CHOI, DAE KEON;WUK SANG RYU;BONG HYUN CHUNG;SOO WAN NAM;YOUNG HOON PARK
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제2권2호
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pp.102-107
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1992
For the purpose of producing L-ornithine by microbial fermentation, mutant strains were developed from glutamate-producing bacteria by mutagenesis using N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) and UV irradiation. Brevibacterium ketoglutamicum BK1046, a L-citrulline auxotroph which is also resistant to arginine hydroxamate (Arghx), was isolated and selected as the best producer of L-ornithine. This strain was capable of producing L-ornithine at a concentration of 24 g/l after 69 hours of cultivation in the 21 jar fermentor. The optimum supplementary level of L-arginine, a substitute for L-citrulline, was found to be about 0.2 g/l in the shake-flask fermentation.
Improvement of L-asparate ${\beta}-decarboxylase$ production from Pseudomonas dacunhae ATCC 21192 was attempted by optimizing fermentation conditions. Optimum carbon and nitrogen sources for cell growth and enzyme production were determined. L-Glutamate (2%) was the most suitable carbon source, and D-glucose, D-glycerol and fumarate repressed enzyme production. Yeast extract (2%) was the most effective as nitrogen source. A slight change of pH to 6.5 from medium pH resulted in a meaningful increase in the production of enzyme. The production of the enzyme was highly improved by using 2% yeast extract and 2% L-glutamate in culture media. Maximum L-asparate ${\beta}-decarboxylase$ activity reached up to over 24 U/mL-broth by 15 h flask fermentation.
The effects of ammonium ion and glutamate on CO2 fixation abilities and related carbon metabolism were investigated in pea (Pisum sativum L. cv. Sparkle) leaf discs under conditions favoring photorespiration (21% O2, 0.03% CO2) and nonphotorespiration (5% O2, 0.03% CO2). A concentration of more than 10 mM of NH4+ decreased the photosynthetic CO2 fixation and those inhibitory effects were more remarkable in 21% O2 than in 5% O2 conditions. The effect of glutamate on CO2 fixation was found to be independent of the O2 level, as glutamate increased the CO2 fixation under both 21% and 5% O2 conditions. L-methionine-dl-sulfoximine, an irreversible inhibitor of glutamate synthetase, however, inhibited the CO2 fixation markedly under 21% O2, but did not affect it under 5% O2 conditions. The treatment with NH4+ elevated the relative amounts of 14C incorporated into soluble components from 14CO2 with no relation to O2 levels, while glutamate increased 14C into insoluble components and neutral sugars. Glutamate, especially, seemed to stmulate the biosynthesis of starch under 5% O2 condition. These results indicated that NH4+ stimulated the degradation of sugar or starch and this proposal was confirmed by the increasing of pyruvate kinase activity in leaf discs treated with ammonium ion.
Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal motor neuron disorder that causes progressive paralysis. L-Citrulline is a nonessential neutral amino acid produced by L-arginine via nitric oxide synthase (NOS). According to previous studies, the pathogenesis of ALS entails glutamate toxicity, oxidative stress, protein misfolding, and neurofilament disruption. In addition, L-citrulline prevents neuronal cell death in brain ischemia; therefore, we investigated the change in the transport of L-citrulline under various pathological conditions in a cell line model of ALS. We examined the uptake of [14C]L-citrulline in wild-type (hSOD1wt/WT) and mutant NSC-34/ SOD1G93A (MT) cell lines. The cell viability was determined via MTT assay. A transport study was performed to determine the uptake of [14C]L-citrulline. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) analysis was performed to determine the expression levels of rat large neutral amino acid transported 1 (rLAT1) in ALS cell lines. Nitric oxide (NO) assay was performed using Griess reagent. L-Citrulline had a restorative effect on glutamate induced cell death, and increased [14C]L-citrulline uptake and mRNA levels of the large neutral amino acid transporter (LAT1) in the glutamate-treated ALS disease model (MT). NO levels increased significantly when MT cells were pretreated with glutamate for 24 h and restored by co-treatment with L-citrulline. Co-treatment of MT cells with L-arginine, an NO donor, increased NO levels. NSC-34 cells exposed to high glucose conditions showed a significant increase in [14C]L-citrulline uptake and LAT1 mRNA expression levels, which were restored to normal levels upon co-treatment with unlabeled L-citrulline. In contrast, exposure of the MT cell line to tumor necrosis factor alpha, lipopolysaccharides, and hypertonic condition decreased the uptake significantly which was restored to the normal level by co-treating with unlabeled L-citrulline. L-Citrulline can restore NO levels and cellular uptake in ALS-affected cells with glutamate cytotoxicity, pro-inflammatory cytokines, or other pathological states, suggesting that L-citrulline supplementation in ALS may play a key role in providing neuroprotection.
