• 제목/요약/키워드: MTT method.

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A simple chemical method for conversion of Turritella terebra sea snail into nanobioceramics

  • Sahin, Yesim Muge;Orman, Zeynep;Yucel, Sevil
    • Journal of Ceramic Processing Research
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    • 제19권6호
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    • pp.492-498
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    • 2018
  • In this study, a sea shell was converted into bioceramic phases at three different sintering temperatures ($450^{\circ}C$, $850^{\circ}C$, $1000^{\circ}C$). Among the obtained bioceramic phases, a valuable ${\beta}-TCP$ was produced via mechanochemical conversion method from sea snail Turritella terebra at $1000^{\circ}C$ sintering temperature. For this reason, only the bioceramic sintered at $1000^{\circ}C$ was concentrated on and FT-IR, SEM/EDX, BET, XRD, ICP-OES analyses were carried out for the complete characterization of ${\beta}-TCP$ phase. Biodegradation test in Tris-buffer solution, bioactivity tests in simulated body fluid (SBF) and cell studies were conducted. Bioactivity test results were promising and high rate of cell viability was observed in MTT assay after 24 hours and 7 days incubation. Results demonstrated that the produced ${\beta}-TCP$ bioceramic is qualified for further consideration and experimentation with its features of pore size and ability to support bone tissue growth and cell proliferation. This study suggests an easy, economic method of nanobioceramic production.

히알루론산을 함유한 PLGA 지지체의 제조 및 특성결정 (Preparation and Characterization of Hyaluronic Acid Loaded PLGA Scaffold by Emulsion Freeze-Drying Method)

  • 고연경;김순희;정재수;박정수;임지예;김문석;이해방;강길선
    • 폴리머
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    • 제31권6호
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    • pp.505-511
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    • 2007
  • 조직의 재생을 위한 지지체재료의 개발은 조직공학 분야의 연구에 있어서 매우 중요한 요인이다. 히알루론산은 조직을 수복하기 위한 체내이식용 구조물로써 널리 사용되고 있는 천연고분자이며, 이를 이용하여 본 연구에서는 히알루론산을 함유한 락타이드-글리콜라이드 공중합체(PLGA) 다공성 지지체를 유화동결 건조법으로 제조하였다. HA-PLGA 지지체는 수은다공도계, 전자현미경 및 물흡수성을 측정하여 특성을 결정하였다. 제조된 HA-PLGA 지지체의 다공도는 약 96.5%, 전체다공면적은 $261\;m^2/g$ 이였으며, 세포가 성장하기에 적합한 환경인 다공사이의 상호 연결이 전자주사현미경을 통해 관찰되었다. 또한 세포의 생존율과 성장률은 MTT(3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium-bromide) 방법을 이용하여 분석하였고, 사이토카인 및 수용성 약물의 방출경향을 확인하기 위하여 과립구-대식세포 집락자극인자(GM-CSF)를 지지체에 담지시킨 후 효소결합 면혁 흡착검사(ELISA)를 이용하여 이들의 방출경향을 확인하였다. 천연/합성 하이브리드 담체로서의 HA/PLGA 담체가 PLGA 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 볼 때 세포의 증식이 우수하였고, 이는 히알루론산의 우수한 생체적합성 및 수분 보유능력에 기인된 것으로 사료된다.

와송 다당체 및 올리고당류의 생리 활성 (Studies on Biological Activities of the Polysaccharides and Oligosaccharides of Orostachys japonicus)

