Recently, it has been a big issue to distinguish the dried roots of Cynanchum wilfordii and C. auriculatum in health functional food market. The original plant species of Cynanchi Wilfordii Radix belong to the Asclepiadaceae family is differentially described in the national pharmacopoeia of Korea, China and Japan. Owing to the morphological similarities of the dried roots of this plant to those of C. auriculatum, which is often misidentified in Korean herbal medicine marketplace, distinguishing these two species is exceedingly difficult. The purpose of this study was to compare the conventional-PCR with the real-time PCR for detection of C. wilfordii and C. auriculatum DNA. We also tried to realize a quantitative real-time PCR assay using species-specific matK primers, which allowed us to estimate the ratio of C. willfordii and C. auriculatum using varying ratios of mixed genomic DNA template from the two species. The differentiation of intentional and unintentional mixture in this study would be applied to food safety management and can be helpful for protection of consumer's right and cultivators.
<호선무(胡旋舞)>는 악가무적 장르이다. 당시 <호선무>가 백제에서 널리 알려진 기록은 없으나 수양제(隋煬帝)가 장안(長安)으로 <호선무>를 초청한 것은 당시 백제의 인기상품이었기 때문이다. 이에 따라 백제기악 <호선무> 버전의 콘텐츠를 악가무적 장르로 설정하였고 주요 특징은 다음과 같다. 첫째, <백제기악>의 공연무대 설정은 중국의 주변국 <기악>의 4방 악의 학설을 분석하여 <백제기악>의 모습을 짐작하였다. 그리고 <백제궁중기악(百濟宮中伎樂)>의 무대를 활용하여 <호선무>의 무대를 설정하였다. 둘째, <호선무>의 춤 동작은 천상과 지상의 두 종류를 통해 동작을 구상하였다. <호선무는> 초당(618~707)에 나타난 제220굴 벽면의 그림과 <동방약사경변>·<서방정토경변>에 그려진 그림으로 설정했다. 셋째, <호선무>는 원안에서 '빠르게 돌아가는 춤'으로 수용하여 백제기악 <호선무>의 춤 동작을 설정하였다. 넷째, 미마지(味摩之) <기악무(伎樂舞)>를 제시하여 <호선무> 춤과 의상을 구체화 하였다. 여기에는 무용수가 여섯 사람이 참여하고 두 차례로 나누어 출연한다. 앞에는 4명, 뒤에는 2명이 배치되며 무용수의 '장속(裝束)'은 사냥꾼의 복장에 도깨비 가면을 쓰고 오른손에 꽃핀 매화나무 가지를 들고 있다. 이를 통하여 <호선무>의 동작과 의상을 좀 더 세부적으로 재현 할 수 있도록 하였다. 따라서 백제기악(百濟伎樂) <호선무(胡旋舞)> 버전의 콘텐츠를 교육·연극·무용·관광 등에서 다양하게 설정하여 활용하면 경제 활성화는 물론, 한류화(韓流化)에 기여할 수 있다.
Ephedra herbs are defined as stem of Ephedra sinica , Ephedra intermedia and Ephedra equisetina in the Korean Pharmacopoeia. It is important to use pure herbs to derive the safety and efficacy of herbal medicine. However, the identification of these herbs by conventional taxonomic methods is difficult. Recently, many studies have applied these DNA barcoding for the identification of herbal medicinal species using standard DNA markers. In this study, we report a case study in which the identification of Ephedra species was done by DNA barcoding. For identification of Ephedra species, 17 samples were collected, and a reference DNA barcode library was developed using 6 markers (rbcL, matK, ITS2, ycf1, ycf3, and rpoC2). To develop KASP-SNP markers, we selected 4 markers (ycf1, ycf3, rpl2, and rbcL), which were able to distinguish three Ephedra species. In the result, the specific markers for each of the three Ephedra were clustered into FAM-positive section, whereas non-targeted plants were clustered either HEX-positive or negative section. Therefore, we have developed KASP assay that allow rapid and easy Ephedra species identification using three KASP markers.
