 위에서 자라는 문고병균(C. sasakii)의 균사생장, 색소형성 및 균핵형성에 미치는 광선의 영향을 구명하기 위하여 배양적 성질이 다른 두균주(D-3, D-15)를 사용하여 실시하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 두 균주 모두 연속관선조사구, 광암교호구 및 암처리구에서 균사 생장량에 차이가 없었다 그리고 균주 D-3는 균사 및 배양기가 갈색으로 착색되엇고 암처리구보다 관선조사구에서 더 많이 착색되었으나 균주 D-15에서는 갈색 색소형성이 없었다. 2) 균핵형성에 미치는 광선의 영향은 두 균주간에 차이가 있었다. 즉 균주 D-15는 각 처리간의 총 균핵형성량에는 유의차가 없었으나, 암처리구에서 광암교호구 및 연속 광선조사구 보다 대형균핵이 많이 형성되었다. 반면 균주 D-3는 연속광선조사구에서는 많은 균핵을 광암교호구에서는 중간정도, 암처리구에서는 적은량의 균핵을 형성하였다.
각종 버섯에서 항혈전 활성균주를 선별하기 위해 보관 균주 50여종과 임업협동조합에서 분양 받은 20여종의 균주를 대상으로 항혈전 활성을 검색한 결과, 항혈전 활성이 167 sec를 나타낸 상황버섯(Phellinus linteus)을 선별하였다. 본 균주가 생산하는 항혈전 활성의 본체를 파악하기 위해 pronase 처리와 periodate 산화를 행한 결과 pronase로 처리한 시료는 무처리군과 비교하여 차이가 없었던 반면 periodate로 산화시킨 시료는 항혈전 활성이 크게 감소함에 따라 P. linteus가 생산하는 항혈전 활성의 본체는 다당에 기인되는 것으로 추정되었다. 항혈전 생산을 위한 최적 배양조건은 soluble starch 3.0%, peptone 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1%, 초기 pH 7.0, 배양온도 $30^{\circ}C$ 및 교반속도 150 rpm이었다. 상기의 최적 배양조건에서 jar fermentor로 10일 배양하였을 때 390 sec의 항혈전 활성과 7.5 mg/mL의 균사체 생육을 나타내었다.
뽕나무 버섯균은 식용버섯으로써 노인병, 중풍, 현기증, 두통, 신경쇠약, 불면증, 사지마비, 소아마비, 간질 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있으므로, 뽕나무 버섯 균사체의 고농도 배양을 위한 최적 조건확립 하고자 하였다. 뽕나무 버섯균사체 생산의 최적배지 선정을 위하여 7종의 배지를 대상으로 수행한 결과 맥아즙배지가 뽕나무 버섯 균사체 생산에 가장 우수하였다. 맥아즙 배지에서 뽕나무 버섯균 균사체 생산을 위한 적정조건은 맥아즙 농도 $15\;Brix^{\circ}$이었으며 온도, pH, 배양기간의 조건을 반응표면 분석법에 의해서 실행한 결과, $25.9^{\circ}C$, pH 5.72, 15.22일의 배양에서 3,40 g/50 ml의 최대 예측치를 나타내었다. 이는 실제 실험결과치와도 대체로 일치하는 경향이었다.
This study was concerned with the optimization of liquid culture conditions for mycelial growth and polysaccharide production and its physicochemical properties in Cordyceps militaris. The one factor at a time method was adopted to investigate the effects of medium composition, environmental factors and C/N ratio. Among the these varialbles, glucose 80g/L, yeast extract 10g/L, $MgSO_4{\cdot}7H_{2}O\;0.5g/L$, $KH_{2}PO_4\;0.5g/L$ were proved to be the most suitable carbon, nitrogen, and mineral sources, respectively. The optimal temperature, initial pH, working volume were identified to be $24^{\circ}C$, 7.0 and 100ml, respectively. Under the optimal conditions, the strategies in shake flask culture and 5L jar fermentor led to mycelial growth of 29.43 g/L, 28.88g/L and polysaccharide production of 2.53g/L, 6.38 g/L, respectively. Among the phisicochemical properties, relative concentrations(w/v) of total sugar, uronic acid, protein and hexoseamine were identified to be 74.07%, 1.13%, 0.91%, and 0.46%, respectively. The fraction of neutral and acidic polysaccharide were identified to be 81.9% and 18.1%, respectively.
In order to increase the mycelial production of Phellinus linteus, which exhibits potent anticancer activity, some ingredients of the medium used to culture P. linteus were investigated. The optimal medium composition for the production of Phellinus linteus was determined to be as follows: fructose, 40 g/l; yeast extract, 20 g/l; $K_2HPO_4$, 0.46 g/l; $K_2HPO_4$, 1.00 g/l; M$MgSO_4\cdot7H_2SO$, 0.50 g/l; $FeCl_2\cdot6_2O$, 0.01 g/l; $MnCl_2\cdot4H_2O$, 0.036 g/l; $ZnCl_2$, 0.03 g/l; and $SuSO_4\cdot7H_2O$, 0.005 g/l. The optimal culture conditions were determined to be as follows: temperature, 28$^{\circ}C$; initial pH, 5.5; aeration, 0.6 vvm; and agitation, 100 rpm, respectively. Under optimal composition and conditions, the maximum mycelial biomass achieved in a 5 l jar fermentor was 29.9 g/l.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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