The optimal conditions for protoplast fusion between the cells of kanamycin resistant Lactobacillus bulgaricus IFO 13593 and those of lincomycin resistant Lactobacillus helveticus IAM 12090 were investigated in this study. The highest fusion frequency of 9.1*10-4 was obtained when protoplast fusion was carried out for 0.5 min using 40% PEG 4000 solution as a cell fusion stimulant and subsequent post-PEG-incubation was undergone at 30 for 30 min in the PPI medium.
L.helveticus YM-1 과 Str.lactis ${ML}_3$를 탈지유, 배양여액및 함성배지에 단독및 혼합배양 하였을때 산생성량과 당이용성 그리고 상관관계를 검토하였다. 자기자신의 배양여액보다 상대편의 배양여액에서, 단독배양보다 혼합배양의 경우가 산생성 촉진효과가 컸었다. 유당의 이용성은 12시간 배양했을때 Str. lactis ${ML}_3$ 의 경우 0.4%, L.helveticus YM-1은 0.85%. 혼합배양시는 1.05%였다. L.helveticus YM -1의 단독배양과 두균의 혼합배양의 경우 8시간후 배지에 생성된 포도당은 0.22%와 0.10%를 나타낸 다음 점차 감소하였다. L.helveticus YM-1에 의해서 생성된 포도당은 Str.lactis ${ML}_3$의 산생성을 촉진한다고 생각된다.
Lactobacillus helveticus YM-1 과 Streptococcus thermophilus CH-1을 환원탈지유 배지에 접종하여 생육특성 및 배양조건을 검토한 결과 두 균은 전형적인 공생을 나타냈으며 혼합배양시 최적 pH와 온도는 각각 6.5와 4$0^{\circ}C$였다. 또한 두 균 사이에는 단백질 분해력의 차이가 현저하였고 L.helveticus의 배양여액에는 S. thermophilus의 생육을 촉진시키는 물질이 함유되어 있음을 관찰하였다.
Lactobacillus helveticus ATCC 55163을 MRS 및 6%, 12% 유청 배지와 각각에 효모 추출물을 1% 첨가한 유청 배지에서 배양하여 흡광도, pH, 총 산도 값을 측정하므로서 생육특성을 분석하였다. MRS 및 유청 배지에서의 대수기는 $3{\sim}21$시간으로 나타났고, 유청 배지에서의 pH는 $3{\sim}24$시간에 급격한 감소현상을, 총 산도 값은 이 시간대에 급격히 증가하는 반비례 현상을 보였다. 같은 시간대에 12% 유청 배지에 효모추출물을 1% 첨가하였을 때 다른 시험구보다 높은 생균수, 낮은 pH 값과 높은 총 산도 값을 보여 유청 농도와 효모 추출물이 균의 증식에 영향을 주었다.
L. helveticus YM-1과 Str. lactis ML$_3$를 환원탈지유 배지에 혼합배양시켜 단백질 가수분해 활성과 산발효 촉진물질을 검토하였다. 두 균을 8시간 동안 배양한 결과 단백질 가수분해 활성은 현저한 차이를 나타냈으며, 배양액중의 우유 단백질 가순분해물을 측정하여 tyrosine 양으로 환산했을 때 L.helveticus YM-1은 105$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$, Str. lactis ML$_3$는 30$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$였다. 탈지유에 Str. lactis ML$_3$의 배양여액을 첨가하여 L. helveticus YM-1을 배양했었을 때 L. helveticus YM-1의 산 발효를 거의 촉진시키지 못하였으며, 반대로 L. helveticus YM-1의 배양여액을 첨가하여 Str. laclis ML$_3$을 배양했었을 때는 Str. lactis ML$_3$의 산발효를 크게 촉진시켰다. Str. lactis ML$_3$의 산발효 촉진물로는 L. helveticus YM-1이 우유 단백질을 가수분해하여 생산한 분자량 4300 정도의 peptide이며, 이 peptide를 산으로 가수분해한 결과 lysine, arginine, glutamic acid가 주로 많이 존재하였다. 또한 유리 아미노산으로 탈지유에 첨가하여 Str. lactis ML$_3$를 배양했을 때 여러 아미노산 중에서 histidine, glutamic acid, phenylalanine이 산생성을 가장 촉진하였고 isoleucine은 오히려 저해하였다.
인삼은 우수한 약리 활성 작용을 보이는 전통적인 약초이다. 본 연구에는 프로바이오틱스 Lactobacillus helveticus KII13과 Pediococcus pentosaceus KID7 균주를 진세노사이드(ginsenoside) 함량을 증가시키기 위해 조 인삼 추출물을 발효시켜 진세노사이드를 형질전환 시키는데 사용되었다. 발효삼 추출물의 TLC(Thin-layer chromatography) 분석 결과, 5일간의 발효 후 주요 사포닌인 진세노사이드 Rg3, Rh1 및 Rh2로 변환되는 것으로 나타났다. HPLC 분석을 수행하여 주요 및 미량 진 세노사이드를 정량화하였다. 3일째에는 Rg3가 나타나고, 5일째에는 Rh2 및 Rh1이 나타난다. L. helveticus KII13과 P. pentosaceus KID7의 공동 배양은 주요 진세노사이드(Rb1과 Rg1)를 미량 진세노사이드(Rg3, Rh2, Rh1)로 전환시키는 것을 학인하였다.
