Nineteen strains of bacteriocin-producing lactic acid bacteria were isolated from 432 Kimchi samples, and identified by the comprehensive biochemical and morphological tests verifying their cellular fatty acid composition. Using partially purified bacteriocins from these isolates, their inhibitory activities against other lactic acid bacteria and some pathogens, and sensitivity to enzyme and heat treatments were tested. The isolates were identified as Lactobacillus plantarum (2 strains), L curvatus (2 starins), L brevis (2 strains), Enterococcus faecium (6 strains), Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides (1 strain) and Lactobacillus sp. (6 strains). The bacteriocins produced by E. faecium strains provided the broadest spectrum of inhibition, affecting against other Gram-positive bacteria including lactic acid bacteria and health-threatening bacteria such as Clostridium perfringens and Listeria monocytogenes. The bacteriocins of Lactobacillus sp., L plantarum and L brevis strains were capable of inhibiting many strains of the lactic acid bacteria, whereas those of L curvatus and L mesenteroides subsp. mesenteroides strains were only inhibitory to a few strains. Generally, the inhibitory activities of both E. faecium and Lactobacillus sp. strains were greater than those of other producer strains. The bacteriocins from the isolates were sensitive to several proteolytic enzymes, and those of L curvatus and L mesenteroides subsp. mesenteroides were also sensitive to lipase and $\alpha$-amylase as well as to proteolytic enzymes. The bacteriocins from the strains of Lactobacillus sp. and a strain of L. brevis were resistant to autoclaving.
Two lactic acid bacteria (LAB) with high ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA)-producing capacity were isolated from naturally aged cheese. Examination of the biochemical features using an API kit indicated that the two strains belonged to Lactobacillus. They were gram positive, rod-type bacteria, and fermented arabinose, melezitose, melibiose and xylose, but did not utilize cellobiose or trehalose. 16S rDNA sequencing analysis confirmed that they were Lactobacillus buchneri and Lactobacillus sp. They were accordingly named as Lactobacillus buchneri OPM-1 and Lactobacillus sp. OPM-2, and could produce GABA from MRS broth supplemented with 10 g/L of monosodium glutamate (MSG) at a productivity of 91.7 and 116.7 mg/L/hr, respectively. Cell extracts of L. buchneri OPM-1 and Lactobacillus sp. OPM-2 showed glutamate decarboxylase (GAD) activity, for which the optimum pH and temperature were 5.5 and $30^{\circ}C$, respectively.
유산 균주들을 신생아 및 성인의 분변으로부터 분리하여 그 중에서도 가장 중금속 흡착능이 크고 중금속에 내성이 있다고 사료되는 균주 KP-3를 선별하여 동정한 결과 Lactobacillus sp.으로 밝혀졌다. 동물 실험에서는 생후 4주령의 Sprague dawley male rat에게 선별한 균주 KP-3를 투여하여 혈액 및 장기 내의 중금속 축적 저해효과가 어느 정도인지 조사하였다. 실험군으로는 SD rat 한 마리당 Lactobacillus sp. KP-3와 중금속 10 ppm을 혼합하여 약 100 ml/day씩 7일간 투여하였다. 대조군으로 중금속과 멸균 생리 식염수를 혼합하여 투여한 군과 Lactobacillus sp. KP-3와 멸균 생리 식염수를 혼합하여 투여한 군, 멸균 생리 식염수 만을 투여한 군으로 분리하여 SD rat 한 마리당 약 100 ml/day씩 7일간 투여하였다. 혈액, 간장 및 신장의 시료를 채취하여 카드뮴(Cd), 크롬(Cr), 납(Pb) 등의 중금속 축적량을 측정하였다. 측정 결과 크롬(Cr)은 신장에 주로 축적되었고, 납(Pb)은 간장과 신장에 주로 많은 축적을 보였고, 실험군인 Lactobacillus sp. KP-3와 중금속을 혼합하여 투여한 군에서는 중금속만을 투여한 군보다 중금속 축적량이 낮은 것으로 나타났다. 카드뮴(Cd), 크롬(Cr), 납(Pb)의 평균 중금속 축적 저해율은 각각 41.8%, 33.4% 44.2%로 나타났다. 특히, 혈액에서의 중금속 축적 저해율은 약 70%로 매우 높게 나타났고 혈액에서의 카드뮴 축적 저해율은 100%로 나타났다. 본 실험에서 탐색하여 최적화된 유산균이라고 생각되는 Lactobacillus sp. KP-3균주는 실험 결과에 의하면 중금속 축적 저해에 효과가 있는 것으로 여겨지며, 또한 유산균이 함유된 식품을 지속적으로 섭취함으로써 체내의 중금속의 축적 억제에 도움이 크게 되리라 생각된다.
