Endophytic fungi were isolated from the leaves of plants inhabiting the Hansando Island in Korea. We identified the fungal strains based on their morphological characteristics and on the phylogenetic analysis using DNA sequences of the internal transcribed spacer, small subunit rDNA, large subunit rDNA, and translation elongation factor 1- α regions. In this study, we isolated five endophytic fungi that have not been recorded in Korea, Arthrinium camelliaesinensis, Beltraniella humicola, B. portoricensis, Microxiphium theae, and Piceomphale pinicola. Their morphological characteristics as well as the results of molecular phylogenetic analysis are reported here.
Lee Ji Seon;Lim Mi Ok;Cho Kyoung Yeh;Cho Jung Hee;Chang Seung Yeup;Nam Doo Hyun
Journal of Microbiology
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v.44
no.1
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pp.29-34
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2006
The purpose of this study was to develop molecular identification method for medical mushrooms and their preparations based on the nucleotide sequences of nuclear large subunit (LSD) rDNA. Four specimens were collected of each of the three representative medicinal mushrooms used in Korea: Ganoderma Incidum, Coriolus versicolor, and Fomes fomentarius. Fungal material used in these experiments included two different mycelial cultures and two different fruiting bodies from wild or cultivated mushrooms. The genomic DNA of mushrooms were extracted and 3 nuclear LSU rDNA fragments were amplified: set 1 for the 1.1-kb DNA fragment in the upstream region, set 2 for the 1.2-kb fragment in the middle, and set 3 for the 1.3-kb fragment downstream. The amplified gene products of nuclear large subunit rDNA from 3 different mushrooms were cloned into E. coli vector and subjected to nucleotide sequence determination. The sequence thus determined revealed that the gene sequences of the same medicinal mushroom species were more than $99.48\%$ homologous, and the consensus sequences of 3 different medicinal mushrooms were more than $97.80\%$ homologous. Restriction analysis revealed no useful restriction sites for 6-bp recognition enzymes for distinguishing the 3 sequences from one another, but some distinctive restriction patterns were recognized by the 4-bp recognition enzymes AccII and HhaI. This analysis was also confirmed by PCR-RFLP experiments on medicinal mushrooms.
The ribosomal DNA (rDNA) clusters of Hypsizygus marmoreus 3-10 and H. marmoreus 1-1 were analyzed in this study. The small subunit (SSU) and intergenic spacer 2 (IGS 2) was partially sequenced. The internal transcribed spacer 1 (ITS 1), 5.8S, internal transcribed spacer 2 (ITS 2), large subunit (LSU), intergenic spacer 1 (IGS 1), and 5S were completely sequenced. The rDNA clusters of H. marmoreus 3-10 and H. marmoreus 1-1 were 7,049 bp in length. The sequence of SSU rDNA, which corresponded to 18S rDNA, was 1,796 bp in length, and the sequence of LSU rDNA, which corresponded to 28S rDNA, was 3,348 bp in length. The ITS region that variable region and IGS region that non-transcribed spacer was 462 bp and 1,290 bp in length. The sequence of 5.8S rDNA and 5S rDNA was 153 bp and 43 bp in length, respectively. The 17 bp of the rDNA cluster in the H. marmoreus 3-10 strain was different to that in the H. marmoreus 1-1 strain, with 2 bp in the SSU, 3 bp in the ITS, 9 bp in the LSU, and 3 bp in the IGS. The analysis of the secondary structure revealed that the ITS regions of H. marmoreus 3-10 and H. marmoreus 1-1 have five stem-loop structures. Interestingly, among these structures, one different nucleotide sequence resulted in a different secondary structure in stem-loop V.
