Baik, Ji Sue;Seo, You Na;Rhee, Man Hee;Park, Moon-Taek;Kim, Sung Dae
대한의생명과학회지
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제27권3호
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pp.170-176
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2021
Thapsigargin (TG), a sarco/endoplasmic reticulum (ER) Ca2+-ATPase (SERCA) inhibitor, has been widely used as an agonist for platelet aggregation for decades. In this study, we investigated the effect of TG on the release of lactate dehydrogenase (LDH) for platelets and elucidated its mechanism. Platelet LDH release and platelet aggregation were increased by TG treatment; 1,000 nM of TG induced the complete lysis of platelets. Other agonists such as collagen (2.5 ㎍/mL), thrombin (0.1 U/mL), and ADP (10 mM) did not induce significant platelet LDH release despite platelet aggregation. Finally, we investigated the effects of pharmacological inhibitors on TG-induced platelet aggregation and LDH release. SP600125, a JNK inhibitor, and LY294002, a PI-3K inhibitor, inhibited TG-induced platelet LDH release but not platelet aggregation. Forskolin, an adenylyl cyclase activator, also inhibited LDH release without affecting platelet aggregation by TG. These results suggest that the TG-induced platelet aggregation was accompanied by LDH release but regulated by a different signaling pathway.
With transient flooding followed by poor or slow drainage plant roots may become reduction conditions because the root zone was fully filled with water. This study was examined the effects of calcium treatment in the early growth stage on biochemical changes in leaves and roots of melon (Cucumis melo L.) seedlings kept under flooding condition for 72 h. The activities of lactate dehydrogenase more gradually enhanced in the roots than those of leaves of melon seedlings treated with calcium. The activities of alcohol dehydrogenase associated with alcohol fermentation under low oxygen conditions continuously increased in the leaves and roots of seedlings untreated with calcium under flooding at least 72 h but those was constant within at least 12 h in treated with calcium. These results showed that calcium supplying in the early growth stage mitigated alcohol fermentation of melon seedlings kept under flooding condition for 72 h. Activities of nitrate reductase and acid phosphatase in the leaves and roots of seedlings in treated with calcium somewhat higher than those of non-treated with calcium. The activities of sucrose phosphate synthase and fructose-1,6-bisphosphatase of leaves of seedlings in treated with calcium more higher than those of non-treated with calcium. These results indicated that calcium nutrition mitigate the reduction of activities of some enzymes of melon seedling kept under flooding condition for 72 h.
The objective of this work was to isolate a microorganism, able to produce high lactate dehydrogenase (LDH) activity, for use as a microbial feed additive. The LDH is an important enzyme for lactate conversion in the rumen, thereby possibly overcoming lactic acidosis owing to sudden increases of cereal in the diets of ruminants. In the present study, various bacterial strains were screened from a variety of environments. Among the isolated microorganisms, strain FFy 111-1 isolated from a Korean traditional fermented vegetable food called Kimchi showed the highest enzyme activity, along with retaining strong enzyme activity even in rumen fluid in vitro. Based on morphological and biochemical characteristics as well as compositions of cellular fatty acids plus API analyses, this strain was identified as Lactobacillus sp. The optimum temperature and pH for growth were found to be 30$^{\circ}C$ and pH 6.5, respectively. A maximum cell growth of 2.2 at $A_{650}$ together with LDH activity of 2.08 U per mL was achieved after 24 h of incubation. Initial characterization of FFy 111-1 suggested that it could be a potential candidate for use as a direct-fed microbial in the ruminant animals.
