microRNAs (miRNAs) are non-coding RNA molecules involved in the regulation of gene expression. miRNAs inhibit gene expression by binding to the 3' untranslated region (UTR) of their target gene. miRNAs can originate from transposable elements (TEs), which comprise approximately half of the eukaryotic genome and one type of TE, called the long terminal repeat (LTR) is found in class of retrotransposons. Amongst the miRNAs derived from LTR, hsa-miR-3681 was chosen and analyzed using bioinformatics tools and experimental analysis. Studies on hsa-miR-3681 have been scarce and this study provides the relative expression analysis of hsa-miR-3681-5p from humans, chimpanzees, crab-eating monkeys, and mice. Luciferase assay for hsa-miR-3681-5p and its target gene SHISA7 supports our hypothesis that the number of miRNA binding sites affects target gene expression. Especially, the variable number tandem repeat (VNTR) and hsa-miR-3681-5p share the binding sites in the 3' UTR of SHISA7, which leads the enhancer function of hsamiR-3681-5p to inhibit the activity of VNTR. In conclusion, hsa-miR-3681-5p acts as a super-enhancer and the enhancer function of hsa-miR-3681-5p acts as a repressor of VNTR activity in the 3' UTR of SHISA7.
Long terminal repeat retrotransposons (LTR-Rs) are major elements creating new genome structure for expansion of plant genomes. However, in addition to the genome expansion, the role of LTR-Rs has been unexplored. In this study, we constructed new reference genome sequences of two pepper species (Capsicum baccatum and C. chinense), and updated the reference genome of C. annuum. We focused on the study for speciation of Capsicum spp. and its driving forces. We found that chromosomal translocation, unequal amplification of LTR-Rs, and recent gene duplications in the pepper genomes as major evolutionary forces for diversification of Capsicum spp. Specifically, our analyses revealed that the nucleotide-binding and leucine-rich-repeat proteins (NLRs) were massively created by LTR-R-driven retroduplication. These retoduplicated NLRs were abundant in higher plants, and most of them were lineage-specific. The retroduplication was a main process for creation of functional disease-resistance genes in Solanaceae plants. In addition, 4-10% of whole genes including highly amplified families such as MADS-box and cytochrome P450 emerged by the retroduplication in the plants. Our study provides new insight into creation of disease-resistance genes and high-copy number gene families by retroduplication in plants.
A new human endogenous retroviral family (HERV-S) has recently been identified from human X chromosome. It is 6.7 kb in length and has a typical retroviral structure with LTR-gag-pol-env-LTR. Using the PCR and sequencing approach, we investigated LTR elements of the HERV-S family from a human genomic DNA. Four LTR elements (HSL-1, HSL-5, HSL-10, HSL-11) were identified and have a high degree of sequence similarity(96-99%) with that of the HERV-S. Phylogenetic analysis from the HERV-S family indicated that the LTR elements were mainly divided into 2- groups through evolutionary divergence in the primate evolution. Further investigation of the HERV-S LTR elements in primates may cast light on the integration timing into the primate genome and understanding of human evolution.
The foamy viruses are currently considered essential for development as vectors for gene delivery. Previous studies demonstrated that prototype foamy virus (PFV) can infect and replicate prevalently in a variety of cell types for its exclusive replication strategy. However, the virus-host interaction, especially PFV-transportin3 (TNPO3), is still poorly understood. In our investigation of the role of TNPO3 in PFV infection, we found lower virus production in TNPO3 knockdown (KD) cells compared with wild-type 293T cells. PCR analysis revealed that viral DNAs were mostly altered to circular forms: both 1-long terminal repeat (1-LTR) and 2-LTR in TNPO3 KD cells. We therefore suggest that TNPO3 is required for successful PFV replication, at least at/after the nuclear entry step of viral DNA. These findings highlight the obscure mysteries of PFV-host interaction and the requirement of TNPO3 for productive infection of PFV in 293T cells.
The long terminal repeat (LTR) elements of human endogenous retrovirus (HERV) have been found to be coexpressed with genes located nearby. It has been suggested that the LTR elements have contributed to the genetic variation of human genome connected to various diseases. Recently, HERV-W family was identified in the cerebrospinal fluids and brains of individuals with schizophrenia. Using genomic DNAs derived from schizophrenia, we performed PCR amplification and identified six HERV-W LTR elements. Those LTR elements showed a high degree of sequence similarity (87.7-99.5%) with HERV-W LTR (AF072500). Sequence analysis of the HERV-W LTR elements revealed that clone W-sch1 showed identical sequence with the AC003014 (PAC clone RP1-290B4) derived from human Xq23. Clone W-sch2 was closely related to the AC0072442 derived from human Y chromosome by phylogenetic analysis. Our data suggest that new HERV-W LTR elements in schizophrenia may be very useful for further studies to understand neuropsychiatric diseases.
