We report the construction of a MALDI imaging mass spectrometer equipped with a specially designed laser focusing lens, a compact aspherical singlet lens, that obtains a high-lateral imaging resolution in the microprobe mode. The lens is specially designed to focus the ionization laser (${\lambda}$ = 355 nm) down to a $1{\mu}m$ diameter with a long working distance of 34.5 mm. With the lens being perpendicular to the sample surface and sharing the optical axis with the ion path, the imaging mass spectrometer achieved an imaging resolution of as good as $5{\mu}m$ along with a high detection sensitivity of 100 fmol for peptides. The mass resolution was about 900 (m/${\Delta}m$) in the linear TOF mode. The high-resolution capability of this instrument will provide a new research opportunity for label-free imaging studies of various samples including tissues and biochips, even for the study at a single cell level in the future.
Quartz crystal microbalance immunosensor has a capacity to perform a label-free and real time detection of a trace amount of analyte through the specific interaction between antibody and antigen. However, immobilization of antibody molecules on the sensor surface is a troublesome procedure for researchers who are not experienced in chemistry. Protein G has a specific affinity to antibody and would serve as a capturing agent for antibody when immobilized on the sensor surface. In this work, we prepared a protein G sensor chip by immobilizing protein G on the surface of quartz crystal microbalance and examined its capability to detect human haptoglobin or human transferrin with unpurified corresponding antiserum. Specific and dose dependent response was observed when the protein G chip was used for detection of antigens after saturated with antiserum. We also verified several advantageous aspects of the protein G chip such as improved flexibility and sensitivity.
We developed a one-step method for fabrication of addressable suspended SWNT films and demonstrate excellent detection performance of paraoxon based on OPH-immobilized SWNT films for environmental monitoring. For dispersed SWNT suspension, COOH-SWNT was prepared by the oxidation of carbon nanotubes using acid treatment and sonication. Suspended SWNT-film was fabricated between cantilever electrodes by dielectrophoretic force and surface tension of the water meniscus. After that, OPH were immobilized on suspended SWNT-films by nonspecific binding for enzymatic hydrolysis of paraoxon. The electrical properties of the SWNT films were measured in real time at room temperature. Structurally suspended SWNT films from substrate surface made possible rapid and highly sensitive detection of target molecules with increased convectional and diffusional fluxes of the molecules and with a large binding surface area. SWNT film FET resulted in a real-time, label-free, and electrical detection of paraoxon to the concentration of ca. $10{\mu}m$ with a step-wise rapid response time of several seconds.
Three-dimensional(3D) structure of specific DNA can be changed between two conformations under an external environmental transition such as pH and salt concentration variations. We have experimentally observed the conformational transitions of i-motif DNA using AFM cantilever bioassay. It is shown that pH change of a solvent induces the bending defleciton change of a cantilever functionalized by i-motif DNA. This indicates that cantilever bioassay enables the label-free detection of DNA structural changes upon pH change. It is implied that cantilever bioassay can be a de novo route to quantitatively understand the conformational transitions of biological molecules under environmental changes.
Smart gels have recently associated with photonic crystals to form photonic gels. Since these photonic gels are capable of reversibly converting the volume change of gels induced in response to external chemical or electric stimuli into characteristic optical signals, they have been considered not only as a good platform for label-free chemical or biological detection, actuators or optical switches but also as a good model system to investigate gel swelling behaviour. Recently, we reported block copolymer photonic gels self-assembled from polystyrene-b-poly(2-vinyl pyridine) (PS-b-P2VP) block copolymers, and demonstrated that selective swelling of lamellar structure allows extremely large tunability of the photonic stop band from UV region to IR region ($\lambda$ peak=350~1,600 nm). Herein we report block copolymer photonic gels which exhibit strong tunable optical hysteresis and their applications. As nonlinear responses in swelling of hydrogels were often observed, photonic gels exhibit optical hysteresis with change of external pH. We demonstrate such optical hysteresis can be precisely programmed by controlling ion-pairing affinity. We anticipate that photonic gels with carefully tunned optical hysteresis are applicable to optical memory devices.
Liquid biopsy, the analysis of circulating biomarkers from peripheral blood, such as circulating tumor cells (CTCs) and circulating tumor DNA, and exosomes, offers a less invasive, new source of cancer-derived materials that may reflect the status of the disease better and thereby contribute to personalized treatment. Recent advances in microfluidics and molecular analysis technologies have resulted in greatly improved CTC enumeration and detection. In this article, we review commercially available technologies used to isolate CTCs from peripheral blood, including immunoaffinity and label-free, physical property-based isolation methods. Although enormous technological progress has been made, especially within the last decade, only a few CTC detection methods have been approved for routine clinical use. Here, we provide an overview of the current CTC isolation methods and examples of their potential application for early diagnosis, prognosis, treatment monitoring, and prediction of resistance to cancer therapy. Furthermore, the challenges that remain to be addressed before such tools are implemented for routine use in clinical settings are discussed.
