• Toxicological Research
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• 제25권4호
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• pp.189-193
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• 2009

Hypoxia inducible factor $1\alpha$ (HIF-$1\alpha$) is a potential marker of carcicnogenesis since it is overexpresssed in many human cancers such as brain, breast, and uterus, and its role has implicated in tumor cell growth and metastasis. In this study, we established a stable cell line that express green fluorescence protein (GFP)-fused hypoxia inducible factor $1\alpha$ (HIF-$1\alpha$) and evaluated the potential use of this cell line for assessment of carcinogenicity of chemical toxicants. Western blot analysis as well as fluorescence measurements showed that protein-level of GFP-HIF-$1\alpha$ was significantly enhanced in a dose-dependent manner upon treatment of hypoxia mimicking agents such as dexferrioxamine and $CoCl_2$. Well-Known tumor promoters such as mitomycin and methyl methanesulfonate. significantly induced the fluorescence intensity of GFP-HIF-$1\alpha$, whereas the known negative controls such as o-anthranilic acid and benzethonium chloride, did not. These results indicate that HIF-$1\alpha$ could be a biological parameter for detection of tumor initiators/promoters and suggest that the GFP-HIF-$1\alpha$ cell line is a useful system for screening of carcinogenic toxicants.

• 한국동물학회지
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• 제26권3호
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• pp.171-179
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• 1983

MMS와 자외선에 의한 DNA의 절제회복과 단사절단에 미치는 poly(ADP-ribose) polymerase의 저해제인 3-aminobenzamide의 영향을 CHO 세포를 재로로 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. MMS에 의한 비주기성 DNA 합성률과 DNA 단사 절단률은 이 저해제에 의해 모두 증가하였다. 이는 poly (ADP-ribose) polymeraserk MMS에 의해 유발된 염기 절제회복의 incision step를 억제하는 결과라 생각된다. 2. 자외선에 의한 비주기성 DNA 합성률과 DNA단사 절단률은 이 저해제에 의해 모두 감소하였다. 이는 poly(ADP-ribose) polymerase가 자외선에 의해 유발된 nucleotide 절제회복의 incision step을 돕는 작용을 하는 결과로 생각된다. 3. MMS와 자외선을 복합처리한 실험군에서는, DNA 단사 절단률은 이 저해제에 의해 영향을 받지 않았으며, 비주기성 DNA 합성률은 자외선 단독 처리군의 수준으로 증가되었다. 이는, 이 저해제가 MMS와 자외선으로 유발된 절제회복의 incision step에는 독립적으로 작용하며, 그 이후의 단계에서, MMS에 의해 부분적으로 불활성화 되었던 pyrimidine dimers의 절제를 완전하게 해주는 것으로 해석된다.

• 미생물학회지
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• 제38권2호
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• pp.96-102
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• 2002

S기 checkpoint기작은 DNA복제 저해나 DNA상해 등에 반응하여, S기 세포주기 정지를 일으키거나 상해 회복에 관련된 유전자들의 전사가 유도됨으로서 진핵세포에서의 유전적인 안정성을 유지한다. 이러한 반응에 대한것ba11 변이주의 결손을 확인하기 위해서, nPB11 (DNA polymerase B possible subunit)유전자의 과다발현 효과에 대해 조사하고, HU (Hydroxyurea)와 MMS (Methyl methanesulfonate)에 대한 감수성 및 DNA상해 물질에 의한 RNR3 (Ribonulectide reductase) mRNA의 전사 유도를 조사하였다. RNR3 mRNA의 전사는 DNA합성 저해에 의해 발생한 스트레스나 화학물질에 의한 직접적 인 DNA상해 등에 의해 유도되어진다. 그 결과, dpb11-1변이주는 DNA상해 물질에 감수성을 나타내었고, RNR3 mRNA전사유도 또한 야생형 균주에 비해 약 40% 정도 감소를 나타내었다. 더욱이 dpb2-1 균주에서도 이와 동일한 결과를 얻었다. 그러므로 DPB2와 DPB11 유전자는 복제에 대한 sensor로서, 복제 정지 요인에 대한 세포주기 반응과 전사 조절에 모두 작용하는 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제16권1호
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• pp.126-130
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• 2006

본 연구는 DNA상해유도기작을 규명하기 위하여 하등 진핵생물인 분열형 효모 Schizosaccharomyces pombe로부터 subtraction hybridization방법을 이용하여 자외선 유도 유전자인 UVI-155을 분리하고 그 유전자 구조와 발현양상을 조사하였다. UVI-155 유전자의 발현양상을 Northern hybridization 방법으로 살펴본 결과 자외선(ultraviolet-light) 조사 1시간 후에 최대의 발현 증가를 나타내었다. 반면 알킬화제 인 MMS (methyl methanesulfonate) 처리에 의해서도 발현이 증가되었다. 이 결과 다른 UV-inducible 유전자와는 다르게 UVI-l55 유전자는 UV와 MMS 등의 DNA 상해에 모두 발현이 증가됨을 알 수 있었다. 또 한 유전자의 기능을 알기 위하여 null-mutant세포 주를 제조하여 그 특성을 살펴본 결과 이 유전자는 세포의 성장에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1998년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.113-113
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• 1998