  • 김기훈;김은영;김예운;백금옥;김한복;이동석
    • 미생물학회지
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    • 제40권4호
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    • pp.334-341
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    • 2004
  • 와송으로부터 고온 고압의 열수 추출로 다당체 조추출물(OJP1)을 얻어 디스크 확산법, fluorescein diacetate(PDA)법 및 액체 배지 희석법을 통하여 세균과 진균에 대한 항균 활성을 조사하였다. 또한 Sephadex G-50을 통하여 다당체(FI)와 올리고당류(FII)를 분리하고, 이들의 항암 활성을 조사하였다. FI과 FII의 분자량은 각각 30$\~$50 kDa과 1$\~$3 kDa으로 추정되었다. OJP1의 항균 효과는 디스크 확산법에서 Candida albicans가 $20\pm4.9\;mm$의 억제대로 가장 높았으며, Salmonella typhimurium과 Staphylococcus aureus도 각각 $18\pm2.0\;mm$$17\pm1.0\;mm$의 억제대로 비교적 높게 나타났다. 또한 Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa에 대해서도 양성 대조군인 프로폴리스보다 높게 나타났으며, FDA법, 액체배지 희석법에서도 비슷한 양상을 나타냈다. OJP1과 Fl, FII의 인체 암세포주와 Sarcoma 180 세포주에 대한 항암 활성을 측정해 본 결과, 이들은 모두 MTT assay와 형태 변화 관찰에서 강력한 암세포주 증식 억제 효과를 나타내었는데, 특히 폐암 세포주인 A549 세포와 자궁 경부암 세포주인 HeLa 세포, 위암 세포주인 AGS에서 현저한 효과를 보였다. 더 나아가 DNA 분절화를 통해 apoptosis 유발 여부를 확인해 본 결과, 대조군에 비해서 이들 물질을 처리한 실험군에서 apoptosis발생을 뜻하는 DNA 분절화 현상이 뚜fut하게 나타났다. 요컨대, OJP1과 Fl, FII는 광범위한 병원성 균주에 대하여 효과적인 항균 활성을 보였으며, 각종 암세포주에 대하여 현저한 항암 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.

Retroviral Vector를 이용한 TNF-$\alpha$ 유전자의 이입이 암세포의 종양괴사인자(TNF) 감수성에 미치는 효과 (Effect of Retrovirus Mediated TNF-$\alpha$ Gene Transfer to Tumor Necrosis Factor(TNF) Sensitive Tumor Cell Lines on Sensitivity to TNF)

  • 오연목;박계영;정만표;유철규;김영환;한성구;심영수;한용철
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제41권2호
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    • pp.87-96
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    • 1994
  • 연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 여러 암세포에 대해서 세포독성을 보임이 알려져 있다. 그리고, 최근 분자생물학적 발전에 힘입어 TNF 유전자를 암세포에 이입하고 발현시키는 연구가 그 동안 진행되었다. 이들 연구의 목적은, TNF를 전신적으로 쓸 경우 전신 부작용이 심하여 인체에 쓸 수 없는 현 단계에서 암세포 자체에서 TNF를 만들어 내어서 암세포 주위에서만 작용하게 함으로써 연체에 미치는 전신독성을 최소한으로 줄이고 암세포를 사멸시키는 것이었다. 암세포에 TNF 유전자를 이입함으로써 예상되는 항암효과가 성공을 거두기 위해서는 첫째, TNF 유전자가 이입된 암세포에서 분비된 TNF가 주위 암세포를 성공적으로 사멸시켜야 하고 둘째는 분비된 TNF가, TNF 유전자가 이입된 암세포 자신을 사멸시켜야 한다. 본 연구는 이 중 두번째 기전, 즉 TNF 유전자가 이입된 암세포가 자신이 분비한 TNF에 의해서 사멸되거나 또는 세포 독성이 나타날 수 있는가를 검증하는데 목적을 두었다. 방법 : TNF에 감수성을 보이는 인체의 중피종 세포주인 NCI-H2058과 생쥐 섬유육종 세포주인 WEHI164에 TNF-$\alpha$ 유전자를 retroviral vector를 이용하여 이입하고 TNF를 발현을 시도하였다. DNA 수준과 단백질 수준에서 TNF-$\alpha$ 유전자가 제대로 이입되어 발현되는지 PCR과 ELISA 및 bioassay(MTT assay)로 확인하였다. 그리고, TNF 유전자가 이입된 세포주가 자신이 분비하는 TNF에 사멸되는지 아니면 생존하는지 MTT(dimethylthiazolyl diphenyltetrazolium) assay로 알아보았다. 그리고, 만일 TNF 유전자가 이입된 암세포가 자신이 분비한 TNF에 사멸되지 않고 생존할 경우, TNF 유전자가 이입된 NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF 암세포주가 외부에서 준 TNF에도 내성을 보이는지도 추가로 MTT assay 방법으로 확인해 보았다. 결과 : 1) TNF-$\alpha$ 유전자 이입 및 발현 확인 PCR을 시행한 결과, TNF 유전자가 이입된 NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF 세포주는 790 base pair 크기의 진한 DNA band를 보인 반면 각각의 모세포주에서는 보이지 않아서 retroviral vector를 이용한 유전자 이입이 DNA 수준에서 이루어졌음을 확인할 수 있었다. 그리고, NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF의 상층 배양액의 TNF양을 ELISA와 bioassay(MTT assay)로 측정한 결과, 생물학적 활성을 지닌 TNF를 각각 $23.6{\pm}0.84ng$/24h/$10^6cells$, $12.2{\pm}0.36ng$/24h/$10^6cells$ 생산함을 알 수 있었다. 2) TNF 유전자 이입 전후, 암세포의 TNF에 대한 감수성 비교 TNF 유전자 이입 전후의 TNF에 대한 세포주의 감수성(세포사망율)을 TNF의 농도 변화에 따라 비교한 결과, NCI-H2058의 경우 TNF 농도 100ng/ml에서 모세포는 $25{\pm}3%$의 세포독성을 보인 반면 TNF 유전자 이입 후에는 $3{\pm}2%$의 세포독성을 보여 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.01). 그리고, WEHI-164의 경우도 TNF 농도 100ng/ml에서 모세포는 $73{\pm}5%$의 세포독성을 보인 반면 TNF 유전자 이입 후에는 $3{\pm}2%$의 세포독성을 보여 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.01). 결론 : TNF에 감수성을 보이는 암세포주인 NCI-H2058과 WEHI164에 TNF 유전자 이입을 시행하고 TNF가 발현되게 하였을 때, TNF 유전자를 이입받은 두 암세포주 모두에서 자신이 생산해 내는 TNF에 내성을 보여 생존하였다. 뿐만 아니라 생존한 이들 세포는 외부에서 준 TNF에 대해서도 내성을 보였다. 따라서, 암세포에 대한 TNF 유전자 이입을 통한 유전자 요법이 성공을 거두려면 유전자 이입된 세포에서 분비하는 TNF의 면역 세포 동원 방법 등의 간접적인 항암기전이 필요할 것으로 생각된다.