Exosomes have gained the attention of the scientific community because of their role in facilitating intercellular communication, which is critical in disease monitoring and drug delivery research. Exosome research has grown significantly in recent decades, with a focus on the development of various technologies for isolating and characterizing exosomes. Among these efforts is the use of matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) mass spectrometry (MS), which offers high-throughput direct analysis while also being cost and time effective. MALDI is used less frequently in exosome research than electrospray ionization due to the diverse population of extracellular vesicles and the impurity of isolated products, both of which necessitate chromatographic separation prior to MS analysis. However, MALDI-MS is a more appropriate instrument for the analytical approach to patient therapy, given it allows for fast and label-free analysis. There is a huge drive to explore MALDI-MS in exosome research because the technology holds great potential, most notably in biomarker discovery. With methods such as fingerprint analysis, OMICs profiling, and statistical analysis, the search for biomarkers could be much more efficient. In this review, we highlight the potential of MALDI-MS as a tool for investigating exosomes and some of the possible strategies that can be implemented based on prior research.
Purine catabolite screening enables reliable diagnosis of certain diseases. In this regard, the development of a facile detection strategy with high sensitivity and selectivity is demanded for point-of-care applications. In this work, the simultaneous detection of uric acid (UA), xanthine (XA), and hypoxanthine (HX) was carried out as model purine catabolites by surface-enhanced Raman Spectroscopy (SERS). The detection assay was conducted by employing high-aspect ratio Au nanopillar substrates coupled with in-situ Au electrodeposition on the substrates. The additional modification of the Au nanopillar substrates via electrodeposition was found to be an effective method to encapsulate molecules in solution into nanogaps of growing Au films that increase metal-molecule contact and improve substrate's sensitivity and selectivity. In complex solutions, the approach facilitated ternary identification of UA, XA, and HX down to concentration limits of 4.33 𝜇M, 0.71 𝜇M, and 0.22 𝜇M, respectively, which are comparable to their existing levels in normal human physiology. These results demonstrate that the proposed platform is reliable for practical point-of-care analysis of biofluids where solution matrix effects greatly reduce selectivity and sensitivity for rapid on-site disease diagnosis.
Our current food hygiene law mandates nutrition label (NL) for the special nutrition foods, health support foods, instant foods, and foods with certain nutrient emphasized note, only. Currently more processed foods are bearing nutrition labels though the format is quite inconsistant. This study examined the status on current nutrition labeling practices for the processed foods that are retailed in the supermarket. The obtained information was assessed in the aspects of numerical data presentation on nutrients content, descriptive terms, health claim, and the format. The results are summarized as follows. 1) Foods with NL are limited to the food category specified by current hygiene law while voluntary nutition labeling is few. 2) Descriptive terms such as free, low, and sufficient are not substantiated with quantitative data. The efficacy of microelements which has not been clalified yet are overemphasized but major nutrients are ignored. 3) The regulations for the descriptive terms are set on the base of the nutrient content per 100g or 100ml under current nutrition labeling act. It would mislead consumers thus the definition for these descriptor be better set on the unit of the amount of food customary eaten at one time. For this the standard serving size should be set officially. 4) Quantitative nutrition information given on food products is difficult to compare because of the lack in formality. The title of NL, load and kinds of nutritents, order of nutrients listed, the unit of expression, RDA comparision, and reference RDA are inconsistant among the foods similar in dietary property. Uniform format is needed to give NL the credibility and usefulness. Proividing nutrition information to the consumers with NL is a worldwide practice though its efficacy has been controversial. Under newly legistered health promotion law in Korean nutrition education is esxpected to take part in to improve national nutrition condition and NL would education is expected to take part in to improve national nutrition condition and NL would be a potent tool for public nutritions education. It appears to be the time to mandate NL to all the processed foods in the market. The result of present study would initiate further consumer experiments related to NL. Various interest groups such as food and nutrition professions, public health organizations, government regulatory agencies, food producers and marketers, and consumer groups need to particepate and communicate for the legislation of NL and the development of NL format.
Over the recent years, surface enhanced Raman spectroscopy (SERS) has dramatically grown as a label-free detecting technique with the high level of selectivity and sensitivity. Conventional SERS-active nanostructured layers have been deposited or patterned on rigid substrates such as silicon wafers and glass slides. Such devices fabricated on a flexible platform may offer additional functionalities and potential applications. For example, flexible SERS-active substrates can be integrated into microfluidic diagnostic devices with round-shaped micro-channel, which has large surface area compared to the area of flat SERS-active substrates so that we may anticipate high sensitivity in a conformable device form. We demonstrate fabrication of flexible SERS-active nanostructured substrates based on soft-lithography for simple, low-cost processing. The SERS-active nanostructured substrates are fabricated using conventional Si fabrication process and inkjet printing methods. A Si mold is patterned by photolithography with an average height of 700 nm and an average pitch of 200 nm. Polydimethylsiloxane (PDMS), a mixture of Sylgard 184 elastomer and curing agnet (wt/wt = 10:1), is poured onto the mold that is coated with trichlorosilane for separating the PDMS easily from the mold. Then, the nano-pattern is transferred to the thin PDMS substrates. The soft lithographic methods enable the SERS-active nanostructured substrates to be repeatedly replicated. Silver layer is physically deposited on the PDMS. Then, gold nanoparticle (AuNP) inks are applied on the nanostructured PDMS using inkjet printer (Dimatix DMP 2831) to deposit AuNPs on the substrates. The characteristics of SERS-active substrates are measured; topology is provided by atomic force microscope (AFM, Park Systems XE-100) and Raman spectra are collected by Raman spectroscopy (Horiba LabRAM ARAMIS Spectrometer). We anticipate that the results may open up various possibilities of applying flexible platform to highly sensitive Raman detection.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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