Previously, we have cloned and characterized two ADP-ribosyltransferases (Yac-1 and Yac-2) from mouse Iym-phocyte. Yac-2 transferase contains significant NAD glycohydrolase activity as well as ADP-ribosyltransferase acti-vity. Yac-2 has an arginine at position 221 between two conserved glutamic acids. To investigate the significance of Arg-221 on enzyme activities, Arg-221 was mutagenized to Glu (R221E) and to Ala (R221A). Mutants R221E and R221A were active as wild type for ADP-ribosyltransferase and NAD glycohydrolase activity, suggesting that the arginine 221 in Yac-2 does not play a major role in enzyme activities.
Lee, Hyung-Jin;Dietrich, Hans H.;Han, Byung Hee;Zipfel, Gregory J.
Journal of Korean Neurosurgical Society
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v.57
no.1
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pp.1-5
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2015
Objective : Cerebral vessels, such as intracerebral perforating arterioles isolated from rat brain, have been widely used as an ex vivo model to study the cerebrovascular function associated with cerebrovascular disorders and the therapeutic effects of various pharmacological agents. These perforating arterioles, however, have demonstrated differences in the vascular architecture and reactivity compared with a larger leptomeningeal artery which has been commonly implicated in cerebrovascular disease. In this study, therefore, we developed the method for studying cerebrovascular function utilizing the olfactory artery isolated from the mouse brain. Methods : The olfactory artery (OA) was isolated from the C57/BL6 wild-type mouse brain. After removing connective tissues, one side of the isolated vessel segment (approximately $-500{\mu}m$ in length) was cannulated and the opposite end of the vessel was completely sealed while being viewed with an inverted microscope. After verifying the absence of pressure leakage, we examined the vascular reactivity to various vasoactive agents under the fixed intravascular pressure (60 mm Hg). Results : We found that the isolated mouse OAs were able to constrict in response to vasoconstrictors, including KCl, phenylephrine, endothelin-1, and prostaglandin $PGH_2$. Moreover, this isolated vessel demonstrated vasodilation in a dose-dependent manner when vasodilatory agents, acetylcholine and bradykinin, were applied. Conclusion : Our findings suggest that the isolated olfactory artery would provide as a useful ex vivo model to study the molecular and cellular mechanisms of vascular function underlying cerebrovascular disorders and the direct effects of such disease-modifying pathways on cerebrovascular function utilizing pharmacological agents and genetically modified mouse models.
The biweekly monitoring of paralytic shellfish toxin on wild mussels (Mytilus corsucus) was carried out at Jangmok Bay, near Koje Island from Feb, 1996 to Feb. 1997. Toxicity and toxin composition were monitored by means of the mouse bioassay and HPLC. Paralytic shellfish toxin was detected from 27 March to 27 May and 28 November. This is the first record of paralytic shellfish toxin during autumn in Korean waters. Toxin composition between the two different season was similar and was composed of 5$\~$8 toxin fractions as GTXs STXs and PXs. The major toxin component in affected musssels shifted from GTXs in spring to PXs in autumn.
The opportunistic human pathogen Candida albicans has the ability to convert from yeast-form to pseudohyphal or true hyphal form. The morphological transition is considered as an important virulence factor, because the decrease or lack in dimorphism causes the reduction of virulence. Our previous study revealed that the disruption of dual specificity kinase gene caused the reduction of dimorphism in C. albicans. Therefore we tested the effect of dual specificity kinase in virulence using mouse model. The mean survival time for kinase-defective strains was about 15 days in comparison with those of wild-type, 3.9 days. Moreover the fungal burden on kidneys for kinase-defective strains was decreased by ten-fold than that for wild-type. These results suggest possible involvement of dual specificity kinase in a novel signal transduction pathway for morphological transition and virulence of C. albicans.
Methamphetamine is an illicit drug that is often abused and can cause neuropsychiatric and neurotoxic damage. Repeated administration of psychostimulants such as methamphetamine induces a behavioral sensitization. According to a previous study, Bax was involved in neurotoxicity by methamphetamine, but the function of Bax in rewarding effect has not yet been elucidated. Therefore, we have studied the function of Bax in a rewarding effect model. In the present study, we treated chronic methamphetamine exposure in a Bax-deficient mouse model and examined behavioral change using a conditioned place preference (CPP) test. The CPP score in Bax knockout mice was decreased compared to that of wild-type mice. Therefore, we screened for Bax-related genes that are involved in rewarding effect using microarray technology. In order to confirm microarray data, we applied the RT-PCR method to observe relative changes of Bcl2, a pro-apoptotic family gene. As a result, using our experiment microarray, we selected genes that were associated with Bax in microarray data, and eventually selected the Tgfbr2 gene. Expression of the Tgfbr2 gene was decreased by methamphetamine in Bax knockout mice, and the gene was overexpressed in Bax wild-type mice. Additionally, we confirmed that Creb, FosB, and c-Fos were related to rewarding effect and Bax using immunohistochemistry.
