방사선에의 노출은 염색체 이상을 유발하는 원인으로 널리 인식되고 있으나 in vivo상태에서 방사선 조사 후 발생되는 염색체 이상의 종류와 빈도 규명은 드물었다. 이에 본 연구에서는 암 환자에서 방사선 치료 전 및 후에 말초혈액 임파구의 염색체 변이를 비교 관찰하고 방사선 조사에 의해 암 환자세포에서 나타나는 염색체 이상에서 절단점의 분포가 암 발생과 밀접한 연관이 된 유전자 및 염색체의 재조합이 자주 일어나는 부위와 연관관계 가 있음을 규명하고자 하였다. 25예의 암 환자에서 방사선 치료가 시작되기 전과 $4000\~7000cGy$의 근치적 방사선치료가 끝난 직후 말초 혈액을 채취하여 임파구를 배양후 G-분염법을 이용하여 염색한 후 환자마다 방사선치료 전후로 각각 30개씩의 증기상을 관찰하였다. 치료전에 염색체 이상을 나타낸 세포 분열 중기상의 빈도는 $4.93\%$로 정상 대조군 집단의 빈도 $2\%$보다 높았다(p<0.05). 방사선 치료후 염색체 이상 세포의 빈도는 $22.13\%$로 치료전에 비해 매우 중가되었다(p<0.01). 또한 세포 중기상당 이상 염색체의 수도 치료전과 후가 각각 1.49및 2.14로 치료후 증가 되었다(p<0.05). 염색체 이상의 종류는 major chromosomal aberration 특히 구조적 이상의 빈도가 치료전보다 후에 $65.45\%$에서 $88.45\%$로 증가되었고 minor structural abnormality와 수적 변이의 빈도는 감소되었다. 방사선 치료후 염색체 절단점의 수가 2개 이상인 경우가 단일 절단점을 가진 이상에 비해 증가되었다. 절단점의 분포에 있어서는 암세포에서 가장 흔한 이상을 나타내는 1번 및 3번 염색체와 절단점의 증가가 암 발생관 연관된다고 보고된 8번 및 11번 염색체에서 본 연구결과 기대치 이상의 절단점의 분포를 보이고, 암 세포에서 드물게 이상을 나타내는 13, 15및 21번 염색체에서는 기대치 보다 감소된 절단점의 분포를 보였다. 따라서 방사선 치료 후 염색체 이상의 빈도는 증가되었으며 방사선 조사에 의해 나타나는 염색체의 절단점의 분포는 암 발생과 밀접한 연관이 된 유전자 및 염색체의 재조합이 자주 일어나는 부위와 밀접한 연관 관계가 있음을 보여 주었다.
항암제 mitomycin C가 정상인 배양 임파구의 SCE에 미치는 영향을 알아보기 위해 세포분열지수, 자매염색분체빈도, 세포분열주기 변동 및 염색체군별 SCE 빈도를 조사한 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다. 1) 세포당 SCE빈도는 항암제 mitomycin C의 최저농도인 $6.25{\pm}{\times}10^{-9}$ M에서는 $13.1{\pm}2.8$이었고, 최고 농도인 $1.00{\times}10^{-7}$에서는 $75.8{\pm}8.2$로써 농도 증가에 따라 대수증가를 보였다. 그리고 세포분열지수는 완만한 감소경향을 나타냈다. 2) 세포분열주기 변동은 항암제 mitomycin C의 농도 $2.50{\times}10^{-8}M$에서 대조군에 비해 유의한 세포분열지연 현상을 보였으며 (p<0.05), $5{\times}10^{-8}M$ 이상에서는 세포분열지연이 매우 유의하게 나타났다(p<0.01). 3) 염색체군별 단위염색체당 SCE빈도는 항암제의 농도 증가에 따라 절대 빈도는 증가되었다 할지라도 A군에서 G군으로 갈수록 감소되어 특정염색체군과 SCE와의 관계는 보이지 않았다.
한국에서 재배되고 있는 당귀속 (Angelica) 식물 7종을 대상으로 핵형 분석을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 당귀속 식물들의 기본염색체 수는 x=11로, 체세포 염색체 수는 모든 종에서 2n = 2x = 22로 관찰되었다. 참당귀의 핵형은 K(2n) = 2x = 20m + 2sm, 일당귀의 핵형은 K(2n) = 2x = 12m + 10sm, 당당귀의 핵형은 K(2n) = 2x =16m + 6sm, 고본의 핵형은 K(2n) = 2x = 22m, 바디나물은 K(2n) = 2x = 18m + 4sm, 구릿대는 K(2n)= 2x = 10m + 10sm 2st, 왜친궁은 K(2n)= 2x = 22t로 각각 구분되었다. 염색체 크기는 $3.56\;{\mu}M-8.91\;{\mu}M$ 사이였다. 고본의 체세포 염색체는 모두 중부 염색체로, 왜천궁은 모두 차단부 염색체로만 관찰되어 다른 종들과 이질적인 핵형을 보였다. 한국에 본포하고 있는 당귀속 식물의 핵형과 러시아, 일본, 중국에 분포하는 식물들의 핵형과 비교에서는 일부 다형현상이 관찰되었다.