본 연구는 미생물 유래 lactate dehydrogenase(LDH)를 이용하여 반추위내에 lactate 축적을 예바하기 위한 기능성 검증을 목적으로 수행되었다. 미생물의 효소활성에 영향을 주는 많은 반추위내 요인들 중 대표적인 것들 즉, 온도, pH, 휘발성지방산(VFAs) 그리고 금속이온들이 Lactobacillus sp. FFy111-1의 LDH 효소활성에 미치는 영향과, 반추위액내 축적된 lactate에 대한 LDH 작용을 평가하였다. Lactobacillus sp. FFy111-1의 LDH는 각각 pH 7.5와 40$^{\circ}C$에서 가장 좋은 효소 활력을 보였다. 온도 안정성은 30$^{\circ}C$에서 가장 좋게 나타났으며 30${\sim}$50$^{\circ}C$의 온도 범위에서는 80% 이상의 활성을 유지하였다. 그리고 pH 안정성은 pH 7.0과 8.0에서 모두 가장 좋은 결과를 나타냈으며 pH 6.1과 6.5에서 64% 이상의 효소활성을 유지하였다. VFAs와 금속이온이 LDH에 미치는 영향을 측정하였을 때, VFAs 처리는 LDH 효소활성을 억제하였으나, NaCl과 $CuSO_4$를 제외한 금속 이온 처리에서는 LDH 효소활성이 증가되었다. 특히 2mM $BaCl_2$와 $MgSO_4$로 처리 하였을 때 가각 비처리 효소활성의 127과 124% 수준까지 효소활성이 증진되었다. 반추위액내 축적된 lactate에 대한 LDH 작용을 보기 위하여 Lactobacillus sp. FFy111-1의 효소를 산중독 반추위액에 처리하였을 때 lactate의 농도가 무처리 반추위액내 lactate 농도의 78% 수준으로 감소하였다(P<0.05). 이와 같은 lactate 감소는 LDH의 작용에 의해 나타난 현상으로 정제된 D,L-LDH를 첨가한 실험결과(34% lactate)에서 입증되었다(P<0.05). 이상의 연구 결과들을 고려하여 볼 때 미생물이 생성한 LDH는 반추위내 축적된 lactate를 감소시킬 수 있는 충분한 가능성을 갖고 있다고 사료된다. 또한 더 좋은 미생물의 발굴과 반추위 환경에서 LDH 활성을 높이기 위한 기술개발이 LDH 효소의 실제적 응용을 위하여 필수적이다.
Park, Jar-Yong;Park, Sun-Jung;Nam, Su-Jin;Ha, Yeong-Lae;Kim, Jeong-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권5호
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pp.716-721
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2002
The ldhL gene encoding the $_L$-(+) lactate dehydrogenase was cloned from Lactobacillus reuteri ATCC 55739 chromosomal DNA and characterized. An internal 750-bp fiagment of ldhL gene was amplified by PCR using primers based on the conserved region of lactobacilli ldhL genes. A genomic library off. reuteri ATCC 55739 was constructed using pBR322, and colony hybridization experiments were performed using the 750-bp fragment as aprobe. One clone harboring a 4.0-kb PstI fragment was identified, and nucleotide sequencing confirmed it as an open reading frame of 972 bp in size in the middle. In addition to IdhL gene, an ORF homologous to Streptococcus pneumoniae TIGR4 hydrolase gene and 3' part of phosphomevalonate kinase gene (mvaK2) were also found on the 4 kb fragment. $_L$-LDH of L. reuteri ATCC 55739 showed the highest degree of homology with the $_L$-LDH of Pediococcus acidilactici (62.4%), fullowed by the $_L$-LDH of Lactobacillus pentosus (58.7%). The size of IdhL transcript determined by Northern blot was 1 kb, indicating the monocistronic nature of IdhL.
본 연구는 8주간의 고강도 동계 훈련 시 L-아르기닌 섭취가 남자 대학 태권도 겨루기 선수의 경기수행능력, 젖산, 젖산탈수소효소 및 암모니아에 미치는 영향을 구명하기 위해 L-아르기닌 섭취군(n=14), 위약군(n=14)으로 구분하여 실시하였다. L-아르기닌 섭취군은 일일 아침 1 g, 점심 1 g, 저녁 1 g으로 총 3 g 섭취하였고 위약군은 말토덱스트린을 동일한 방법으로 섭취하였다. 8주간의 동계 훈련 프로그램은 70-90%HRR로 실시하였다. 측정된 자료의 L-아르기닌 섭취군과 위약군 간의 그룹 및 시기 간 상호작용 효과는 two-way repeated measures ANOVA, 그룹 내 시기 간 차이는 paired t-test를 사용하였으며, 그룹 간 차이는 independent t-test를 사용하여 분석하였다. 그 결과 TAAA (Taekwondo-specific aerobic anaerobic agility) test를 통한 경기수행능력 중 평균 발차기 수에서 그룹×시기 간 상호작용 효과가 나타났으며 그룹 간 주효과가 나타났다(p<.05). 또한, 발차기 피로지수에서 그룹×시기 간 상호작용 효과가 나타났다(p<.05). 한편, 젖산에서는 시기 간 주효과가 나타났으며(p<.05) 젖산탈수소효소에서 상호작용 효과 및 시기 간 주효과 나타났다(p<.05). 암모니아의 경우 그룹×시기 간 상호작용 효과가 나타났다(p<.05). 이러한 결과는 남자 대학 태권도 겨루기 선수의 고강도 훈련 후 피로에 쉽게 노출되는 선수들에게 L-아르기닌 섭취로 인해 체내 피로 유발 물질들을 신속하게 제거하는 데 긍정적인 역할을 할 수 있다고 사료된다. 따라서 고강도 엘리트 태권도 겨루기 운동선수의 경기수행능력 향상과 피로 회복 방법으로 L-아르기닌 섭취를 권장한다.
