서방성방출을 위해 잘토프로펜을 함유한 미립구를 oil-in-water(O/W) 에멀젼용매 증발법을 이용하여 제조하였다. 제조온도, 교반속도, 초음파분쇄기의 강도, 약물농도, POX의 분자량과 농도, 유화제 농도 등의 제조조건에 따른 잘토프로펜의 방출거동을 평가하였다. 잘토프로펜을 함유한 POX 미립구의 물리화학적 성질 및 형태를 X선 회절분석법(XRD)과 시차주사열량계(DSC), 적외선 분광분석기(FTIR), 주사현미경(SEM)을 통해 연구하였다. 이러한 연구 결과로부터 제조조건들에 따른 미립구의 특성을 확인할 수 있었다. 또한 POX 미립구의 분해성을 10일 동안 in vitro 실험을 통해 조사하였다. 본 연구를 통해 잘토프로펜을 함유한 POX 미립구를 최적화된 용매증발방법으로 제조하였고, 이 미립구로부터 약물의 방출제어를 확인할 수 있었다.
백합나무 목분으로 고농도 단당류를 생산하기 위하여 진한 황산을 사용하는 산 가수분해 특성을 연구하였다. 목분과 황산의 비율을 달리하거나 2차 가수분해의 온도와 시간을 달리하여 당화액 제조의 최적 조건을 탐구한 결과, 1차 가수분해의 목분과 72% 황산 비율은 1 : 2.61(w/w)였으며, 2차 가수분해 온도와 시간은 $105^{\circ}C$에서 70분 가수분해 조건이었다. 이때 생성된 당화액의 농도는 glucose가 44.8 g/L였고 xylose는 25.2 g/L였다. 산 가수분해를 통하여 얻어진 당화액을 발효할 때 발효 저해물질로 알려진 furfural, 5-HMF (5-hydroxymethylfurfural), 저분자량 페놀성 화합물들이 생성되었는데 furfural과 5-HMF는 2차 가수분해 온도가 높아짐에 따라, 그리고 반응시간이 길어짐에 따라 생성량이 증가하였다. $110^{\circ}C$ 2차 가수분해 조건에서 반응시간이 40분을 지남에 따라서 xylose농도는 감소하였고 glucose 농도는 일정하였는데, xylose는 생성속도보다 furfural로 전이 속도가 더 빠른 것으로 생각되고, glucose의 경우 생성속도와 5-HMF로 전이속도가 비슷하여 농도가 일정하게 나타났다.
락토페린 cDNA 유전자를 도입시킨 누에 형질전환 실험을 수행한 결과, 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다. 1. 사람 GI-101 세포주의 mRNA로부터 클로닝 된 락토페린 cDNA 유전자의 개시코돈 ATG와 종결코돈 TAA를 포함하는 open reading frame(2,136 bp) 영역을 확인하였다. 2. Sf9 배양세포의 조추출물 시료에 의한 Western blot 분석 결과, 락토페린으로 추정되는 약 80kDa의 단백질 발현을 확인하였다. 3. 누에 형질전환에 높은 전이효율과 활성을 나타내는 트랜스포존을 이용한 전이벡터 pPIGA3GFP를 개조하여 락토페린 cDNA를 삽입시킨 전이벡터 pPT-HLf를 구축하였다. 4. DNA 미량 주사법에 의한 누에 형질전환 개체의 발현 비율은 약 6.7% 정도를 나타냈다. 5. 형질전환 누에(G0) 동일한 세대간 교배 및 처리하지 않은 성충간의 역교배에 의한 차세대(G1) 개체로부터 락토페린 유전자와 동일한 크기의 2.1 kb DNA 단편을 확인 할 수 있었으며, 형질전환 G1 세대의 조추출물 시료에 의한 Western blot 분석 결과, 표준 락토페린 항체와 반응하는 약 80 kDa의 단백질 발현을 확인할 수 있었다.
Korean safflower (Carthami Flos) seed has been known to have healing effects on both bone fracture and osteoporosis. On the base of such a notice, this experiment was carried out to explore the effects of safflower seed on bone formation and bone repair. In addition, the healing mechanism was evaluated by analysing serum after feeding the seed to experimental. animals. The effect of Korean safflower seed were evaluated with 40 rats,3-month old. Forty Sprague-Dawley rats composed of 20 male and 20 female were underwent unilateral tibial defect and then fastened with unilateral fixators. The operated rats were divided into two groups depending on the composition of diet, such as positive control group fed normal diet (C-OP group) and safflower seed group fed 30% of safflower seed diet and 70% of normal diet (S-OP group). Postoperative radiographys were taken once in 2 weeks to evaluate callus formation for operated groups. In addition, a possible protein spots involved in bone recovery were examined using 2-Dimensional Gel Electrophoresis (2-DE). The comparison of the radiography between C-OP and S-OP group were showed that the safflower seed diet appeared to stimulate the formation of callus in the rat. On the images of 2-BE, it was able to identify possible five protein spots, having pl from 4 to 5 and molecular weight range from 24 to 26 kDa, involved in bone formation and repair, since no differing protein spots were found the two between groups except the five spots. No differences were observed between two groups before operation, but clear and bigger protein spots were observed from the S-OP group compared with C-OP group on 6 and 9 weeks post operation. These protein spots were, however, showed similar sizes and densities between two groups in 12 weeks later. The transformation of protein spots was suggested that these protein spots were involved in bone formation and recovery, in addition safflower seed might induce the formation of factors and activate these factors. In conclusion, this study suggest that safflower seed influence a variety of factors in the course of bone formation or the periods of remedy.