한국산 쌍구흡충의 계통분류를 하기 위한 연구치 일환으로 한우로부터 코볼드쌍구흡충(Fisthoederius robbozdi)을 채집한 다음 정소부위를 colchicine으로 단시간 처리하는 자연건조법을 응용하여 핵형을 분석하였다. 코볼드쌍구흡충 총 315개체의 생식세포에 대하여 염색체수를 조사한 바 n=9, 2n=18이었으며, 1,904개의 반수체성 중기염색체와 49개의 이배체성 중기염색체를 확인하였다. 이배체성 중기염색체는 7쌍의 중형염색체와 2쌍의 소형염색체로 구성되어 있었고, 반수체성 염색체는 중형 7개와 소형 2개로 구성되어 있었다. 동원체지수는 3번 염색체가 40.4%로서 9쌍중에서 동원체가 염색체의 가장 중앙부위에 위치하는 중부착사 염색체이었으며, 그 나머지의 것들은 32.4∼40.0%이었다. 분염법(C-banding)에 의한 생식세포의 반수체성 염색체는 핵형을 구성하는 이염색질이 거의 모든 염색체의 동원체 부위에 존재하였지만, 1번 염색체는 염색체 첨단에 이염색질이 농염되어 있었으며 .4, 6, 8번 염색체의 이염색질은 크고 진하게 관찰되었다.
Objective: The aim of the present study was to evaluate the clinical efficiency of fluorescent in situ hybridization (FISH) in the prenatal diagnosis of chromosomal aneuploidy. Methods: We reviewed data of 268 cases to identify women undergoing genetic amniocentesis at cytogenetic laboratory, from January 2000 to December 2002. Amniotic fluid was submitted for both rapid FISH on uncultured interphase amniocytes using a commercially available DNA probe for chromosome 13, 18, 21, X, Y and standard karyotyping on cultured metaphase amniocytes. Results from FISH and full karyotype were compared. Results: There were 251 cases (84%) normal and 17 cases (16%) abnormal in FISH results. All 17 cases of trisomy 13, 18, 21 including two cases of mosaicism and sex chromosome aneuploidies which are detected by FISH were confirmed with conventional cytogenetics and there was no false positive result. Twenty two cases had karyotypically proven abnormalities that could not have been detected by the targeted FISH. Conclusion: Interphase FISH analysis of uncultured amniotic fluid cells has been shown to be an effective and reliable technique for rapid fetal aneuploidy screening during pregnancy as an adjunctive test to conventional cytogenetics.
Extremely low frequency electro magnetic fields (EMFs) have been classified as possibly carcinogenic to humans by the International Agency for Research on Cancer. An increased number of chromosomal alterations in peripheral lymphocytes are correlated with elevated incidence of cancer. The aim of the present study was to assess occupationally induced chromosomal damage in EMF workers exposed to low levels of radiation. We used conventional metaphase chromosome aberration (CA) analysis and the micronucleus (MN) assay as biological indicators of non ionizing radiation exposure. In the present study totally 70 subjects were selected including 50 exposed and 20 controls. Informed written consent was obtained from all participants and the study was performed in accordance with the Declaration of Helsinki and the approval of the local ethical committee. A higher degree of CA and MN was observed in exposed subjects compared to controls, the frequency of CA being significantly enhanced with long years of exposure (P<0.05). Moreover increase in CA and MN with age was noted in both exposed subjects and controls, but was significantly greater in the former. The results of this study demonstrated that a significant induction of cytogenetic damage in peripheral lymphocytes of workers occupationally exposed to EMFs in electric transformer and distribution stations. In conclusion, our findings suggest that EMFs possess genotoxic capability, as measured by CA and MN assays; CA analysis appeared more sensitive than other cytogenetic end-points. It can be concluded that chronic occupational exposure to EMFs may lead to an increased risk of genetic damage among electrical workers.