Kim, Il-Woung;Sun, Won Suk;Yun, Bong-Sik;Kim, Na-Ri;Min, Dongsun;Kim, Si-Kwan
Journal of Ginseng Research
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제37권1호
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pp.124-134
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2013
The authentication of the physico-chemical properties of ginsenosides reference materials as well as qualitative and quantitative batch analytical data based on validated analytical procedures is a prerequisite for certifying good manufacturing practice (GMP). Ginsenoside Rb1 and Rg1, representing protopanaxadiol and protopanaxatriol ginsenosides, respectively, are accepted as marker substances in quality control standards worldwide. However, the current analytical methods for these two compounds recommended by Korean, Chinese, European, and Japanese pharmacopoeia do not apply to red ginseng preparations, particularly the extract, because of the relatively low content of the two agents in red ginseng compared to white ginseng. In manufacturing fresh ginseng into red ginseng products, ginseng roots are exposed to a high temperature for many hours, and the naturally occurring ginsenoside Rb1 and Rg1 are converted to artifact ginsenosides such as Rg3, Rg5, Rh1, and Rh2 during the heating process. The analysis of ginsenosides in commercially available ginseng products in Korea led us to propose the inclusion of the (20S)- and (20R)-ginsenoside Rg3, including ginsenoside Rb1 and Rg1, as additional reference materials for ginseng preparations. (20S)- and (20R)-ginsenoside Rg3 were isolated by Diaion HP-20 adsorption chromatography, silica gel flash chromatography, recrystallization, and preparative HPLC. HPLC fractions corresponding to those two ginsenosides were recrystallized in appropriate solvents for the analysis of physico-chemical properties. Documentation of those isolated ginsenosides was achieved according to the method proposed by Gaedcke and Steinhoff. The ginsenosides were subjected to analyses of their general characteristics, identification, purity, content quantification, and mass balance tests. The isolated ginsenosides showed 100% purity when determined by the three HPLC systems. Also, the water content was found to be 0.534% for (20S)-Rg3 and 0.920% for (20R)-Rg3, meaning that the net mass balances for (20S)-Rg3 and (20R)-Rg3 were 99.466% and 99.080%, respectively. From these results, we could assess and propose a full spectrum of physico-chemical properties of (20S)- and (20R)-ginsenoside Rg3 as standard reference materials for GMP-based quality control.
식용 및 약용으로 사용 가능한 우슬은 국가마다 다른 기원식물을 가지고 있으며, 국내에서는 토우슬 및 회우슬을 사용하도록 규정하고 있다. 현재까지 다양한 우슬에 대한 많은 연구가 이루어져 왔으나, 식용으로 이용되고 있는 토우슬과 회우슬의 열수 추출물에 대한 비교연구는 전무한 상태이다. 본 연구에서는 기능성 우슬차 및 우슬식혜 제조를 목표로, 토우슬과 회우슬의 열수 추출물과 이들의 순차적 분획물을 조제하여 각각의 유용성분 및 in-vitro 항균활성, 항산화, 및 항당뇨 활성을 비교 평가하였다. 그 결과, 회우슬의 열수 추출물은 토우슬보다 수용성 당류 및 다양한 폴리페놀 성분을 다량 포함하고 있으며, 토우슬보다 높은 명도와 낮은 황색도를 나타내었다. 항세균 활성 평가에서는 토우슬의 ethylacetate 분획과 회우슬의 n-hexane 분획에서 우수한 활성이 나타났으며, 활성 음이온, 활성 양이온 및 nitrite 소거능 및 환원력 측정의 항산화 활성 평가결과, 토우슬 추출물이 회우슬보다 우수하며, 특히 토우슬의 ethylacetate 분획에서 강력한 항산화 활성을 확인하였다. 또한 in-vitro 항당뇨 활성평가 결과, 토우슬 및 회우슬의 ethylacetate 분획에서 우수한 ${\alpha}$-amylase 저해활성을, 각각의 butanol 분획에서 ${\alpha}$-glucosidase 저해활성을 확인하였다. 본 연구결과는 토우슬과 회우슬의 열수 추출물들은 추출효율과 성분에서 많은 차이가 있으며, 특히 이들의 분획물의 경우 성분 및 활성이 더욱 차이가 나타남을 제시하고 있다. 따라서, 우슬의 항균, 항산화 및 항당뇨 활성을 이용한 천연물 신약 개발시에는 토우슬의 ethylacetate 분획을 이용하는 것이 적합하며, 우슬차 및 우슬식혜 제조시에는 토우슬의 열수 추출물이 적합함을 확인하였다.