Bioabsorbable devices have been utilized and experimented in many aspects of orthopaedic surgery. Depending upon their constituent polymers, these materials can be tailored to provide sufficient rigidity to allow bone healing, retain mechanical strength for certain period of time, and then eventually begin to undergo degradation. The objective of this study was to estimate extent in which Poly-L-latic acid (PLLA) implants had bioabsorbability and biocompatibility with bone and soft tissue in dogs and also to develop bioabsorbable, biocompatible materials with the appropriate strength and degradation characteristics to allow for regular clinical use for treating orthopedic problems in humans as well as animals. Eighteen dogs were used as experimental animals and were inserted two types of PLLA implants. PLLA rods were inserted into subcutaneous tissue of back or the abdomen wall. And the rods were tested for material properties including viscosity, molecular weight, melting point, melting temperature, crystallinity, flexural strength, and flexural modulus over time. PLLA screws were inserted through cortical bone into bone marrow in the femur of the dogs and stainless steel screw was inserted in the same femur. Radiographs were taken after surgery to observe locations of screw. Histological variations including cortical bone response, muscular response, bone marrow response were analyzed over the time for 62weeks. The physical properties of PLLA rods had delicate balances between mechanical, thermal and viscoelastic factors. PLLA screws did not induce any harmful effects and clinical complications on bone and soft tissue for degradation period. These results suggest that PLLA implants could be suitable for clinical use.
재조합 플라스미드 pAL850에 함유된 Bacillus circulans KCTC3004 $\alpha$-amylase 유 전자를 pUB110을 이용하여 shuttle 플라스미드 pALS111을 만들어 Bacillus 세포에 이동. 발현시켰다. Bacillus subtilis(고초균)와 Bacillus megaterium(거대균)으로 형질전환된 pALS111로부터 $\alpha$-amylase는 세포증식과 비례하여 생산되었다. 형질전화주가 생산하는 $\alpha$ -amylase의 최대활성을 유전자 공여 균주인 B. circulans와 비교했을 때 고초균은 약 95배, 거대균은 약 34배 정도의 높은 활성을 나타내었다. 그리고 대장균 형질전환주는 분비율이 10% 정도인데 반하여 고초균 형질전화주는 생산된 효소전부를 , 거대균 형질전환주는 약 98%를 세포외로 분비함을 보임으로써 고초균과 거대균은 실용적인 면에서 대장균보다 우월 함을 나타내었다, pALS111의 각 숙주 내에서의 안정성을 살펴본 결과 거대균에서는 92%, 고초균에서는 76%, 대장균에서는 38% 로 나타났다. SDS-PAGE와 zymogram을 통해 추정 된 대장균과 고초균, 거대균에서 발현된 효소의 분자량은 약 55,000으로 확인되었다. 이들 형질전환주가 생산하는 $\alpha$-amylase는 starch 에 작용하여 주된산물로서 maltotriose 이상의 다양한 maltooligosaccharide들을 생산함이 확인 되었다.
Objectives In the present study, the author intended to investigate whether Gamitonggyu-tang (GTT) significantly affects (since the subject is GTT, you need an 's') in vivo and in vitro mucin secretion from airway epithelial cells. Methods In vivo experiment, mice's mucin which is on a hypersecretion of an airway, mice's tracheal goblet cells in hyperplasia and mice's intraepithelial mucosubstances were exposed with SO2 for 3 weeks. Effects of orally-administered GTT for 1 week on in vivo mucin secretion and hyperplasia of tracheal goblet cells were assessed by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and staining goblet cells with alcian blue. In vitro experiment, confluent hamster tracheal surface epithelial (HTSE) cells were metabolically radiolabeled with 3H-glucosamine for 24 hrs and chased for 30 min in the presence of GTT to figure out the effectiveness of 3H-mucin secretion. Total elution profiles of control spent media and treatment sample through Sepharose CL-4B column were analyzed.Possible cytotoxicities of each agent were assessed by measuring lactate dehydrogenase (LDH) release. Also, the effect of GTT on contractility of isolated tracheal smooth muscle was investigated. Results (1) GTT inhibited hypersecretion of in vivo mucin. However, it did not affect the increase the number of goblet cells (2) GTT significantly increased mucin release from cultured HTSE cells, without significant cytotoxicity (3) GTT chiefly affected the 'mucin' secretion and did not affect the secretion of the other releasable glycoproteins with less molecular weight than mucin (4) GTT did not affect Ach-induced contraction of isolated tracheal smooth muscle.Conclusions This result suggests that GTT can increase mucin secretion during short-term treatment (in vitro) whereas it can inihibit hypersecretion of mucin during long-term treatment (in vivo). The author suggests that the effect GTT with their components should be further investigated and it is valuable to find from oriental medical prescriptions, novel agents which might regulate mucin secretion from airway epithelial cells.
