본 연구는 methicillin 내성 Staphylococcus aureus (MRSA)에 특이적인 유전자인 mecA 유전자를 검출하기 위하여 전라북도의 두 병원에서 황색포도상구균 31주를 분리하였다. 이중 penicillin에 내성인 20균주를 디스크 확산법을 이용하여 methicillin, oxacillin, ampicillin, vancomycin, penicillin에 대한 다약제 내성 성상을 확인하였고, 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 mecA 유전자를 확인하였다. 디스크 확산법을 실시한 결과 methicillin 내성균주는 20균주 중 10주 (50%)였다. Methicillin에 내성인 10균주를 PCR법으로 확인한 결과 7주에서 554 bp의 DNA증폭이 관찰되어 mecA 유전자가 존재함을 확인하였다.
Methicillin-resistant staphylococci를 신속하게 검출하기 위한 방법으로 mecA polymerase chain reaction을 이용하고 결과를 항생제 감수성 검사와 비교하였다. 국내 병원에 입원중인 환자와 종사자로부터 총 43개의 staphylococci를 분리하여 항생제 감수성 시험을 실시한 결과, 43균주 중 methicillin 내성 균주(MRS)는 39 균주, 감수성 균주(MSS)는 4균주이었다. PCR시험결과, methicillin 내성 균주에서는 MRSC (methicillin-resistant Staphylococcus cohnii), 1 균주(HRC2-4)를 제외하고 mecA 유전자에 해당하는 533bp의 절편이 중폭되었다. 한편, methicillin 감수성으로 분류된 MSSA (methicillin-susceptable Staphylococcus aureus), 1 균주(HSA1-10)에서도 mecA 유전자가 중폭되어 항생제 감수성과 상반된 결과를 보였다. 모든 MSSA는 mecA 양성을나타내었으나, 전체적으로 mecA 유전자의 유무는 항생제 감수성 검사와 95.6%의 일치를 나타냈다.
To improve the detection of methicillin resistant staphylococci, lowered incubation temperature (30.deg.) and inclusion of sodium chloride in media have been empirically recommended. However, in this study, we found that sodium chloride in Peptone-Yeast Extract-K$\_$2/HPO$\_$4/ (PYK) medium decreased methicillin minimum inhibitory concentrations. Divalent cations were shown to restore the expression of staphylococcal methicillin resistance. However, when it was determined by efficiency of plating, sodium chloride increased methicillin resistance expression on agar medium in which higher divalent cations were contained in the agar medium. The decrease of minimum inhibitory concentrations at 30.deg.C by sodium chloride occurred in Brain Heart Infusion but did not occur in other media investigated. Interestingly, both PYK and Brain Heart Infusion media had peptone, which contain cholic acids having detergent activities. Inclusion of sodium chloride in PYK caused a higher rate of autolysis. Penicillin binding protein 2a that has a low affinity to beta-lactam antibiotics, was highly inducible in methicillin resistant Staphylococcus epidermidis strains. In this study, we found that autolysins that are activated by the sodium chloride decreased the minimum inhibitory concentration at 30.deg.C, and peptidoglycan is weakened due to the presence of methicillin. Peptone in the media may aggravate the fragile cells. However, stabilization due to the presence of divalent cations and production of penicilin binding protein 2a increase the survival of staphylococci.
Methicillin 내성 포도상구균은 전세계적으로 사람과 동물에서 중요한 병인체로 주목 받고 있다. 본 연구는 국내 말과 말을 취급하는 사람에서의 methicillin 내성 포도상구균 발생현황을 조사하고자 실시하였다. 국내 경주마 목장에 소재하는 총 195두의 말과 18명의 말을 취급하는 사람(8명의 수의사, 7명의 말 관리사, 3명의 동물병원 직원)을 대상으로 하였다. 면봉을 이용하여 한쪽 비강에서 시료를 채취하여 세균수송배지에 보관 후 5% 양 혈액배지에서 $37^{\circ}C$ 3일간 배양하여 포도상구균 존재여부를 확인하였다. 포도상구균은 16S rRNA 유전자 분석을 실시하여 동정하였으며, 동정된 포도상구균은 coagulase 검사를 실시하였다. Methicillin 저항성을 확인하기 위하여 oxacillin 디스크 검사와 함께 mecA 유전자 존재를 PCR을 통하여 확인하였다. 검사를 실시하였던 말 195두 중 64두가 포도상구균으로 동정되었으며, 이중 29두(44.6%)가 methicillin 내성 포도상구균으로 확인되었다. 말을 취급하는 18명 중 14명의 시료에서 포도상구균이 동정되었으며, 이중 12명(85.7%)의 시료에서 methicillin에 내성을 가지고 있는 포도상구균으로 확인되었다. 말과 사람에서 동정된 모든 methicillin 내성 포도상구균은 coagulase 음성으로 확인되었다. 또한 항생제의 사용기간이 긴 개체에서 사용기간이 짧았던 개체군보다 methicillin 내성 포도상구균이 높은 것으로 나타났다(p = 0.002). 본 연구결과는 사람과 말 사이에서 인수공통전파가 일어날 수 있음을 시사한다.
