This study investigated bacterial growth-inhibitory effect of 69 therapeutic herbal plants extracts on 9 bacterial strains using a disc diffusion assay. Especially, the antimicrobial activity of Psoraleae semen, which showed different activity on pathogenic Gram-positive and Gram-negative bacteria, was evaluated by MIC (minimal inhibition concentration) and biofilm formation assay. The effect of Psoraleae semen extract on bacterial cell membranes was examined by measurement of protein leakage (optical density at 280 nm) and scanning electron microscope (SEM). No clear zone was formed on discs containing Gram-negative bacteria, but Gram-positive bacteria exhibited clear zones. The MICs of Psoraleae semen extract were $8{\mu}g/mL$ for Streptococcus mutans, and $16{\mu}g/mL$ for Enterococci and Staphylococcus aureus. In addition, biofilm formation was inhibited at concentration $8-16{\mu}g/mL$. Protein leakage values and SEM images revealed that cell membranes of Gram-positive bacteria were impaired following exposure to the extract. Further, the extract inhibited the growth of Listeria monocytogenes in sausages. These results indicate that Psoraleae semen extract could be utilized as a natural antimicrobial agent against Gram-positive bacteria.
Antimicrobial peptides are evolutionary ancient weapons for animal and plant species to depend themselves against infectious microbes. In the present study, we investigated if an antimicrobial peptide was produced from Coptidis Rhizoma. For the determination, protein substance from the medicinal plant was isolated by various preparations. Among the preparations, the protein portion dissolved in phosphate-buffered saline solution (CRP-DS) that contained the most amount of protein $(90\%)$ resulted in maximal inhibition of Candida albicans which causes local and systemic infections. Analyses by gel-electrophoresis and gel-permeation chromatography showed the CRP-DS formed a single band of approximately 11.8 KDa as molecular size. Antifungal activity of the CRP-DS was almost equivalent to antifungal activity by fluconazole, resulting in MIC (minimal inhibitory concentration) of approximately $50{\mu}g/ml$. The antifungal activity was a dose-dependent. The antifungal activity appeared to be inactivated by heat-treatment and ionic strength, respectively. In a murine model, the CRP-DS enhanced resistance of mice against disseminated candidiasis. The HPLC analysis demonstrated maximum $4\%$ of berberine as residual content in the CRP-DS preparation resulted in no influence on the antifungal activity. In addition, protein portion isolated from Phellodendri Cortex producing the alkaloid component like Coptidis Rhizoma had no such anticandidal effect. These results indicate that the protein substance from Coptidis Rhizoma was responsible for the antifungal activity.
강한 항진균 활성을 나타내며, 낮은 적혈구 용혈활성을 갖는 새로운 합성 펩티드를 얻기 위하여 cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12) 및 이들의 유사체들을 설계하고 이들을 고상법에 의하여 합성하였다. 합성 펩티드의 항진균 활성은 Trichosporon beigelii에 대한 성장억제능에 의하여 측정하였으며, 세포독성은 인간의 적혈구 세포에 대한 용혈활성에 의하여 측정하였다. 펩티드의 양쪽 친매성의 증가는 항진균활성보다는 적혈구 용혈황성에 큰 영향을 미쳤다. Cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12)의 12번 아미노산이 Lys을 Ala으로 치환시킨 유사체 펩티드(A2)는 가장 강한 항진균활성(minimum inhibitory concentration : 2.5.$\mu$g/ml)을 나타내며 비교적 낮은 적혈구 용혈활성(200.$\mu$g/ml의 펩티드 농도에서 0.5% hemolysis를 나타냄)을 나타내었다. 따라서 A2의 펩티드는 세포독성을 갖지 않으며 강한 항진균 활성을 가지는 모델로서 유용하게 사용될 것이다.
This study aimed to evaluate in vitro effects of Rheum undulatum L. root on the development of dental caries, especially its effects on viability, dental plaque formation, and glycolytic acid production of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus. Methanol extract of Rheum undulatum L. root and its fractions were prepared and tested. Among the test extract and fractions, dichloromethane fraction (DF) showed the most active antibacterial activity (inhibition zone: 13-17 mm) against S. mutans and S. sobrinus in a disc diffusion method. Minimal inhibitory concentrations (MICs) of DF against these bacteria ranged from 0.25 to 0.5 mg/mL. Furthermore, DF significantly inhibited the caries-inducing factors of these bacteria. At sub-MIC levels, DF inhibited in vitro dental plaque formation by S. mutans and S. sobrinus ($IC_{50}$= 0.079 and 0.142 mg/mL, respectively), which was caused, in part, by the inhibitory effect on the activity of glucosyltransferases. A significant reduction of glycolytic acid production was found at the concentration as low as 0.032 mg/mL for S. mutans and 0.063 mg/mL for S. sobrinus. The possible bioactive compounds that are inducing in vitro anti-cariogenic activity of DF are unknown. Based on the preliminary phytochemical analysis, the activity of DF may be related to the presence of anthraquinones, cardiac glycosides, coumarines, sterols/terpenes, and phenolics. These results indicate that DF is probably useful for the control of dental plaque formation and subsequent dental caries development.