Rhus verniciflua Stokes has been used for treatment of blood stasis and abdominal mass in Oriental medicine. Rhus verniciflua Stokes has been experimentally reported to exert antioxidant, antiproliferative, antithrombotic and apoptotic activities. In the present study, the antiangiogenic and in vivo antitumor activities of aqueous extract of processed Rhus verniciflua Stokes (Nexia) by heat were examined to elucidate its anticancer mechanism. Nexia showed weak cytotoxiicty against human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and Lewis lung carcinoma cells (LLC) with IC50 of${\sim}200\;{\mu}g/ml\;and\;>200\;{\mu}g/ml$, respectively. Nexia significantly inhibited the proliferation and migratory activity in vascular endothelial growth factor(VEGF) treated HUVEC. Furthermore, Nexia effectively suppressed the tumor volume in A549 nonsmall lung cancer bearing athymic nude mice, CanN. Cg-Foxn 1nu/CrljBgi up to 40.7% as well as tumor weight incised from LLC cells innoculated into the flank of C57BL/6 mice up to -50% compared with untreated control at a dose of 300 mg/kg. Taken together, these results suggest that processed Rhus verniciflua Stokes may inhibit the growth of Lewis lung carcinoma cells partly via inhibition of angiogenesis and can be potently applied to angiogenesis dependent cancers. However, it still needs a further research on molecular mechanism, angiogenesis animal study and clinical trial in future.
In the present study, the author tried to investigate whether four oriental medical prescriptions named, jawan-chihyosan (CHS), gwaru-jisiltang (GJT), and several single compounds, kaempferol, coumarin, betaine and ursolic acid significantly affect mucin release from cultured hamster tracheal surface epithelial (HTSE) cells. Confluent HTSE cells were metabolically radiolabeled with 3H-glucosamine for 24 hrs and chased for 30 min in the presence of CHS, GJT, kaempferol, coumarin, betaine and ursolic acid, respectively, to assess the effect of each agent on 3H-mucin release. Possible cytotoxicities of each agent were assessed by measuring lactate dehydrogenase(LDH) release. Additionally, total elution profiles of control spent media and treatment sample (CHS and GJT) through Sepharose CL-4B column were analysed and effect of CHS and GJT on MUC5AC mRNA expression in cultured HTSE cells were investigated. The results were as follows : (1) CHS and GJT significantly stimulated mucin release from cultured HTSE cells, with significant cytotoxicity , (2) CHS and GJT chiefly stimulated the 'mucin' release and did not affect significantly the release of the other releasable glycoproteins with less molecular weight than mucin. This result suggests that the three herbal prescriptions specifically stimulate the release of mucin ; (3) CHS and GJT significantly increased the expression levels of MUC 5AC mRNA. This result suggests that the three herbal prescriptions can affect the synthesis of mucin at gene level in cultured HTSE cells ; (4) Kaempferol and coumarin did not affect mucin release, however, betaine and ursolic acid stimulated mucin release. All the agents did not show significant cytotoxicity. We suggest that the effects of CHS and GJT, betaine and ursolic acid should be further investigated and it is of great value to find, from oriental medical prescriptions, novel agents which have the effective expectorant or mucoregulative effect on mucin secretion from airway goblet cells.
Alkyl ethoxylate 비이온 계면활성제, 산업용 윤활유, 물로 이루어진 3성분계에 대하여 $30{\sim}60^{\circ}C$의 온도 범위에서 상평형 실험을 수행한 결과, 세정력에 중요한 영향을 끼치는 가운데 상의(middle-phase) 마이크로에멀젼(${\mu}E$) D상은 매우 제한된 조건 하에서만 생성되며, 따라서 D상이 보다 넓은 온도 영역에서 형성되기 위해서는 보조계면활성제 첨가가 필수적임을 알 수 있었다. 비이온 계면활성제 $C_{12}E_4$ 시스템에 n-펜탄올과 n-헥산올을 보조계면활성제로 각각 첨가함에 따라 3상이 형성되는 온도는 A/S 증가에 따라 감소하였으나 3상 영역에서 생성된 가운데 상은 많은 양의 물을 함유한 $D^{\prime}(L_3)$상이었다. 한편 $C_{12}E_5$ 계의 경우에는 보조계면활성제로 n-펜탄올을 첨가한 경우에는 D'상이 형성되었으며, 반면에 n-헵탄올, 옥탄올, 노난올 등을 첨가할 경우에는 D상이 형성되었다. 한편 보조계면활성제로 n-헥산올을 첨가한 경우에는 $30{\sim}40^{\circ}C$의 온도 범위에서는 D'상을 형성하며, $45{\sim}60^{\circ}C$의 온도 범위에서는 D상이 형성되었다. 두 비이온 계면활성제 시스템의 차이는 거대한 윤활유 오일 분자가 계면활성제 필름 지역으로 관통하여 가용화될 수 있는 정도와 계면활성제의 오일 상에 대한 분배에 주로 기인하는 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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