임상가검물에서 생화학 검사와 항생제 감수성 검사를 통하여 45주의 Staphylococcu aureus를 분리하여 역학적 연구를 위한 형별 분류로써 항생제 감수성 검사, bacteriophage typing,효소중합 연쇄반응 등을 실시하였으며, methicillin 내성과 관련이 있는 mecA 유전자를 검출 및 역학적 변별력이 있는 가변지역의 중합효소증폭반응을 실시하여, 약제 내성과 관련된 구조 유전자의 발현 양상을 비교하여 특정 유전자 배열의 상동성을 밝히고자 하였다. 45주의 Staphylococcus aureus중에서 mecA 유전자 양성주는 30주였으며, 그 중에서 26주가 methicillin에 내성을 보였다. 약제 내성양상에 따라 9개의 antibiogram으로 분류되었으며, SA6을 제외한 균주에서 penicillin, oxacillin, gentamicin 및 chloramphenicol 에서는 높은 내성을 보였으며, SAl3, SAl4 및 SA27에서는 rifampin에 내성을 보였다. 27주에서 bacteriophage 형별 분류가 가능하였으며, Iytic group III가 12주로 가장 많았다. mecA 유전자와 mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction을 실시한 결과 모든 methicillin resistant Staphylococcus aureus 에서는 533 bp의 증폭 band가 관찰되었으나, methicillin 감수성 균주에서는 증폭된 band가 관찰되지 않았다. mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction에서는 200 bp에서 600 bp사이에 분포하여 4개의 유형으로 분류되었으며, 410bp인 C형이 10균주로 가장 많았다. C형 가변부위의 DNA sequence에서 40 bp가 반복되는 dru sequence를 관찰할 수 있었으며, 이러한 dru sequence는 4 unit가 직접적으로 중복됨을 알 수 있었다.
Osteomyelitis of the jaw infected with Coagulase-Negative Staphylococci (CNS) is rarely reported in the Oral and Maxillofacial Region. Staphylococcus is a part of the normal body flora, but it may be cause severe infections and CNS are often described as the important pathogens in nosocomial infections. Although many studies on prevalence and antibiotics of Staphylococcus aureus have been done, but many of these studies focus only on Methicillin-resistant S. aureus and not on methicillin-resistant coagulase-negative Staphylococci (MRCNS). There was a less study about CNS or MRCNS infections in the Oral and Maxillofacial Region. This report describes a case of a 41-year-old male patient who developed osteomyelitis caused by MRCNS on condyle after open reduction and internal fixation and suggests guideline for the prevention of postoperative infection and appropriate recommendation for treatment and control.
This study was carried out to examine antimicrobial substances from medicinal plants, the ethanol extracts of 38 medicinal plants were tested for the antimicrobial activity against Staphylococcus aureus ATCC 25923 and methicillin-resistant Staphylococcus aureus ATCC 43300. The extracts of Glycyrrhiza uralensis, Sophora flavescens, Dryopteris crassirhizoma, and Pinas densiflora showed significant antimicrobial activities against both S. aureus ATCC 25923 and methicillin-resistant S. aureus ATCC 43300. The extract of Dryopteris crassirhizoma among these medical plants showed the highest antimicrobial activity. These results suggested that the extracts from Dryopteris crassirhizoma, Sophora flavescens, Pinas densiflora, and Glycyrrhiza uralensis could be the potential source of antimicrobial agents against methicillin-resistant S. aureus and S. aureus.
