우리 나라의 양식 해산어에서 분리된 종양을 유발하는 iridovirus가 폐사를 유발하는 iridovirus와 같은 종류인지를 확인하기 위하여 면역학적 특성을 비교하여 보았다. SDS-PAGE를 통하여 이들 바이러스의 구조단백질을 비교한 결과 종양을 유발하는 iridovirus와 폐사를 유발하는 iridovirus는 서로 다른 크기의 단백질을 소유하는 것으로 확인되었다. 종양을 유발하는 iridovirus에 대한 단일클론항체를 사용한 Western blotting실험을 통하여 구조 단백질의 항원성을 조사한 결과 종양을 유발하는 iridovirus 의 경우 분자량 150 kDa의 구조단백질이 면역 유도 특성이 있음이 확인되었다. 반면에 폐사를 유발하는 iridovirus는 종양을 유발하는 iridovirus에 대한 단일클론항체들과는 전혀 반응을 하지 않았다. 이 결과로부터 종양을 유발하는 iridovirus와 폐사를 유발하는 iridovirus의 구조단백질들은 서로 다른 항원성을 지님을 알 수 있었으며 이는 두 iridovirus들이 서로 다른 type일 가능성이 높음은 나타내고 있다.
PCR을 사용하여 양식 해산어에 iridovirus 감염 여부를 신속히 진단하고자 하였다. 먼저 폐사를 유발하는 iridovirus의 genomic DNA를 pUC19 vector에 cloning한 후 이 clone들의 염기 서열을 GenBank의 염기 서열과 비교 분석하였다. 이들의 염기 서열을 기초로 하여 PCR primer를 제조한 후 PCR을 수행하였다. 정상적인 어류 세포에서는 DNA의 증폭이 일어나지 않았으나 iridovirus에 감염된 세포와 순수 분리된 iridovirus에서는 DNA의 증폭이 일어났다. 이로부터 짧은 시간 내에 폐사를 유발하는 iridovirus를 신속히 진단할 수 있음이 확인되었으며 이러한 PCR을 이용한 진단은 iridovirus의 감염을 확인할 수 있는 간단하고도 정확한 방법을 제공해준다.
Won, Kyoung-Mi;Cho, Mi Young;Park, Myoung Ae;Jee, Bo Young;Myeong, Jeong-In;Kim, Jin Woo
Fisheries and Aquatic Sciences
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제16권2호
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pp.93-99
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2013
In 2009, a systemic megalocytivirus infection associated with high mortality was detected for the first time in cultured starry flounder Platichthys stellatus in Korea. Diseased starry flounder had pale bodies and gill coloring and enlarged spleens. Histopathological examinations revealed basophilic enlarged cells in various organs of diseased starry flounder. Polymerase chain reaction (PCR) was performed on tissue samples using three published primer sets developed for the red sea bream iridovirus. PCR products were detected for all primer sets, except 1-F/1-R, which are registered by the World Organization for Animal Health (OIE). The part of the gene corresponding to the full open reading frame encoding the viral major capsid protein (MCP) was amplified by PCR. PCR products of approximately 1,581 bp were cloned, and the nucleotide sequences were analyzed phylogenetically. The MCP gene of the starry flounder iridovirus, designated SFIV0909, was identical to that of the turbot reddish body iridovirus (AB166788).
To determine whether rock bream Oplegnathus fasciatus can be protected from rock bream iridovirus (RBIV) infection by intramuscular injection of long double-stranded RNAs (dsRNAs), we compared protective effect of virus-specific dsRNAs corresponding to major capsid protein (MCP), ORF 084, ORF 086 genes, and virus non-specific green fluorescent protein (GFP) gene. Furthermore, to determine whether the non-specific type I interferon (IFN) response was associated with protective effect, we estimated the activation of type I IFN response in fish using expression level of IFN inducible Mx gene as a marker. As a result, mortality of fish injected with dsRNAs and challenged with RBIV was delayed for a few days when comparing with PBS injected control group. However, virus-specific dsRNA injected groups exhibited no significant differences in survival period when compared to the GFP dsRNA injected group. Semi-quantitative analysis indicated that the degree of antiviral response via type I IFN response is supposedly equal among dsRNA injected fish. These results suggest that type I IFN response rather than sequence-specific RNA interference might involve in the lengthened survival period of fish injected with virus-specific dsRNAs.
Zenke, Kosuke;Yoon, Ki Joon;Kim, Min Sun;Choi, Seung Hyuk;Kim, Ki Hong
한국어병학회지
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제27권2호
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pp.85-89
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2014
Water temperature is a key environmental factor controlling the epizootics of viral diseases in fish. High water temperature is associated with the rapid spread of rock bream iridovirus (RBIV) disease and with high mortality of RBIV infected fish. Although protection of fish against iridoviral disease by active immunization has been reported, little information is available concerning whether fish survived from an epizootic of iridoviral disease can naturally acquire resistance against the viral disease. In the present study, we have demonstrated that juvenile rock bream, which survived from a natural epizootic of RBIV, acquired resistance against recurrence or reinfection of RBIV, and this resistance was established during the subsequent low water temperature period. Furthermore, the possible involvement of the adaptive humoral immune response in the resistance of the juvenile rock bream was suggested by in vivo neutralization experiment.
Rock bream iridovirus (RBIV) causes high mortality and economic losses in rock bream (Oplegnathus fasciatus) aquaculture industry in Korea. Although, the immune responses of rock bream under RBIV infection have been studied, there is not much information at the different stages of infection (initial, middle and recovery). Gene expression profiling of rock bream under different RBIV infection stages was investigated using a microarray approaches. In total, 5699 and 6557 genes were significantly up- or down-regulated over 2-fold, respectively, upon RBIV infection. These genes were grouped into categories such as innate immune responses, adaptive immune responses, complements, lectin, antibacterial molecule, stress responses, DNA/RNA binding, energy metabolism, transport and cell cycle. Interestingly, hemoglobins (α and β) appears to be important during pathogenesis; it is highly up-regulated at the initial stage and is gradually decreased when the pathogen most likely multiplying and fish begin to die at the middle or later stage. Expression levels were re-elevated at the recovery stage of infection. Among up-regulated genes, interferon-related genes were found to be responsive in most stages of RBIV infection. Moreover, X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP)-associated factor 1 (XAF1) expression was high, whereas expression of apoptosis-relate genes were low. In addition, stress responses were highly induced in the virus infection. The cDNA microarray data were validated using quantative real-time PCR. Our results provide novel inslights into the broad immune responses triggered by RBIV at different infection stages.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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