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Preparation of CdSe QDs-carbohydrate Conjugation and its Application for HepG2 Cells Labeling

  • Jiang, Mingxing;Chen, Yan;Kai, Guiqing;Wang, Ruijun;Cui, Huali;Hu, Meili
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제33권2호
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    • pp.571-574
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    • 2012
  • In present study, CdSe quantum dots (QDs) were prepared with a novel but simple, effective and exercisable method. Nine different types of carbohydrate molecules were used to modify CdSe QDs. D-mannose (Man)-coated quantum dots were prepared for labeling human hepatoma (HepG2) cells, because of the high expression of mannose receptor (MR) on HepG2 cells. The uptake characteristics of CdSe QDs-Man were investigated in HepG2 cells. The absorption rate result of MTT assay in 48 h suggested the extremely low cytotoxicity of CdSe QDs-Man. The presence of quantum dots was confirmed with fluorescence microscopy. These results were encouraging regarding the application of QDs molecules for early detection of HepG2 cells.

Fabrication and characterization of PCL/TCP-coated PHBV composite multilayer as a bone plate

  • Kim, Yang-Hee;Song, Ho-Yeon;Lee, Byong-Taek
    • 한국재료학회:학술대회논문집
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    • 한국재료학회 2009년도 추계학술발표대회
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    • pp.39.2-39.2
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    • 2009
  • In this work, Poly($\varepsilon$-Caprolactone)(PCL) andpoly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate)(PHBV) mats were fabricated usingelectrospinning process. The electrospinning process is a simple and efficient method to fabricate the nanofibrous mats. PCL and PHBV is a kind of biodegradable polymer but their mechanical properties aren't good. For improving mechanical properties, PHBV mats were coated by TCP. Using PCL mats and TCP-coated PHBV composite mats, a bio-resorbablebone plate were made by pressing. Detailed micro-structural characterization was done by SEM techniques. Tensile strength and bending strength were also evaluated for mechanical properties. The cytotoxicity evaluation ofPCL/TCP-coated PHBV composite multilayer was done by MTT assay. The evidence obtained in this work implies the potential for use as a biodegradable boneplate.