Hox proteins containing DNA-binding homedomain act as transcription factors important for anteroposterior body patterning during vertebrate embryogenesis. However, the precise mechanisms by which signal pathways are transduced to regulate the Hox gene expression are not clear. In the course of an attempt to isolate an upstream regulatory factor(s) controlling Hox genes, protein kinase B alpha (Akt1) has been identified as a putative regulator of Hox genes through in silico analysis (GEO profile). In the Gene Expression Omnibus (GEO) dataset GDS1784 at the NCBI (National Center for Biotechnology Information) site, Hox genes were differentially expressed depending on the presence or absence of Akt1. Since it was not well known how Akt1 regulates the specific Hox genes, whose transcription was reported to be regulated by epigenetic modifications such as histone acetylation, methylation etc., the expression of Gcn5, a histone acetyltransferase (HAT), was analyzed in wild type (WT) as well as in $Akt1^{-/-}$ mouse embryonic fibroblast (MEF) cells. RT-PCR analysis revealed that the amount of Gcn5 mRNA was similar in both WT and $Akt1^{-/-}$ MEFs. However, the protein level of Gcn5 was significantly increased in $Akt1^{-/-}$ MEF cells. The half life of Gcn5 was 1 hour in wild type whereas 8 hours in $Akt1^{-/-}$ MEF. These data all together, indicate that Gcn5 is post-transcriptionally down-regulated and the protein stability is negatively regulated by Akt1 in MEF cells.
Partial characterization of B. thuringiensis var. kurstaki 3ab temperature-sensitive mutants was carried out through biochemical analyses, utilization tests of carbohydrate sources, antobiotic resistant test, hemolytic reaction test, growth measurement of Fructus gardenia sxtrant medium and toxicity test against mice. Six ts mutants, ts-U154, ts-U601, ts-U602, ts-U603, tsU-604, and ts-U788 could not produce urease, ts-U603 lost its motility, ts-U154 could not use salicin and cellobiose and ts-U603 not ribose. All ts mutants except ts-U154 and wild type strain were resistant to cephalothin, ampicillin, and penicillin. but ts-U154 was sensitive to the three. Four mutants, ts-U21, ts-U74, ts0U131 and ts-U154 did not form pigment colonies on the F. gardenia medium. All the mutants and wild type strain showed hemolysis reaction on the blood agar. The B. thuringiensis and mutants were not toxic to mice.
Jae, Seol A;Ahn, Kun No;Kim, Ji Young;Seo, Je Hoon;Kim, Hyong Kyu;Goo, Yong Sook
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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v.17
no.3
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pp.229-235
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2013
Among several animal models of retinitis pigmentosa (RP), the more recently developed rd10 mouse with later onset and slower rate of retinal degeneration than rd1 mouse is a more suitable model for testing therapeutic modalities. We therefore investigated the time course of retinal degeneration in rd10 mice before adopting this model in our interventional studies. Electroretinogram (ERG) recordings were carried out in postnatal weeks (PW) 3~5 rd10 (n=23) and wild-type (wt) mice (n=26). We compared the amplitude and implicit time of the b-wave of ERG records from wt and rd10 mice. Our results showed that b-wave amplitudes in rd10 mice were significantly lower and the implicit time of b-waves in rd10 mice were also significantly slower than that in wt mice ($20{\sim}160{\mu}V$ vs. $350{\sim}480{\mu}V$; 55~75 ms vs. 100~150 ms: p<0.001) through PW3 to PW5. The most drastic changes in ERG amplitudes and latencies were observed during PW3 to PW4. In multichannel recording of rd10 retina in PW2 to PW4.5, we found no significant difference in mean spike frequency, but the frequency of power spectral peak of local field potential at PW3 and PW3.5 is significantly different among other age groups (p<0.05). Histologic examination of rd10 retinae showed significant decrease in thickness of the outer nuclear layer at PW3. TUNEL positive cells were most frequently observed at PW3. From these data, we confirm that in the rd10 mouse, the most precipitous retinal degeneration occurs between PW3~PW4 and that photoreceptor degeneration is complete by PW5.
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