본 연구에서는 Kefir를 MRS선택배지에 도말하여 생장이 우수한 Lactobacillus sp. 최종 분리하였다. 분리된 Lactobacillus sp. 균은 API Kit의 당발효 시험과 16s RNA배열 분석으로부터 Lactobacillus rhamnosus로 동정되었다. Lactobacillus rhamnosus균주는 amylase와cellulase, xylanase 비활성이 0.673과 0.269, $0.288\;{\mu}mole/min/mg$으로 높은 활성을 보였다. 그리고, pH 2에서 65% 이상이 잔존하는 강한 pH내성과 1.0% 담즙산이 함유된 배지에서도 72% 생존하는 내담즙성을 나타냈으며, 열안정성도 비교적 뛰어난 것으로 확인되었다. 대장균에 Lactobacillus rhamnosus를 첨가하여 혼합배양시는 18시간이내에 대장균이 100% 사멸되었다. 이상의 결과로부터 분리된 Lactobacillus rhamnosus 균주는 probiotics 로서의 우수한 특성을 가진 것으로 확인되었다.
수분활성을 조절한 오징어육으로 제조한 저염 오징어젓갈의 우점 미생물을 분리 동정하고 숙성중 변화를 조사하였다. 우점미생물은 젖산균으로 Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis, Leuconostoc sp., Pediococcus sp., Streptococcus sp.,로 동정되었으며 총균수의 80%를 차지하였다. 숙성중 Leuconostoc, Streptococcus, Pediococcus는 초기에 급격히 증가하였다가 숙성적기 이후에 급속히 감소하였으며 Lactobacillus는 숙성적기 이후에 급격히 증가하였다. 한편, yeast는 숙성중기 이후에 검출되었으며 숙성말기에 급격히 증가하여 주로 부패에 관여하는 것으로 사료되었다.
어린돼지의 분변으로부터 Salmonella paratyphi에 강한 항균활성을 나타내는 균주를 분리하여, 이 균주를 Lactobacillus sp. KJ-5로 동정하였다. Lactoba C cillus sp. KJ-5 배양액의 항균활성은 균주의 성장에 비례하여 증가하여 정지기에서 최대를 나타냈으며, 최적 항균활성을 위한 배양온도는 $37^{\circ}C$로서 균주의 최적 성장온도와 통일하였다. Lactobacillus sp. KJ5 배양여액의 pH를 6.2로 조정한 경우 항균활성이 약간 감소하였으나, catalase 처리에 의해셔는 항균 활성에 아무런 영향이 없었으므로 배양중에 생성된 산이나 H101 이외의 물질이 항균활성에 관여함을 알 수 있었다. 배양여 액으로 부터 methanol과 acetone 추출에 의하여 S. paratyphi어l 항균활성을 냐타내는 항균물질을 부분정제하였다. 부분정제된 항균물질은 thin-layer chromatography에서 3개의 물질로 분리 되었으며, 이중에 하나가 항균활성을 나타내었다. 또 한 부분정제된 항균물질은 270nm에셔 최대 uv 흉 광도를 나타내였으며, 단백질 가수분해 효소의 처리 에 의하여 완전히 불활성화 되었다. 따라서 Lactob$\alpha$ C cillus sp. KJ-5가 생성하는 항균물질은 저분자량의 단백질일 것으로 추정된다.
항균성 물질인 박테리오신을 생산하는 젖산균을 시판유제품에서 분리하여 그의 형태적, 생리 생화학적 특성을 실험한 결과, Lactobacillus sp. 와 유사한 성질을 나타내어 이를 Lactobacillus sp. GM7311로 명명하여 본 실험의 공시 균주로 사용하였다. 본 균이 생산한 박테리오신은 Gram 양성과 음성균에 고른 항균력을 나타내었고 그중 Proteus mirabilis에 대해 강한 항균력을 나타내어 이를 항균 지표세균으로 선정하여 실험하였다. Lactobacillus sp. GM7311은 초기 pH를 6.0으로 조정한 MRS broth에서 $37^{\circ}C$ 배양한 경우가 박테리오신 생산 최적조건이었고, 이 조건에서 박테리오신은 대수기 말기부터 정상기 초기에 걸쳐 최대로 생산되었고 그 이후에는 약간씩 감소하는 경향을 나타내었다. 생산된 박테리오신의 활성은 산성측 $(pH 2.0\~5.0)$에서는 안정하였으나, pH 6.0 이상에서는 활성이 급격히 감소되는 경향을 나타내었다. 열에 대한 안정성은, pH 5.0의 sodium acetate buffer에 녹인 박테리오신은 $100^{\circ}C$에서 60분 가열에도 활성 변화가 없었으나, 0.02N-HCl(pH 2.3)에 녹인 박테리오신은 $60\~121^{\circ}C$의 가열로 초기 15분 동안 활성이 $40\~50\%$ 정도 감소하였고, 그 이후 $100^{\circ}C$ 이하의 온도에서는 가열시간의 증가에도 활성 변화는 거의 나타나지 않았다. 그리고 유기용매에 대해서는 대체로 불안정하여 acetone, ethanol, iso-butanol, 그리고 ethyl ether을 박테리오신과 동량 혼합하여 $4^{\circ}C$에서 2시간 방치한 결과 초기 활성의 약 $40\%$가 감소하였다.