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Anti-tumor Effects of Soybeans and Fermented Soybean Paste

  • Lee, Sung-Lim;Kim, Jong-Gyu
    • 한국환경보건학회:학술대회논문집
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    • 한국환경보건학회 2004년도 International Conference Global Environmental Problems and their Health Consequences
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    • pp.182-184
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    • 2004
  • Oral cancer is the sixth most common cancer globally. The effects of several extracts from soybeans and Korean soybean paste (doen-jang) on the growth of human oral carcinoma cells in vitro were assessed. We prepared petroleum ether extract, ethyl acetate extract, chloroform extract, methanol extract, and water extract from soybeans and soybean paste. We used KB cell, which is an oral epidermoid carcinoma cell, and investigated proliferation of the tumor cells using MTT method. Each extract of soybean paste suppressed the KB cell proliferation. A dose-response relationship was observed between the level of ethyl acetate extract of soybean paste and its suppression of the cell proliferation. The effects of soybean extracts were lower than those of soybean paste extracts. The effects might be enhanced by the fermentation of soybeans. The results of this work indicate that extracts from soybeans and Korean soybean paste could have potential as anti-tumor substances.

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BIOCOMPATIBISITY OF ION BEAM PROCESSED FILMS DEPOSITED ON SURGICAL TI-6AI-4V

  • Lee, I-S;Song and I-j Yu
    • 한국진공학회지
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    • 제6권S1호
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    • pp.16-22
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    • 1997
  • ion beam processing of materials for medical application has gained increasing interest in the last decade and the implantation of nitrogen into TI-6AI-4V to improve corrosive-wear performance is currently used for processing of total hip and knee joints. Oxides and nitrides of Ti, Zr, Al, Cr were deposited on TI-6AI-4V substrates by DC magnetron sputtering dual ion beam sputtering and ion beam assisted deposition. The cytotoxicity of these films were investigated by MTT method and showed comparable to untreated TI-6AI-4V Plasm-sprayed hydroxyapatite(HAp) coatings showed excellent cytotoxicity regardless of heat treatment. intermediate layer coatings of nitrides and oxides increased the bond strength of HAp to substrate by intrdducing chemical bond at interface. Heat treatment of HAp coatings also improved the chemical bond at interfaces and increased the bond strength of untreated TI-6AI-4V to 16.4 kg/$\textrm{cm}^2$ but still lower than 33.1 kg./$\textrm{cm}^2$ of ir oxide as a imtermediate layer caoting.

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Expression of Human Stem Cell Factor with Recombinant Baculovirus in BmN Cell Line and Silkworm

  • Xijie, Guo;Yongfeng, Jin;Mingguan, Yang;Yaozhou, Zhang
    • International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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    • 제4권1호
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    • pp.51-56
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    • 2002
  • A recombinant transfer vector pBacSCF was constructed by inserting huamn stem cell factor (hSCF) cDNA into plasmid pBacPAK8. BmN cells were co-transfected with modified Bombyx mori, nuclear polyhedrosis virus (BmBacPAK) DNA and the recmbinant transfer vector to construct a recombinant baculovirus containing hSCE gene. DNA dot blotting and RNA dot blotting demonstrated that the hSCE gene was contained in the recombinant virus and transcribed. The recombinant baculovirus was infectious to BmN cells and to silkworm. SDS-PAGE analysis showed a specific band of expressed product in the extract of infected cells and in the heamolymph of infected larvae. Bioactivity of the recombinant hSCE was determined with W-1 cell line and MTT colorimetric method in synergy with interlukin-3 (IL-3). These results revealed that the hSCF gene was over-expressed in cultured cells and lavae of silkworm.

더덕(Codonopsis lanceolatae Radix) 추출물이 면역세포에 미치는 영향 (Effect of Codonopsis lanceolatae Radix Water Extract on Immunocytes)

  • 서정숙
    • 한국식품영양학회지
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    • 제9권4호
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    • pp.379-384
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    • 1996
  • 더덕 물추출물이 면역세포에 미치는 영향에 대해 연구한 결과, 더덕 물추출물을 경구투여한 경우 흉선세포의 증식을 촉진하였으나, 흉선세포에 직접 처리한 경우는 그다지 영향을 주지 않았다. 경구투여시 TH 세포를 활성화하였다. 더덕물추출물은 경구투여시 복강 매크로파지의 NO 생성을 억제하였고, 사람 PMN 세포의 phagocytosis를 증가시켰다. 이 결과는 더덕이 생체내에서 면역작용을 증강시킬 수 있는 것을 시사한다.

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