This study describes a novel strategy to regulate the metabolic flux for lactic acid production in Lactobacillus casei. The ldhL gene encoding L-lactate dehydrogenase (L-LDH) was overexpressed in L. casei, and a two-stage oxygen supply strategy (TOS) that maintained a medium oxygen supply level during the early fermentation phase, and a low oxygen supply level in the later phase was carried out. As a consequence, a maximum L-LDH activity of 95.6 U/ml was obtained in the recombinant strain, which was over 4-fold higher than that of the initial strain. Under the TOS for L. casei (pMG-ldhL), the maximum lactic acid concentration of 159.6 g/l was obtained in 36 h, corresponding to a 62.8% increase. The results presented here provide a novel way to regulate the metabolic flux of L. casei for lactic acid production in different fermentation stages, which is available to enhance organic acid production in other strains.
진도개와 삽사리 혈청 lactate dehydrogenase와 혈청 alkaline phosphatase의 동위효소 및 효소활성도를 분석하였다. 전기영동결과 진도개와 삽사리의 혈청에서는 5두지 종류의 LDH의 동위효소가 모두 확인되었다. LDH의 활성도는 진도개의 경우 522.53 $\pm$ 279.96(U/L)이었고 삽사리는 534.10 $\pm$ 280.35(U/L)이었다. 진도개와 삽사리의 혈청 alkaline phosphatase전기 영동상에서 는 한 종류의 동위효소만 관찰되었고 활성도는 진도개의 경우 7.61 $\pm$ 4.52(K-A unit)였고 삽사리는 10.46 $\pm$ 7. 10(K-A unit) 였다. 삽사리의 ALP 활성도는 연령에 따라 커다란 차이를 나타내었다.
칠성장어(Lampetra japonica) 간조직 젖산탈수소효소(EC 1.1.1.27, lactate dehydrogenase, LDH) 동위효소는 affinity chromatography에서 buffer를 유입한 후 용출된 분획에서 정제되었다. 대구(Gadus macrocephalus)의 liver-specific $C_4$동위효소는 열처리한 후 affinity chromatography하여 NAD+ 를 함유한 buffer에서 용출되기 시작하여 buffer를 유입한 후 $B_4$ 동위효소와 함께 용출되어, DEAE-Sephacel chromatography에 의해 정제되었다. 대구 간조직에서 열에 대한 안정성은$C_4$$B_4$$A_4$ 동위효소의 순서로 나타났다. Chromate-focusing에 의해 정제한 칠성장어 간조직의 pH 7.45 분획의 LDH 동위효소는 정제된 간조직 LDH보다 피루브산에 의한 기질저해도가 컸다. 칠성장어 간조직 LDH의 최적 pH는 7.5, liver-specific $C_4$동위효소는 pH 8.5였다. 칠성장어 간조직 LDH는 항원-항체반응에서 꺽지 $A_4$ 항체와 liver-specific $C_4$ 항체의 순서로 반응하였고 eye-specific $C_4$ 항체와는 반응 정도가 낮았다. 따라서 칠성장어 간조직 LDH는 하부단위체 A와 liver-specific $C_4$의 구조와 유사하게 진화되었으며, 하부단위체 C 는 진화속도가 매우 빠른 것으로 확인되었다. 칠성장어 간조직의 LDH는 단일 동위효소가 아니라, 하부단위체 A, B 및 C로 구성된 동위효소들인 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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