텔로미어란 진핵세포에 존재하는 DNA-protein 복합체로서 염색체의 말단부에 tandem repeated DNA 서열(TTAGGG)n과 특정 단백질로 구성되어 있으며 세포 분열이 진행함에 따라 이의 길이가 짧아지게 되고 일정 길이 이하가 되면 세포의 사망이 유기된다. 텔로미어의 역할은 게놈의 보호자로서 염색체의 안정성에 본질적으로 작용할고 감수분열시 상동염색체간의 접합에 주된 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 소와 돼지의 성축에 대한 텔로미디어의 핵형과 각 염색체상 텔로미어의 양적 분포 양상을 제시하고자 Holstein과 Landrace를 공시하고 이들로부터 섬유아세포 배양으로 중기상을 획득한 다음 human telomeric DNA probe를 이용하여 형광접합보인법(FISH)으로 분석하였다. 실험 결과 소와 돼지의 모든 염색체의 양 말단부에 뚜렷한 텔로미어 프로브의 접합 양상을 발견할 수 있었다. 소의 경우 염색체들 간 텔로미디어의 양적 변이가 나타났으며 돼지의 경우는 모든 분석된 세포에서 특이적으로 6q1의 위치에 interstitial telomere가 존재하였다. 양적형광접합보인법(Q-FISH) 분석 결과 일부 염색체에서 한쪽 말단의 텔로미어 함량이 유의적으로 높은 것으로 분석되었고, 전체적으로 거의 모든 염색체에서 소, 돼지 공히 q-arm 말단주의 함유율이 p-arm 말단부에 비해 높은 것으로 나타났다. 또한, 염색체상 텔로미어의 상대적 함유율은 소가 돼지에 비해 높게 나타났으며, 전체 염색체 중 텔로미어의 상대적 함유율은 소, 돼지 모두 Y 염색체에서 가장 높았다.
This study was performed to determine the developmental potentials of nuclear transfer (NT) embryos using life-span extended cells transfected with a foreign gene as donor cells. A life-span extended bovine embryonic fibroblast cell line was transfected with an expression vector in which the human type II collagen (BOMAR) and ear fibroblasts were used as a donor cell. Cytogenetic analysis was performed to analyze the chromosomal abnormality of donor cells. The fusion rate of 1.8 kV/cm for $15{\mu}sec$ given twice was significantly higher than that of other groups (p<0.05) and the embryos lysed were significantly higher after 1.8 kV/cm for $20{\mu}sec$ given once compared to other groups (p<0.01). The blastocyst development in the ear cell group was statistically significant compared to both BOMAR groups (p<0.01). Both BOMAR groups cultured more than 40 passages (>40 passages) had a lower number of chromosomes; however, fresh granulosa cell (GC) and BOMAR groups cultured less than 20 passages had normal chromosome numbers. Both >40 passages BOMAR groups had numerous obscure debris in metaphase spreads. The transfected foreign gene was expressed in all BOMAR groups, but not in the GC group. Based on these results, the lower developmental potential of NT embryos using life-span extended donor cells transfected with a foreign gene might be a cause of chromosomal abnormality in donor cells.
Kim, Yunna;Kim, Eun-Young;Seo, You-Mi;Yoon, Tae Ki;Lee, Woo-Sik;Lee, Kyung-Ah
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제39권2호
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pp.58-67
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2012
Objective: Previously, we identified that transketolase (Tkt), an important enzyme in the pentose phosphate pathway, is highly expressed at 2 hours of spontaneous maturation in oocytes. Therefore, this study was performed to determine the function of Tkt in meiotic cell cycle regulation, especially at the point of germinal vesicle breakdown (GVBD). Methods: We evaluated the loss-of-function of Tkt by microinjecting Tkt double-stranded RNAs (dsRNAs) into germinal vesicle-stage oocytes, and the oocytes were cultured in vitro to evaluate phenotypic changes during oocyte maturation. In addition to maturation rates, meiotic spindle and chromosome rearrangements, and changes in expression of other enzymes in the pentose phosphate pathway were determined after Tkt RNA interference (RNAi). Results: Despite the complete and specific knockdown of Tkt expression, GVBD occurred and meiosis was arrested at the metaphase I (MI) stage. The arrested oocytes exhibited spindle loss, chromosomal aggregation, and declined maturation promoting factor and mitogen-activated protein kinase activities. The modified expression of two enzymes in the pentose phosphate pathway, Prps1 and Rbks, after Tkt RNAi and decreased maturation rates were amended when ribose-5-phosphate was supplemented in the culture medium, suggesting that the Tkt and pentose phosphate pathway are important for the maturation process. Conclusion: We concluded that Tkt and its associated pentose phosphate pathway play an important role in the MI-MII transition of the oocytes' meiotic cell cycle, but not in the process of GVBD.
A 3-month-old American Cocker spaniel was presented at the Veterinary Teaching Hospital, Chungbuk National University, for examination of urinary tract after dissection of vaginal mass at local clinic before 10 days. Clinical examination of the affected bitch revealed a normal sized vulva in a normal anatomical position with a grossly enlarged clitoris, which contained an os clitoris. On examinations of the genital gland, there were testis, epididymis, ductus deferens and uterus. The histology of both gonads was primarily testis. Seminiferous tubules were divided into many parts by fibrous connective tissue. A small number of spermatogonia was present, but large numbers of Leydig's cells were existed. A normal female karyotype (78, XX) was detected in metaphase spreads obtained from cultured peripheral lymphocytes. Y chromosome specific sequences were not detected in genomic DNA by PCR. After 27 months, the os clitoris was larger than 3-month-old dog and os bone was more calcified than young age. Combining the results of cytogenetic, molecular genetic and histological examinations, the dog was diagnosed as a female hermaphrodite with Sry-negative XX sex reversal.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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