솔잎과 소나무 가지의 항충치 효과와 기능성 소재로서의 활용 가능성을 조사하기 위하여 추출물과 용매 분획의 S. mutans에 대한 항균효과, GTase 활성 억제효과 그리고 열과 pH 에 대한 안정성을 측정하였다. 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎보다는 가지 추출물이 S. mutans에 대한 생육저해 효과가 큰 것으로 나타났으며, 특히 n-hexane 분획의 MIC 는 0.6 mg/mL로서 S. mutans에 대해 가장 높은 항균효과를 나타내었다. 그리고 솔잎과 가지 추출물의 GTase 활성 억제 효과는 S. mutans에 대한 생육억제 효과 결과와 마찬가지로 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎 보다는 가지 추출물이 GTase 활성 억제 효과가 큰 것으로 나타났다. 한편 솔잎의 n-hexane은 열처리 온도가 증가함에 따라 S. mutans에 대한 항균력이 크게 감소하였고 pH의 변화에도 크게 영향받는 것으로 나타났다.
분자량이 다른 3가지 종류의 키토산의 Escherichia coli에 대한 항균효과를 측정하였고 이들을 라이너지 코팅에 적용했을 때의 균성장억제 효과와 지류포장재에 적용했을 때 딸기의 저장기간을 증대시키는지에 대해 연구했다. 키토산은 그 분자량에 따라 항균효과가 다른 것으로 알려지고 있는데 본 연구에서 사용한 3가지 종류의 키토산은 E. coli에 대하여 모두 항균효과를 보였다. 키토산 A에서는 40 ppm 이상에서 항균효과를 보였으며 키토산 B와 C는 10 ppm 이상에서 항균효과를 나타내었다. 라이너지에 3가지 종류의 키토산을 코팅하여 항균효과를 보았는데 라이너지에 코팅된 상태에서도 세 종류의 키토산은 균의 성장을 저해하는 것을 보여주었다. 분자량이 다른 3가지 종류의 키토산에서 가장 큰 항균효과를 보이는 키토산 B를 코팅한 지류포장재로 딸기를 포장하여 저장실험을 행하였다. 딸기의 저장증대 효과는 저온저장이 가장 중요하다는 것을 보여 주었으며 포장방법별 저장증대 효과에서는 키토산을 코팅한 지류포장재가 딸기의 저장기간을 증대시키는 것을 보여주었다.
본 연구는 마늘속에 alliin을 크로마토그래피에 의하여 함량을 알고 이들이 에탄올추출물에 향균효과를 알아보기 위하여 연구했다. HPLC를 이용하기 위하여 메탄올로 Alliin을 추출하고 유해세균에 대한 향균활성을 알아보기 위하여 Alliin을 에탄을 추출물 시료를 조제하여 사용하였다. 마늘에는 alliin의 함량은 0.34 ∼0.73% fresh weight를 나타내고 에탄을 추출물의 시료에서 동결건조 시료수율이 가장 높았는데 이는 효소적 분해가 최소화되는 것으로 사료되며 에탄을 추출물의 향균효과는 Table 3에서 각 균주에 대하여 억제효과는 각 균주에서 50∼80% 효과를 보았고, 각종 균에 대한 억제차원에서 향균성을 달리하는 것을 알 수 있었으며 유해세균에 대한 향균작용이 마늘 추출물은 미생물의 발육저지력이 강하고 지속적으로 인체에 무해하므로 보존료 개발이 바람직함을 알았고, 독특한 향미를 주는 황화합물이 많아 산도의 증가와 관계없이 항균력이 강함을 보았고, 각종 균에 대한 항균성을 달리 하는 것을 알 수 있었다. 이로 인해 마늘성분중 선택적인 항균물질의 개발이 요구됨을 알았다.
