In previous reports, the authors isolated the algicidal marine bacterium, Alteromonas sp. SR-14 and demonstrated its growth inhibition of diatom, Chaetoceros calcitrans (C. calcitrans). In this paper, we studied the effects of cell free culture filtrate of Alteromonas sp. SR-14 on the growth of C. calcitrans, and the characteristics of the algal growth inhibition substance. The culture filtrate of Alteromonas sp. SR-14 grown in peptone broth showed growth inhibition activity against C. calcitrans. The reasonable culture conditions of the bacterium for producing of algal growth inhibition substances were $15~20^{\circ}$ in temperature, 7.0-9.0 in pH and $23~30{\textperthousand}$ in salinity, respectively. The algal growth inhibition activity of culture filtrate was increased from stationary phase in growth curve of Alteromonas sp. SR-14. The molecular weights of algal growth inhibition substances produced by Alteromonas sp. SR-14 were ranged about from 3 KDa to 12 KDa. Among the substances, less than 10 KDa fraction were stable by heating at $100^{\circ}$ for 10 minutes, while more than 10 KDa fraction were heat labile. According to the experimental results, the algal growth inhibition substance produced by the bacterium was not a single compound.
An isolate from holothurians was identified as an eicosapentaenoic acid (EPA)-producing bacterium KMG427, which is characterized by EPA synthesis efficiency, by thin layer and gas chromatographic analyses. The EPA production was maximized to more than 10% of the total fatty acids by incubation at $4^{\circ}C$ after cell proliferation at $20^{\circ}C$. The isolated bacterium was categorized as Gram-negative, rod-shaped, aerobic, and motile with a single polar flagellum. According to phylogenetic analysis based on morphological and physiological specificities as an EPA-producing bacterium, the isolate KMG427 was found to belong to the genus Shewanella. The 16S rDNA of KMG427 was revealed to have 100% of sequence identity to that of S. hanedai CIP $103207^T$. Therefore, the isolate might be classified and identified as Shewanella sp. KMG427.
A marine bacterium having a high oil-degrading activity was isolated from the coastal water of Yosu, Korea, identified as Pseudomonas sp. and named Pseudomonas sp. BCK-1. The optimal temperature, pH and NaCl concentration for cell growth was $30^{\circ}C$, 7.0 and $3\%$ (w/v), respectively. After cultivation at $30^{\circ}C$, 180 rpm in 250 mL erlenmeyer flask for 72 and 168 hours, $2\%$ (w/v) arabian light crude oil (ACO) and bunker C oil (BCO) which are considered to be hardly biodegradable compounds were degraded $92\%$ (w/w) and $72\%$ (w/w), respectively.
Biodegradation of the endocrine-disrupting chemical di-n-butyl phthalate (DBP) was investigated using a bacterium, Pseudomonas fluorescens B-1, isolated from mangrove sediment. The effects of temperature, pH, salinity, and oxygen availability on DBP degradation were studied. Degradation of DBP was monitored by solid-phase extraction using reversed-phase HPLC and UV detection. The major metabolites of DBP degradation were identified as mono-n-butyl phthalate and phthalic acid by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and a pathway of degradation was proposed. Degradation by P. fluorescens B-1 conformed to first-order kinetics. Degradation of DBP was also tested in seawater by inoculating P. fluorescens B-1, and complete degradation of an initial concentration of $100{\mu}g/l$ was achieved in 144 h. These results suggest that DBP is readily degraded by bacteria in natural environments.
On May in 2008, mortality of anadromous Ayu Plecoglossus altivelis was observed on the Gangjeong river in Jeju. Major symptoms of the infected fish were mouth rot and skin ulcer. The causative agent was suspected as gliding bacteria. After culture on Shu-Shott and R2A media, we isolated bacterium belonging to the Flavobacterium from ayu with symptoms. As a result, the bacterium was identified as Flavobacterium succinicans JMFL55 by 16S rDNA sequence alignment with F. succinicans DSM 4002(98.27% similarity, GenBank accession NO. AM230492).