Cell wall (lactic acid bacteria-sonicated precipitate ; LAB-SP) and cytosoll(lactic acid bacteria-sonicated supernatant ; LAB-SS) fractions were prepared from kimchi fermenting lactic acid bacteria such as Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus brevis, Lactobacillus fermentum , Lactobacillus plantarum and Pediococcus acidilactici, with Lactobacillus acidophillus isolated from yogurt. Using the Ames mutagenicity test and SOS chormotest system, the antimutagenic acitivity of those cell fractions was studied . One hundered eighty $\mu$l of LAB-SP from lactic acid bacteria isolated from kimchi, excepting Pediococcus acidilactici, supressed the mutagenicity of 4-nitroquinoline-1-oxide(4-NQO) in Ames mutagenicity test and SOS chromotes system , by above 90% and 60% , respectively. LAB-SP from lactic acid bacteria also inhibited the mutagenicity mediated by 3-amino-1-methyl-5H-pyrido [4,3-b]indole (Trp-P-2). Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, and Lactobacillus acidphillus had higher antimutagenicity against Trp-P-2). Lactobacillus fermentum , Lactobacillus plantarum , and Lactobacillus acidphillus had higher antimutagenicity against Trp-P-2 than the other lactic acid bacteria. However, LAB-SS of lactic acid bacteria did not show any mutagenic activity against 4-NQO in Ames mutagenicity test and SOS chromotest systems. On the mutagenicity of MEIQ and Trp-P-2 , LAB-SS of lactic acid bacteria from kimchi or dairy products exhibited a weaker inhibitory effect than LAB-SP of those bacteria. These results represent that, whether the lactic acid bacteria from kimchi are viable or nonviable, antimutagenic acitivity was still effective. We suggest that the strong, antimutaganic activity of lactic acid bacteria might be found in the cell wall fraction , rather than in the cytosol fraction.
본 연구는 사료내 복합생균제의 첨가에 따른 육계의 성장률 및 영양소 소화율에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 사양시험은 2일령 Arbor Acre Broiler(♂) 288수를 공시하였고, 사양시험은 5주간 실시하였다. 시험설계는 옥수수-대두박 위주의 사료인 1) 대조구(CON, basal diet), 2) DFM-1(basal diet + 0.2% Enterococcus sp. & Lactobacillur reuteri), 3) DFM-2(basal diet + 0.2% Enterococcus sp. & Lactobacillus plantarum), 4) DFM-3(basal diet + 0.2% Enterococcus sp. & Lactobacillu reuteri & Lactobacillu plantarum), 5) DFM-4(basal diet + 0.2% Enterococcus sp. & Lactobacillus reuteri & Lactobacillus plantarum & Yeast), 6) DFM-5(basal diet + 0.2% Enterococcus sp. &Lactobacillus reuteri & Lactobacillus plantarum & Bacillus subtilis)로 6개 처리로 하였다. 처리당 4반복 12수씩 완전임의 배치하였다. 시작 후 1주까지 생균제 처리구에서 증체량과 사료효율 등에서 대조구보다 높은 결과를 보였으나 유의적인 차이는 없었다. 3∼5주의 기간에서는 생균제 첨가구에서 증체량이 대조구에 비해 개선된 효과를 보였으나 유의적인 차이는 없었다. 전 시험기간에 걸친 변화를 보면 생균제를 첨가한 처리구에서 유의적인 차이는 없었으나 대조구보다 증체량이 높은 경향을 보여 육계 사육기간의 초, 중반기에서 후반기로 갈수록 증체량과, 사료섭취량, 사료효율 등에서 대조구에 비해 개선된 결과를 보였다. DFM-3처리구는 DFM-1보다 성장능력이 낮았으며 DFM-2와 유사하였고, 효모와 Bacillus subtilis가 혼합된 DFM-4와 DFM-5처리구는 높은 성장능력을 보였으나 유의적인 차이는 없었으며 특정생균제의 효과도 발견할 수 없었다. 영양소 소화율은 질소 소화율에서 생균제 처리구가 향상되는 경향을 보였으나 통계적인 차이는 없었다. 결론적으로 복합생균제의 첨가가 복합생균제간 또는 생균제 처리구와 대조구간에는 육계의 생산성에 유의적 차이는 없었으나 후기에 있어서 증체량 및 사료효율을 향상시키는 경향이 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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