An investigation was carried out to study the characteristics of lipoxygenase in dioctyl sulfosuccinate (aerosol-OT, AOT)/isooctane revered micelles of microaqueous system containing infinitesimal water. ${\alpha}-Linoleic$ acid as a substrate could be analyzed by the colorimetric methodology using 5%(w/v) cupric acetate-pyridine solution and the activity of lipoxygenase was able to be assayed by the degree of ${\alpha}-linoleic$ acid consumption per minute. Optimal pH, temperature, and R-value ([water]/[AOT]) were determined as the value of 5.0, $25^{\circ}C$, and 10.0, respectively. Kinetic analysis of the enzyme reaction under the optimal conditions showed that the values of $K_m$ and $V_{max}$ were 0.31 mM of ${\alpha}-linoleic$ acid and $384.16{\mu}mol$ of ${\alpha}-linoleic$ acid decomposed/min, respectively. The results indicate the reaction to be lipoxygenase-catalyzed oxidation of ${\alpha}-linoleic$ acid in AOT/isooctane reversed micellar system. The inhibitory effect of natural antioxidants on lipoxygenase showed little inhibitory effect of L-ascrobic acid while ${\alpha}-tocopherol$ showed 72% of inhibitory effect.
효소에 의한 carotenoid의 co-oxidationgus상은 lipoxygenasechrao하에서 지방산인 linoleic acid가 산화되어 이때 만들어진 free radical에 의해 carotenoid가 쉽게 산화되기 때문에 일어나는 현상이다. 이화같이 carotenoid의 co-oxidation에서 lipoxygenase는 free radical을 만들면서 반응속도를 빠르게 하는 촉매제의 역할을 다음과 같이 담당하고 있다고 할 수 있다. Lipoxygenase에 의한 carotenoid의 co-oxidation 현상을 처음 발견한 것은 대두가루를 밀가루와 혼합하여 사용할 때였다. 대두가루 속에 다량 함유된 lipoxygenase에 의해 밀가루의 carotenoid 색소가 표백되는 것을 보고 이 현상은 lipoxygenase에 의해 기질은 지방산이 산화되는 동안 caroenoid가 쉽게 co-oxidation되기 때문이라는 것을 알아내었다. 즉, carotenoid는 지질이 존재하는 반응시스템에서 항산화제로서 혹은 secondary substrate로서 작용한다고 할 수 있다.
The effect of several inhibitors such as ascorbic acid on the lipoxygenase in soybeans known to catalyze reaction resulting in racid off-flavors was examined in the soybean homogenates by the oxygen electrode method. Among 8 compounds added at homogenizing process, 10 mM ascorbic acid inhibited lipoxygenase-1 and lipoxygenase-2/3 activities to 41.7 and 49.8%, respectively. Inactivation of lipoxygenase-2/3 was highly accelerated by homogenization for 15 min at room temperature, so the activity was inhibited 70.8% comparing with the homogenization of 3 min. When soybean homogenates with 10 mM ascorbic acid was stored at $25^{\circ}C$ for 72 hrs, lipoxygenase-2/3 activities lowered to 52.8% whereas L-1 activities lowered to 15.8%. Since it is reported that lipoxygenase-2 is responsible for the off-flavor of soybean products, the inhibitory effect of ascorbic acid among several inhibitors investigated might be useful in soybean processing.
Changes of free sugars, lipoxygenase activity and effects of chitosan treatment were analyzed during cultivation of soybean sprout. Free sugars(sucrose, raffinose and stachyose) were more rapidly decomposed in the cotyledon of soybean sprout. Contents of sucrose and raffinose in control group were decreased more rapidly than those of chitosan treated soybean sprouts (CTSS). But the decreasing rate of stachyose was higher in the CTSS. In the hypocotyl, 82% of L-2/3 activity were decreased, whereas 42% of the activity were decreased in the cotyledon after 132 hours of germination. The effect of chitosan treatment on the lipoxygenase activity was more effective on L-2/3 isozyme than L-1. After the germination period of 132 hours, L-2/3 activity of control group was 82.7unit/mg and that of CTSS was 56unit/mg.
In this study, we focused to identify whether eupatilin (5,7-dihydroxy-3',4',6-trimethoxyflavone), an extract from Artemisia argyi folium, prevents $H_2O_2$-induced injury of cultured feline esophageal epithelial cells. Cell viability was measured by the conventional MTT reduction assay. Western blot analysis was performed to investigate the expression of 5-lipoxygenase by $H_2O_2$ treatment in the absence and presence of inhibitors. When cells were exposed to 600 ${\mu}M$$H_2O_2$ for 24 hours, cell viability was decreased to 40%. However, when cells were pretreated with 25~150 ${\mu}M$ eupatilin for 12 hours, viability was significantly restored in a concentration-dependent manner. $H_2O_2$-treated cells were shown to express 5-lipoxygenase, whereas the cells pretreated with eupatilin exhibited reduction in the expression of 5-lipoxygenase. The $H_2O_2$-induced increase of 5-lipoxygenase expression was prevented by SB202190, SP600125, or NAC. We further demonstrated that the level of leukotriene $B_4$ ($LTB_4$) was also reduced by eupatilin, SB202190, SP600125, NAC, or nordihydroguaiaretic acid (a lipoxygenase inhibitor) pretreatment. $H_2O_2$ induced the activation of p38MAPK and JNK, this activation was inhibited by eupatilin. These results indicate that eupatilin may reduce $H_2O_2$-induced cytotoxicity, and 5-lipoxygenase expression and $LTB_4$ production by controlling the p38 MAPK and JNK signaling pathways through antioxidative action in feline esophageal epithelial cells.