In vivo antagonistic effect of Lactobacillus helveticus CU 631 and Lactobacillus spp. against typical enteritis causing pathogen Salmonella enteritidis KU 101 have been determined, which showed an increase in survival rate and the decline in viable cell numbers of pathogen in liver and spleen at sacrifice. A signifcant difference in the antagonistic effect against KU 101 were observed, which was species and/or strain dependent of Lactobacillus (p<0.01), the survival rate of the mice in the Salmonella infection by feeding L. helveticus CU 631 has been shown to be 157%, whereas those of L. rhamnosus GG ATCC 53103, L. acidophilus ATCC 4356, L. johnsonii C-4 were 137%, 132%, 119% respectively on the basis of lactobacilli non-associated control KU101 fed mice to be 100%. Viable cells of S. enteritidis KU101 in the liver and in the spleen at sacrifice were decreased in Lactobacillus spp. fed group with no significant difference. The higher level of total secretory IgA concentration in the intestinal fluid of lactobacilli fed mice than control mice have been observed. In vitro antagonistic activity of Lactobacillus spp. against KU101 have been determined, a prominent antagonistic activity of CU 631 against KU 101 were demonstrated.
Damodharan, Karthiyaini;Palaniyandi, Sasikumar Arunachalam;Yang, Seung Hwan;Suh, Joo Won
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권10호
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pp.1675-1686
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2016
We characterized the probiotic properties of Lactobacillus helveticus strains KII13 and KHI1 isolated from fermented cow milk by in vitro and in vivo studies. The strains exhibited tolerance to simulated orogastrointestinal condition, adherence to Caco-2 cells, and antimicrobial activity. Both L. helveticus strains produced bioactive tripeptides, isoleucylprolyl-proline and valyl-prolyl-proline, during fermentation of milk. KII13 showed higher in vitro cholesterol-lowering activity (47%) compared with KHI1 (28%) and L. helveticus ATCC 15009 (22%), and hence, it was selected for in vivo study of cholesterol-lowering activity in atherogenic diet-fed hypercholesterolemic mice. For the study, mice were divided into four groups (viz., normal diet control group, atherogenic diet control group (HCD), KII13-atherogenic diet group (HCD-KII13), and Lactobacillus acidophilus ATCC 43121-atherogenic diet group (HCD-L.ac) as positive control). The serum total cholesterol level was significantly decreased by 8.6% and 7.78% in the HCD-KII13 and HCD-L.ac groups (p < 0.05), respectively, compared with the HCD group. Low-density lipoprotein cholesterol levels in both HCD-KII13 and HCD-L.ac groups were decreased by 13% and 11%, respectively, compared with the HCD group (both, p < 0.05). Analysis of cholesterol metabolism-related gene expression in mice liver showed increased expression of LDLR and SREBF2 genes in mice fed with KII13. By comparing all the results, we conclude that L. helveticus KII13 could be used as a potential probiotic strain to produce antihypertensive peptides and reduce serum cholesterol.
수용성 이상계에서 효율적인 추출발효를 수행하기 위해서는 생체촉매와 생성물이 서로 반대 상에 우세하게 분배되어아 한다. 일반적으로 분자량이 낮은 생성물은 양쪽상에 비슷하게 분배되므로, 상의 조성 등을 조절하여 한쪽상의 체적을 증가시켜 최대한으로 생성물을 추출하여야 한다. 본 연구에서는 PEI와 HEC으로 구성된 수용성 이상계에서 L. helveticus와 젖산의 분배에 미치는 다가 음이온의 농도, pH, 배지의 농도 및 생육배지 농도 등의 영향을 검토하였다. PEI의 상대 이온으로 작용하는 phosphate, sulfate 음이온수의 증가는 PEI 상의 체적을 감소시켜 하부상에 분배되는 세포의 양(Cb)을 감소시켰으며, sulfate 농도의 영향은 phosphate에 비해 적었다. 검토한 범위에서 대략 93%이상의 세포가 HEC-rich상부상에 분배되었다. 이상계에 생육배지 농도를 달리하여 첨가했을 때 배지 중에 존재하는 phosphate와 sulfate 농도에 따라 비슷한 경향을 나타냈지만 낮은 농도로 인하여 그 영향은 크지 않았다. Phosphate 농도에 따른 젖산분배를 검토한 결과 농도가 증가할수록 분배계수는 감소하였으며, 대략 85%가량의 젖산이 PEI의 하부상에 분배되었다. 이 결과로부터 수용성 이상계에서 전하를 띤 저 분자량의 생성물의 추출은 반대 전하를 띠는 폴리머를 하나의 상형성 풀리머로 사용함으로써 증진되었음을 알 수 있었다. 따라서 L. helveticus 세포는 95% 정도가 상부상에 분배되고 젖산은 85%정도가 하부상에 우세하게 분배되므로 PEI/HEC 이상계는 치즈유청으로 부터의 젖산의 추출발효에 가능성이 높은 시스템으로 응용될 수 있는 것으로 생각된다.
The antagonistic activities of 30 strains of lactobacilli against Helicobacter pylori were determined and Lactobacillus helveticus CU631 has been selected as the strain which possesses the strongest inhibitory effect in the disc diffusion assay showing inhibition zone diameter of $10{\pm}1.5mm$, whereas those of L. plantarum and L. fermentum have been shown to be $4.0{\pm}0.6mm$. H. pylori G88016 revealed the highest vacuolating toxin producing activity among the 8 strains, the inhibitory activity of L. helveticus CU631 in vacuolating toxin producing activity of H. pylori manifested in the co-culture of two strains and in the 5:5 mixture of supernatant of the two strains. Both L. helveticus CU631 and cell free culture supernatant had a strong inhibitory activities in urease and cytotoxin producing activities of H. pylori NCTC11637 and CJH12. An accelerated proteolytic activity of water soluble peptides by L. helveticus CU631 during the refrigeration storage has been manifested in the cream cheese. DNA seqences of 16S-23S ribosomal RNA spacer region showed typical pattern among the various strains of L. helveticus, which could be used in the identification of L. helveticus CU 631.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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