국내의 건조분말 식품에서 분리한 Cronobacter spp.의 건조내성에 따른 열, 살균소독제, 항생제에 대한 내성특성 분석하여 Cronobacter spp.을 제어하는 효과적인 방법을 연구하고자 하였다. 분리된 37개의 건조저항 균주, 7개의 건조민감 균주, 그리고 68개의 중간그룹의 균주 총 112개에 대하여 분석한 결과 건조내성을 가지고 있는 Cronobacter spp.는 열에 대해서도 저항성이 큰 것으로 나타났다. 따라서 조제분유등의 건조 스트레스에 노출되어 살아남은 Cronobacter spp.는 열 스트레스에서도 높은 내성을 보일수 있을 것으로 사료된다. 살균소독제를 이용한 Cronobacter spp.의 제어효능은 sodium hypochlorite는 15-25 ppm와 benzalkonium chloride는 5-15 ppm 농도에서 5 log CFU/mL 살균 효과가 있었다. Albumin으로 3%(w/v)오염시킨 부유세균의 살균력은 건조내성 균주와 건조민감 균주 모두에서 오염전과 비슷하여 유기물 오염상태에서도 살균소독제 효능에는 큰 영향을 주고 있지 않음을 알 수가 있었다. 그리고 항생제 내성은 $\beta$-lactam 계열의 ampicillin에 대하여 약 90% 분리주가 64-128 ppm의 농도에서 최소저해 농도를 보여 주었다. Aminoglycoside 계열의 kanamycin과 Gram(-) spectrum의 nalidixic acid에서 4 ppm의 가장 낮은 내성을 보였다. 건조민감 균주과 건조내성 균주의 최소저해농도 경우 전반적으로 모든 항생제에 대해서 건조 내성이 높은 균주가 더 큰 항생제 내성을 지니고 있는 것으로 나타났다. 따라서 분리 Cronobacter spp.의 건조내성이 열과 항생제의 저항성과 관련이 있는 것으로 보인다. 그러므로 조제분유와 같은 분말식품과 그 원료의 오염 Cronobacter spp.의 살균제어에 더 강력한 처리가 필요할 것으로 보인다.
In this study, we investigated the in vitro anti-biofilm activities of plant extracts of chives (Allium tuberosum), garlic (Allium sativum), and radish (Raphanus sativus L.) against environment harmful bacteria (gram-positive Staphylococcus aureus and, gram-negative Salmonella typhimurium and Escherichia coli O157:H7). In the paper disc assay, garlic extracts exhibited the highest anti-biofilm activity. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) of all plant extracts was generally higher for gram-negative bacteria than it was for gram-positive bacteria. Gram-negative bacteria were more resistant to plant extracts. The tetrazolium dye (XTT) assay revealed that, each plant extract exhibited a different anti-biofilm activity at the MIC value depending on the pathogen involved. Among the plant extracts tested, garlic extracts (fresh juice and powder) effectively reduced the metabolic activity of the cells of food-poisoning bacteria in biofilms. These anti-biofilm activities were consistent with the results obtained through light microscopic observation. Though the garlic extract reduced biofilm formation for all pathogens tested, to elucidate whether this reduction was due to antimicrobial effects or anti-biofilm effects, we counted the colony forming units of pathogens in the presence of the garlic extract and a control antimicrobial drug. The garlic extract inhibited the E. coli O157:H7 biofilm effectively compared to the control antimicrobial drug ciprofloxacin; however, it did not inhibit S. aureus biofilm significantly compared to ciprofloxacin. In conclusion, garlic extracts could be used as natural food preservatives to prevent the growth of foodborne pathogens and elongater the shelf life of processed foods.
식중독균에 대하여 Enterococcus faecalis MJ-213이 생산하는 박테리오신과 소르빈산칼륨의 혼합처리에 의한 항균효과를 조사하였다. Staphylococcus aureus ATCC 6538에 대한 박테리오신의 MIC는 50 ${\mu}g$/ml, Salmonella enteritidis ATCC 13076에 대한 MIC는 100 ${\mu}g$/ml이었으나, 400 ${\mu}g$/ml의 농도 하에서도 Vibrio parahaemolyticus KCTC 2471의 증식억제 효과는 나타나지 않았다. S. aureus ATCC 6538과 S. enteritidis ATCC 13076 ($10^6$ CFU/ml)에 박테리오신 100 ${\mu}g$/ml 단독 처리 후 24시간 만에 초기 균수가 각각 약 4 log와 2 log cycle 감소되었고, 박테리오신 100 ${\mu}g$/ml와 소르빈산칼륨 100 ${\mu}g$/ml을 혼합 처리한 경우는 박테리오신만을 처리할 때 보다 유의적(p<0.05)으로 더 높은 항균효과가 나타났다. $121^{\circ}C$에서 15분간 가열한 박테리오신 단독처리에 의한 S. aureus과 S. enteritidis의 저해율은 각각 $9.36{\pm}0.58%$와 $3.71{\pm}0.24%$로 가열처리 하지 않은 박테리오신의 항균력 보다 크게 감소하였다. pH 조정하지 않은 박테리오신 단독 처리에 의한 S. aureus의 저해율($65.61{\pm}0.42%$)은 pH 6.0 혹은 8.0으로 조정한 박테리오신 처리구와 유의적인 차이가 없었으나, 그 외의 pH로 조정한 박테리오신의 항균력은 유의할 만한 수준으로 감소되었다. 박테리오신 활성은 ${\alpha}$-amylase와 lipase 처리에 영향을 받지 않았으나, protease II와 pepsin 처리에 의해선 활성이 거의 소실되었다. 또한 갈은 쇠고기 내에 접종된 S. aureus와 S. enteritidis의 균수도 박테리오신 단독처리시보다 소르빈산칼륨과 혼합처리에 의해 $4^{\circ}C$에서 저장하는 동안 유의적(p<0.05)으로 더 낮은 균수를 유지하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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