In Saccharomyces cerevisiae UV irradiation and a variety of chemical DNA -damaging agents induce the transcription of specific genes, including several involved in DNA repair. One of the best characterized of DNA -damage inducible genes is PHRI, which encodes the apoenzyme for DNA photolyase. Basal-level and damage-induced expression of PHRI require an upstream activation sequence, UASPHRI. Here we report the identification of the UlvIE6 gene of S. cerevisiae as a regulator of UASPHRl activity. Surprisingly, the effect of deletion of UME6 is growth phase dependent. In wild-type cells PHRI is induced in late exponential phase, concomitant with the initiation of glycogen accumulation that precedes the diauxic shift. Deletion of UNIE6 abolishes this induction, decreases the steady-state concentration of photolyase molecules and PHRI mRNA, and increases the UV sensitivity of a rad2 mutant. The results suggest that UM E6 contributes to the regulated expression of a subset of damage-responsive genes in yeast. Furthermore, the upstream repression sequence, URSPHRI, is required for repression and damage-induced expression of PHRl. Here we show identification of YER169W and YDR096W as putative regulators acting through $URS_{PHRI}$. These open reading frames were designated as RPHI (YERl69W) and RPH2 (YDR096W) indicating regulator of PHRI. Simultaneous disruption of both genes showed a synergistic effect, producing a four-fold increase in basal level expression and a similar decrease m the induction ratio following treatment of methyl methanesulfonate(MMS). Mutation of the sequence ($AG_4$) bound by Rphlp rendered the promoter of PHRI insensitive to changes in RPHI or RPH2 status. The data suggest that RPHI and RPH2 act as damage-responsive negative regulators of PHRI. Surprisingly, the sequence bound by Rphlp in vitro is found to be $AG_4$ which is identical to the consensus binding site for the regulators Msn2p and Msn4p involved in stress-induced expression. Deletion of MSN2 and MSN4 has little effect on the induction$.$ ratio following DNA damage. However, all deletions led to a significant decrease in basal-level and induced expression of PHRI. These results imply that MSN2 and MSN4 are positive regulators of P HRI but are not required for DNA damage repression. [Supported by grant from NIH]om NIH]

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권3호
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• pp.633-643
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• 2017

To examine the pro-apoptotic role of the human ortholog (YPEL5) of the Drosophila Yippee protein, the cell viability of Saccharomyces cerevisiae mutant strain with deleted MOH1, the yeast ortholog, was compared with that of the wild-type (WT)-MOH1 strain after exposure to different apoptogenic stimulants, including UV irradiation, methyl methanesulfonate (MMS), camptothecin (CPT), heat shock, and hyperosmotic shock. The $moh1{\Delta}$ mutant exhibited enhanced cell viability compared with the WT-MOH1 strain when treated with lethal UV irradiation, 1.8 mM MMS, $100{\mu}M$ CPT, heat shock at $50^{\circ}C$, or 1.2 M KCl. At the same time, the level of Moh1 protein was commonly up-regulated in the WT-MOH1 strain as was that of Ynk1 protein, which is known as a marker for DNA damage. Although the enhanced UV resistance of the $moh1{\Delta}$ mutant largely disappeared following transformation with the yeast MOH1 gene or one of the human YPEL1-YPEL5 genes, the transformant bearing pYES2-YPEL5 was more sensitive to lethal UV irradiation and its UV sensitivity was similar to that of the WT-MOH1 strain. Under these conditions, the UV irradiation-induced apoptotic events, such as FITC-Annexin V stainability, mitochondrial membrane potential (${\Delta}{\psi}m$) loss, and metacaspase activation, occurred to a much lesser extent in the $moh1{\Delta}$ mutant compared with the WT-MOH1 strain and the mutant strain bearing pYES2-MOH1 or pYES2-YPEL5. These results demonstrate the functional conservation between yeast Moh1 and human YPEL5, and their involvement in mitochondria-dependent apoptosis induced by DNA damage.

• 미생물학회지
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• 제30권5호
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• pp.371-376
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• 1992

플라스미드 pKM101 과 이의 돌연변이체 pSL4 는 UV 및 MMS 에 대해 높은 치사 저항성과 돌연변이률을 나타낸다. pKM101 과 pSLA 의 mucB 유전자의 일부분과 mucA 유전자를 lacZ fusion 벡터인 pMC874 에 subcloning 시켜 플라스미드 pBH31 과 pBH30 을 선별하였고 이 플라스미드들을 $recA^{+}lexA^{-}$, $recA^{-}와lexA^{+}$, 균주에 각각 도입하였다. $recA^{+}lexA^{+}$ 균주에서 pSLA 의 muc 유전자를 포함하는 pBH30 의 $\beta$-galactosidase활성은 pKM101 의 muc 유전자가 연결된 pBH31 보다 높았고 $recA^{-}$ 와 $lexA^{-}$ 돌연변이주에서는 UV 조사의 유무에 관계없이 $\beta$-galactosidase를 유도하지 못하였지만 $recA^{-}$ 균주에서는 UV 조사를 하지 않았을 때 pBH30 의 $\beta$-galactosidase가 pBH31 보다 약간 높게 유도되었다. 이러한 결과는 pKM101 과 pSLA 의 기능적 차이가 두 플라스미드의 Muc 단백질의 구조적 차이라고 생삭할 수 있지만, muc 유전자의 조절부위가 돌연변이되너 LexA repessor 가 작용하는 부위의 변화에 의한 것이라고도 생각햐ㄹ 수 있었다. 또한, umuC-lacZ 유전자를 가지는 pBH100 를 construction 하여 umu oeron 의 발현은 UV 조사에 의해 유도되며 recA 와 lexA 유전자에 의해 조절됨을 알 수 있었다.