Lipoxygenase gives soybeans their grassy flavor, which can disrupt food processing efficiency. This study aimed to identify soybean genotypes with lipoxygenase deficiency among 1,001 soybean accessions and to develop kompetitive allele specific PCR (KASP) markers that can detect lipoxygenase mutations. Three lipoxygenase isozymes (Lox1, Lox2, and Lox3) were analyzed using a colorimetric assay based on a substrate-enzyme reaction. Among the 1,001 accessions examined, two (IT160160 and IT276392) exhibited a deficiency solely in Lox1, and one (IT269984) lacked both Lox1 and Lox2. IT160160 had a 74-bp deletion in exon 8 of Lox1 (Glyma13g347600), whereas IT276392 displayed a missense mutation involving the change of C to A at position 2,880 of Lox1. Moreover, we successfully developed four KASP markers that specifically target Lox1, Lox2, and Lox3 mutations. To validate the Lox1 KASP markers, we used two F2:3 populations generated through a cross between Daepung 2 (lipoxygenase wild type, maternal parent), IT160160, and IT276392 (null Lox1, paternal parent). The results revealed that the Daepung 2 × IT160160 group followed the expected 3:1 ratio according to Mendel's law, whereas the Daepung 2 × IT276392 group did not. Furthermore, a comparison between the colorimetric and KASP marker analyses results revealed a high agreement rate of 96%. KASP markers offer a distinct advantage by allowing the distinction of heterozygous types independent of other variables. As a result, we present an opportunity to expedite the lipoxygenase-deficient cultivar development.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.23
no.6
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pp.954-958
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1994
The bleaching effect of chlorophyll a by two lipoxygenase isoenzymes (LOX-1, LOX-2) isolated from potato tuber(variety DEinma ) was studied. In the presence of LOX-1 or LOX0-2 with linoleic acid chlorophyll a bleaching occurred during two isoenzymes-mediated oxidation of linoleic acid. Chlorophyll a bleaching porceeded with decreasing in the formation of conjugated dienes form linoleic acidyb LOX-1 and LOX-2 . In the presence of chlorophyll a, LOX-2 showed a markable decrease inproduction of conjugated dienes from linoleic acid and a higher chlorophyll a bleaching activity. compared with LOX-1. These results suggest chlorophyll-bleaching reaction required intermediates formed during the peroxidation of linoleic acid by lipoxygenase isoenzymes, thus preventing formation of conjugated dienes.
Using mixed incubation of cultured endothelial cells, cultured fibroblasts, neutrophils activated with PMA and paraquat, the production of superoxide anion, $H_2O$$_2$and lipoxygenase metabolites (5-HETE and 12-HETE) of arachidonate was estimated. The results was as follows: 1. Neutrophils activated with PMA was produced superoxide anion,$H_2O_2$and lipoxygenase metabolites (5-HETE and 12-HETE) of arachidonate. 2. Fibroblasts did not alter the production of superoxide anion and $H_2O_2$ by neutrophils, it was markedly reduced by mixed incubation with endothelial cells. 3. Mixed incubation with endothelial cells significantly augmented the production of 5 or 12-HETEs, but fibroblasts did not. 4. Using mixed incubation of endothelial cells, fibroblasts, neutrophils and paraquat (50ug/m1 and 100ug/m1), the production of superoxide anion, $H_2O_2$and HETEs was significantly increased on both cells at low concentration (50ug/m1), but markedly reduced at high concentration (1001g/m1). 5. Paraquat showed concentration dependent effects on arachidonate lipoxygenase metabolism.
The effect of lipoxygenase (LOX) on the oxidation and co-oxidation of lipid fraction was studied in the model system of rainbow trout. For the reaction in model system 1 g of lipid fraction and 50mL of enzyme extract(LOX, 140 unit in 50mL phosphate buffer solution at pH 7, 4)), which were obtained from rainbow trout, were homoginized in the presence of Tween 20 and kept at 23$\circ$C for 3 days. The activity of LOX was decreased to 43% of initial level during the reaction in the model system. The initial composition of rainbow trout lipid was showed to be consisted of trigliceride(TG;82%) and free fatty acid(FFA;0.1%), while this converted to 59% of TG and 20% of FIFA, respectively after reaction in model system. Change of fatty acid composition was also observed and the content of linoleic acid, one of the major fatte acids, was decreased to 13% from 54% in the content of total fatty acids after reaction. The carotenoids in rainbow trout were composed of 0.4% $\alpha$-carotene, 1.6% $\beta$ -carotene, 80% canthaxanthin, 7% lutein and 11% zeaxanthin, thus the canthaxanthin was the major component. This canthaxanthin was the most degraded carotenoid by lipoxygenase catalyzed co-oxidation during the reaction. On the other hand the tocopherol isomers found in the rainbow trout were $\alpha$ and $\beta$ -tocopherol, and $\alpha$-tocopherol had a higher degradation rate by the lipoxygenase catalyzed co-oxidation than of $\beta$-tocopherol in the reaction of model system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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