사람 혈액속의 elastase와 관련된 질병에 대한 연구는 다양한 저해제의 개발을 동반해 왔으며, 최근 항생제도 그 관심대상이 되고 있다. 두 단계의 액체 크로마토그래피를 거쳐 얻은 고순도의 elastase에 12종의 항생제를 처리하였다. 세포벽합성 저해제로 알려져 있는 penicillin계와 cephalosporin계 항생제를 각각 3종씩 처리한 결과, methicillin과 cefamandole은 10mM 농도에서 elastase 활성을 50% 이상 저해하였지만, 나머지는 거의 10% 미만이었다. 단백질합성 저해제 중 oxytetracycline의 elastase에 대한 저해효과는 10mM 농도에서 95% 이상으로 매우 탁월하였으며 $(IC_{50}=0.3mM)$, gentamicin도 50% 이상 저해하였으나, 다른 aminoglycoside나 chloramphenicol은 역시 10%미만이었다. 실험해 본 항생제 가운데, oxytetracycline, cefamandole, methicillin, gentamicin 등은 elastase에 대한 강력한 저해제였으며, 그 작용기전은 항생제의 알려진 약리학적 기전과는 다른 차원의 모델임이 분명하였다.
Thirty strains of methicillin resistant Staphylococcus aureus were obtained from the clinical isolates. In order to investigate the pursuit of the pathogens of nosocomial infection, these strains were studied for antibiotic sensitivity as well as its resistant pattern. Among the methods of hybridization which directly confirm the specific antibiotic resistant genes by means of the recently developed specific probe DNA, dot blot hybridization and southern blot hybridization were performed and these two methods were compared in their sensitivity and specificity. Strains that is sensitive to cephalothin to the subject of methicillin resistant Staphylococcus aureus were in 43%. Those that are sensitive to cefoperazone and cefuroxime were 26% and 23%, respectively. In case of MIC, MIC50 of cefoperazone was 8 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$, and MIC90 was 128 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ to be the lowest. As the results of plasmid DNA electrophoresis, most of methicillin resistant Staphylococcus aureus strains had more than 4 plasmids. These plasmids digested by BamHI, methicillin resistant Staphylococcus aureus is distributed as 10 fragments with the size of 65 kb to 1.5 kb. Dot blot hybridization were performed to examine the existence of mecA gene to show the detection rate of 50%. Southern blot hybridization were done to see if DNA bands which amplify the activity of digoxigenium-labeled probe by PCR were actually PCR products of mecA gene and it showed the detection rate of 53%. It can be concluded that the southern blot hybridization seemed to be better in sensitivity and specificity when it is compared with the results of dot blot hybridization.
Bacteria exist everywhere and continuously come into contact with daily surroundings and humans. Super bacterium methicillin-resistant Staphylococcus aureus, resistant to methicillin, has recently appeared. The morbidity and rate of death associated with super bacteria infection has increased. This study investigated the antibacterial activity of fabrics naturally dyed with Chamaecyparis obtusa leaves extract against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Fabrics were left for 15 min in a natural dyeing solution prepared by extraction from C. obtusa leaves using 11.3% (o.w.f) with a fixed liquor ratio of 1:22 at $40^{\circ}C$. The dyeing process was conducted using three different mordants; subsequently, the K/S value of the dyed fabrics increased in the order of None < Cu < Fe < Al. The color fastness property of the fabrics to washing, dry-cleaning, and rubbing was found to be excellent and ranked in the 4-5 grade. The color fastness to light of natural dyeing is low in most cases and has the problem that the dye color soon becomes bleached. Yet, in most cases cloth dyed with retinispora leaves, the color fastnezz to light was good with a third to fourth grade. Non-mordant fabrics, aluminum mordants, and copper mordants also showed better antibacterial properties (99.9% reduction) against methicillin-resistant Staphylococcus aureus, compared to the control fabrics. The dyed fabrics showed the same antibacterial activity even after three washes. The results highlight the strong potential of fabrics naturally dyed with C. obtusa-extract as a medicinal material with excellent antibacterial function against methicillin-resistant Staphylococcus aureus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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