In order to study functional nucleotides in prototype foamy virus (PFV) DNA on specific recognition by PFV integrase (IN), we designed chimeric U5 long terminal repeat (LTR) DNA substrates by exchanging comparative sequences between human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) and PFV U5 LTRs, and investigated the 3'-end processing reactivity using HIV-1 and PFV INs, respectively. HIV-1 IN recognized the nucleotides present in the fifth and sixth positions at the 3'-end of the substrates more specifically than any other nucleotides in the viral DNA. However, PFV IN recognized the eighth and ninth nucleotides as distinctively as the fifth and sixth nucleotides in the reactions. In addition, none of the nucleotides present in the twelfth, sixteenth, seventeenth, eighteenth, nineteenth, and twentieth positions were not differentially recognized by HIV-1 and PFV INs, respectively. Therefore, our results suggest that the functional nucleotides that are specifically recognized by its own IN in the PFV U5 LTR are different from those in the HIV-1 U5 LTR in aspects of the positions and nucleotide sequences. Furthermore, it is proposed that the functional nucleotides related to the specific recognition by retroviral INs are present inside ten nucleotides from the 3'-end of the U5 LTR.
Background: Although Tat plays a role as a potent transactivator in the viral gene expression from the Human Immunodeficiency Virus type 1 long terminal repeat (HIV-1 LTR), it does not function efficiently in rodent cells implying the absence of a human specific factor essential for Tat-medicated transactivation in rodent cells. In previous experiments, we demonstrated that one of chimeric forms of TAR (transacting responsive element) of HIV-1 LTR compensated the restriction in rodent cells. Methods: To characterize the nature of the compensation, we tested the effects of several upstream binding factors of HIV-1 LTR by simple substitution, and also examined the role of the configuration of the upstream binding factor(s) indirectly by constructing spacing mutants that contained insertions between Sp1 and TATA box on Tat-mediated transactivation. Results: Human Sp1 had no effect whereas its associated factors displayed differential effects in human and rodent cells. In addition, none of the spacing mutants tested overcame the restriction in rodent cells. Rather, when the secondary structure of the chimeric HIV-1 TAR construct was destroyed, the compensation in rodent cells was disappeared. Interestingly, the proper interaction between Sp1 and TATA box binding proteins, which is essential for Tat-dependent transcription, was dispensable in rodent cells. Conclusion: This result suggests that the human-specific Tat cofactor acts to allow Tat to interact effectively in a ribonucleoprotein complex that includes Tat, cellular factors, and TAR RNA, rather than be associated with the HIV-1 LTR upstream DNA binding factors.
Although the number of protein-coding genes is not highly variable between plant taxa, the DNA content in their genomes is highly variable, by as much as 2,056-fold from a 1C amount of 0.0648 pg to 132.5 pg. The mean 1C-value in plants is 2.4 pg, and genome size expansion/contraction is lineage-specific in plant taxonomy. Transposable element fractions in plant genomes are also variable, as low as ~3% in small genomes and as high as ~85% in large genomes, indicating that genome size is a linear function of transposable element content. Of the 2 classes of transposable elements, the dynamics of class 1 long terminal repeat (LTR) retrotransposons is a major contributor to the 1C value differences among plants. The activity of LTR retrotransposons is under the control of epigenetic suppressing mechanisms. Also, genome-purging mechanisms have been adopted to counter-balance the genome size amplification. With a wealth of information on whole-genome sequences in plant genomes, it was revealed that several genome-purging mechanisms have been employed, depending on plant taxa. Two genera, Lilium and Fritillaria, are known to have large genomes in angiosperms. There were twice times of concerted genome size evolutions in the family Liliaceae during the divergence of the current genera in Liliaceae. In addition to the LTR retrotransposons, non-LTR retrotransposons and satellite DNAs contributed to the huge genomes in the two genera by possible failure of genome counter-balancing mechanisms.
We recently used degenerate PCR and locus-specific PCR methods to identify the endogenous retroviruses (ERV) in the bovine genome. Using the ovine ERV classification system, the bovine ERVs (BERVs) could be classified into four families. Here, we searched the most recently released bovine genome database with the partial nucleotide sequence of the pro/pol region of the BERV ${\beta}3$ family. This allowed us to obtain and analyze the complete genome of BERV ${\beta}3$. The BERV ${\beta}3$ genome is 7666 nucleotides long and has the typical retroviral organization, namely, 5'-long terminal repeat (LTR)-gag-pro-pol-env-LTR-3'. The deduced open reading frames for gag, pro, pol and env of BERV ${\beta}3$ en- code 507, 271, 879 and 603 amino acids, respectively. BERV ${\beta}3$ showed little amino acid similarity to other betaretroviruses. Phylogenetic analysis showed that it clusters with HERV-K. This is the first report describing the genetic structure and sequence of an entire BERV.
An insertion sequence identified as a solo long terminal repeat (LTR) of a new rice copia-like retrotransposon was detected in the ORE of the Pi-b gene from the rice cv. Nipponbare, and was designated as Osr1. Osr1 consists of a 6386 bp nucleotide sequence including 965 bp LTRs on both ends with an 82% nucleotide sequence identity to the wheat Tarl retrotransposon on reverse transcriptase. Nucleotide divergence was noted among the individual LTRs, as well as the coding region of Osr1. Various restriction fragment length polymorphism (RFLP) of LTR were detected in indica cultivars, whereas, only a few could be detected in the japonica cultivars. The population of Osr1 is lower in the wild-type rice compared with that in the domesticated cultivars. The insertion of LTR sequence in the h-b gene in the susceptible cultivar suggested that retro-tyansposon-mediated insertional mutation might play an important role in the resistance breakdown, as well as in the evolution of resistance genes in rice.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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