These studies were designed to examine the differential effect of nitric oxide (NO) and cGMP on glutamate neurotransmission. In primary cultures of rat cerebellar granule cells, the glutamate receptor agonist N-methyl-D-aspartate (NMDA) stimulates the elevation of intracellular calcium concentration ($[Ca^{2+}]_i$), the release of glutamate, the synthesis of NO and an increase of cGMP. Although NO has been shown to stimulate guanylyl cyclase, it is unclear yet whether NO alters the NMDA-induced glutamate release and ${[Ca^{2+}]}_i$ elevation. We showed that the NO synthase inhibitor, NG-monomethyl-L-arginine (NMMA), partially prevented the NMDA-induced release of glutamate and elevation of ${[Ca^{2+}]}_i$ and completely blocked the elevation of cGMP. These effects of NO on glutamate release and [Ca2+]i elevation were unlikely to be secondary to cGMP as the cGMP analogue, dibutyryl cGMP (dBcGMP), did not suppress the effects of NMDA. Rather, dBcGMP slightly augmented the NMDA-induced elevation of ${[Ca^{2+}]}_i$ with no change in the basal level of glutamate or ${[Ca^{2+}]}_i$. The extracellular NO scavenger hydroxocobalamine prevented the NMDA-induced release of glutamate providing indirect evidence that the effect of NO may act on the NMDA receptor. These results suggest that low concentration of NO has a role in maintaining the NMDA receptor activation in a cGMP-independent manner.
폴리감마글루탐산(PGA)을 대량생산하는 균주를 축분퇴비에서 분리하고 생리 생화학적 특징 및 16s rRNA 염기서열을 분석한 결과, Bacillus subtilis로 동정하고 strain CH-10 으로 명명하였다. PGA 생산을 위한 배지의 최적 온도와 pH는 각각 $37^{\circ}C$, 7.5 이었다. 또한 배지성분 중에서 PGA 생산에 최적인 탄소원과 질소원은 각각 5% sucrose와 3% L-glutamate인 것으로 나타났다. 이 균주는 L-glutamate에 의해 PGA 생산이 대량으로 유도되었고 따라서 질소원으로 L-glutamate를 반드시 필요로 하는 glutamate 의존성 균주인 것으로 사료되었다. 배양시간에 따라 생산된 PGA의 생화학적 특정을 SDS-PAGE와 ninhydrin 분석을 통하여 검토하였다. PGA의 생산량은 배양시간에 따라 증가하였고 배양 후 96시간에서 최고 생산량을 나타내었다, 생산된 PGA의 평균분자량을 FDNB법으로 분석한 결과, 1,100 kDa인 것으로 나타났다.
Changes in the release and uptake of glutamate in cerebellar granule and glial cells of offspring of lead-exposed mothers were determined. In cultured cerebellar granule cells exposed to lead for 5 days, glutamate release was less influenced upon N-methyl-D-aspartate (NMDA) stimulation than that in the control. Although the NMDA-stimulated release of glutamate in cerebellar granule cells prepared from lead-exposed first generation pups was not different from that of the control group, the S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP)-stimulated release of glutamate in cerebellar granule cells obtained from lead-treated pups was less elevated than that in the control. Furthermore, in cerebellar granule cells obtained from lead-exposed second generations pups, glutamate release did not respond to both NMDA and SNAP stimulation. In cerebellar glial cells exposed to lead, the basal glutamate uptake was not changed. However, the L-trans-pyrollidine-2,4-dicarboxylic acid (PDC)-blocking effects was significantly reduced. In glial cells obtained from lead-exposed pups, the glutamate uptake was also less blocked by PDC than that in the control. Further decreases in PDC-blocking effects were observed in cerebellar glial cells obtained from lead-treated second generation pups compared to those from the control group. These results indicate that lead exposure induces the changes in the sensitivities of the glutamate release and uptake transporter. In addition, these results suggest that lead exposure might affect the intracellular signalling pathway and transmission in glutamatergic nervous system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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