We analyzed the nuclear-encoded large subunit ribosomal RNA gene (LSU rDNA) sequences of 19 dinoflagellates occurring in costal waters off Korea and reconstructed a phylogenetic tree containing 74 representative species from 37 distinct genera. Of these, the LSU rDNA sequences of Amylax triacantha (Jörgensen) Sournia, Gonyaulax verior Sournia (= Amylax diacantha Meunier), Gyrodinium fissum (Levander) Kofoid et Swezy, Katodinium glaucum (Lebour) Lebour III, Noctiluca scintillans (Macartney) Kofoid et Swezy, Oxyphysis oxytoxoides Kofoid, and Pyrophacus steinii (Schiller) Wall et Dale are reported for the first time. Our LSU rDNA tree consistently placed Oxyrrhis marina Dujardin and N. scintillans at the most primitive positions, giving rise to a strongly supported monophyletic group of typical dinoflagellate species belonging to the Dinophyceae. The phylogenetic relationships among the typical dinoflagellates, however, were not resolved in the higher taxonomic levels in general. Only genera at terminal branches were usually supported with high confidence. The Dinophysiales, represented by Dinophysis species and O. oxytoxoides, formed a strongly supported monophyletic assemblage. The Gymnodiniales and Peridiniales were recovered as polyphyletic groupings. Members of the Gonyaulacales were consistently grouped together, but lacked statistical support. Within this order, the Ceratiaceae and Goniodomataceae each formed a monophyletic group, but the Gonyaulacaceae was polyphyletic. The phylogenetic relationships of the Gonyaulacaceae were generally congruent with differences in the combinations of the apical pore complex, hypothecal organization and thecal formula.
In this study, we isolated endophytic fungal strains from the rhizoid and the leaf of Mnium heterophyllum and Hypnum plumaeforme, respectively. The isolated strains were identified based on morphological characters and molecular analysis of the internal transcribed spacer, large subunit rDNA, β-tubulin, and RNA polymerase II subunit regions. From the results, we confirmed two endophytic fungal species, Cercophora thailandica, and Biscogniauxia petrensis, which to the best of our knowledge, have not yet been reported in Korea. We further describe the morphological characteristics and the results of the molecular analyses of these isolated fungal strains.
A portion (7.4 kb) of ribosomal DNA tandem repeat unit from a genome of the mushroom T. matsutake has been cloned. A 1.75 kb EcoRI fragment was cloned first using S. cerevisiae 255 rRNA gene as a probe, and this was then used for further cloning. A chromosomal walking experiment was carried out and the upstream region of the 1.75 kb fragment was cloned using SmaI/BamHI enzyme, the size was estimated to be 5.2 kb in length. Part of the downstream region of the 1.75 kb fragment was also cloned using XbaI/BamHI enzymes. Restriction enzyme maps of three cloned DNA fragments were constructed. Northern hybridization, using total RNA of T. matsutake, and the restriction fragments of three cloned DNAs as probes, revealed that all four ribosomal RNA genes (large subunit[LSU], small subunit [SSU], 5.85 and 5S rRNA genes) are present in the cloned region. The gene organization of the rDNA are regarded as an intergenic spacer [IGS]2 (partial) - SSU rRNA - internal transcribed spacer [ITS]1 - 5.8S rRNA - ITS2 - LSU rRNA - IGS1 -5S rRNA - IG52 (partial).
Endophytic fungi were isolated from surface-sterilized roots of a species of orchid, Oreorchis patens, in Korea. The isolated strains were identified based on morphological characteristics and sequence analyses of the internal transcribed spacer (ITS) and large subunit (LSU) of rDNA regions. Two species, Thelonectria veuillotiana and Phialocephala humicola, are first reported in Korea with their descriptions.
We isolated endophytic fungi from the leaves of woody plants inhabiting the Ulleungdo Island and Yeosu in South Korea. The fungal strains were identified based on their morphological characteristics in conjunction with phylogenetic analysis, which was performed using sequences of the internal transcribed spacer, large subunit rDNA, and β-tubulin DNA. We confirmed the presence of Neofusicoccum mangiferae and Thyronectria cucurbitula, two endophytic fungal species that had not been previously recorded in Korea. In this report, we describe the morphological characteristics of these fungal strains and results of the DNA-based phylogenetic analysis.
An unrecorded Antrodia species was collected in South Korea and based on morphological characteristics, the species was identified as Antrodia sitchensis. To confirm its affinity within the polypores, the phylogenetic relationships of A. sitchensis and allied species were established using large subunit rDNA sequences.
Park, Hyeok;Lee, Jong-Chul;Gwon, Ju-Hui;Lee, Hyang Burm;Eom, Ahn-Heum
The Korean Journal of Mycology
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v.49
no.1
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pp.81-86
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2021
We isolated endophytic fungi from Smilax china and Cryptomeria japonica. These fungal strains were identified based on their morphological characteristics and phylogenetic analyses of their internal transcribed spacer, large subunit rDNA, and translation elongation factor 1-α DNA. Among them, we discovered two fungi belonging to the genus Phyllosticta, which have not been previously recorded in Korea. We have described these two fungal strains, Phyllosticta ericarum 19E458 and Phyllosticta philoprina 19E012 in this study.
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