A trap identification system for isolating functional sequences to allow the constitutive expression of foreign protein from Edwardsiella tarda was developed. Using the green fluorescent protein (GFP) reporter-based trap system, various functional sequences to drive heterologous expression of the GFP were selectable in Escherichia coli host. However from the bioinformatic sequence analysis, all the segments predicted as regulatory regions were not native promoters actually existing upstream of endogenous E. tarda genes. Instead, a number of non-authentic sequences, possibly resulted from the random shuffling and/or intermolecular ligation were also proven to be able to display a potent GFP expression in the recombinant E. coli. Further analysis with selected clones showed that both authentic and non-authentic sequences could function in as a constitutive promoter, leading quite a consistent and stable GFP expression after repetitive subcultures. Microscopic examination also confirmed the uniform pattern of GFP expression in every host bacterium. Semi-quantitative assay of GFP showed that there was no clear relationship between expression levels and organizational features of the promoters trapped. Functional promoter-like elements achieved in the present study could be a good starting material for multivalent genetic engineering of E. tarda in order to produce recombinant vaccines in a cost-effective fashion.
A collagenolytic enzyme, produced by Vibrio vulnificus CYK279H, was purified by ultrafiltration, dialysis, Q-Sepharose ion exchange and Superdex-200 gel chromatography. The enzyme from the supernatant was purified 13.2 fold, with a yield of 11.4%. The molecular weight of the purified enzyme was estimated by SDS-PAGE to be approximately 35.0kDa. The N-terminal sequence of the enzyme was determined as Gly-Asp-Pro-Cys-Met-Pro-Ile-Ile-Ser-Asn. The optimum temperature and pH for the enzyme activity were $35^{\circ}C$ and 7.5, respectively. The enzyme activity was stable within the pH and temperature ranges 6.8-8.0 and $20{\sim}35^{\circ}C$, respectively. The purified enzyme was strongly activated by $Zn^{2+},\;Li^{2+},\;and\;Ca^{2+}$, but inhibited by $Cu^{2+}$. In addition, the enzyme was strongly inhibited by 1, 10-phenanthroline and EDTA. The purified enzyme was suggested to be a neutral metalloprotease.
Marine bacterium producing pigment was isolated from the solar saltern of Mijo-myeon, Namhae, Korea. Based on phenotypic characteristics and 16S rRNA sequence analysis, the strain was identified as Kocuria sp., which produced a yellow pigment. The pigment showed UV absorption maximum at 469nm. The bacterial strain grew well on Marine broth 2216 culture medium. Productivity of the pigment reached the maximum value after 44 hours at $30^{\circ}C$, 2% NaCl and pH 6.0. The pigment was produced best when supplied by 1% lactose as a carbon source and 1% beef extract as a nitrogen source. The result of the color stability study showed that pigment extracted from the strain by ethanol was stable at $-20-25^{\circ}C$ and also showed higher stability over 70% for 14 days in light conditions at $25^{\circ}C$. The pigment extract was also stable for all metal ions tested, except for $FeCl_2$.
Cell-free culture broth of marine halophilic bacterium, Kordia algicida was shown to possess specific algicidal ability against red tide organism, Cochlodinium polykrikides. Physiochemical characteristics of algicidal material originated in the bacterial culture broth were analyzed that its molecular weight was estimated to a 3,000 dalton and it was stable in heat and pH treatment. The algicidal fraction against C. polykrikoides obtained from gel permeable chromatography contained high concentration of ammonium ion as analyzed by ICP/Mass spectrum. C. polykrikoides by the fraction was quickly lysed within 1 min. It was shown that the effective concentration for algicide against C. polykrikoides was over 1mM of ammonium chloride. On the other hand, other metal ions presented in the algicidal fraction showed no algicidal effect against C. polykrikoides. In additon, ammonium ion exhibited species-specific killing spectrum for two species of red tide organisms, C. polykrikoides and Gymnodinium sanguieum. Therefore, further researches on the killing mechanism against C. polykrikoides exerted by ammonium ion, and subsequent development of replaceable algicidal materials will perform to provide useful tools for the control of red tide.
An antioxidant- producing bacterium was isolated from sea water in Jeju island. The isolated strain, SC2-1 was gram-positive, catalase positive, facultatively anaerobic, oxidase negative, motile and small rods. The strain utilized sucrose, dextrose, fructose, mannitol and maltose as a sole carbon and energy source and sodium chloride was required for the bacteria growth. The radical scavenging activity of the culture supernatants was determined by DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method. This bacterium was identified based on cellular fatty acids analysis and 16S rDNA sequencing, and then named Exiguobacterium sp. SC2-1. The modified optimal medium compositions required the addition of maltose $2.5\%(w/v)$, yeast extract $1.5\%(w/v)$ and $KH_{2} PO_{4} 0.05\%(w/v)$ in marine broth (Difco. Co. USA). Antioxidant activity of under optimal culture conditions were $93\%$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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