본 연구에서는 체내에서 비타민 C의 지속성을 나타내기 위해 성분의 용출을 조절하는 기술이 적용된 용출조절형 비타민 C 제품과 일반적인 속방형 비타민 C 제품의 비교용출 실험을 진행하여, 일반적인 속방형 제품과 용출조절형 제품 간의 용출 양태를 비교분석 하였다. 비타민 C 정제들의 용출률을 확인하기 위해 '대한약전(제2020-88호)', '경구용의약품의 용출규격 설정 가이드라인'의 용출시험법, '건강기능식품의 기준 및 규격 고시(제2020-63호)'에 근거한 HPLC 함량시험을 수행하여 시간별 용출률을 분석하였다. 분석 결과 속방형 비타민 C 제품은 45분 이후 100% 용출이 이루어진 반면 용출조절형 비타민 C 제품은 480분(8시간) 이후에 100% 용출이 나타났으며, 용출조절형 비타민 C 제품의 60분에서의 용출률이 속방형 비타민 C 제품에 비해 더 느리게 나타나는 것을 확인하였다. 이러한 결과를 바탕으로 비타민 C를 주성분으로 한 용출조절형 정제의 개발 및 용출분석이 가능함을 확인하였다.
Dissolution test has been performed to control drug quality and to predict in vivo drug release profile of solid dosage forms, so there's a drift towards setting dissolution test instead of disintegration test. However, some solid dosage forms in Korea Pharmaceutical Codex (KPC) are not established the dissolution test yet, so these monographs are necessary to set the specification of dissolution test. In this study, we developed the specification and test method of dissolution test for itopride hydrochloride tablets and tiropramide hydrochloride tablets which are not established the dissolution test yet. According to the "Manual for Guideline Application for Validation of Analytical Procedures" and "Guidelines on Specification of Dissolution test for Oral dosage form" of Korean Pharmacopoeia (KP), we validated and established each development method. Based on the preliminary dissolution profile, we set the dissolution condition(paddle apparatus, pH 1.2 media, 50 rpm). For this condition, we performed the main dissolution test to determine the specification (45 min, 85%). Finally, we validated each analytical method by specificity, linearity, accuracy and precision. These developed methods will be included the next supplement of KPC and also contributed to the quality control of medicines.
현재는 재조합 Erythropoietin의 생물학적 활성을 mouse를 이용한 in vivo bioassay로 실시하고 있으나, 이 방법의 여러가서 불편함으로 인하여, 이를 대체하기 위해 Ba/F3 세포주를 이용한 in vitro assay 방법을 확립하였으나, 위에 상술한 바와 같이 in vitro assay는 erythropoietin의 당분포에 의한 차이를 보이지 않게 때문에, 이를 보완하기 위해서는 in vivo bio-activity와 정량적인 상관관계가 있는 당단백질의 isoform 분석법인 Capillary zone electrophoresis (CZE) 와 sialic acid 함량 결과를 동시에 분석해야 했다. 위의 결과 sialic acid 함량은 erythropoietin 원액에서 10 mol/mol,EPO 이상의 sialic acid 함량을 가져야 되며, CZE 결과는 재조합 erythropoietin이 isoform 분포가 isoform 3의 경우 5.594~0.593%, isoform 4의 경우 31.598~11.704%, isoform 5의 경우 37.033~29.301%, isoform 6의 경우 27.837~18.807%, isoform 7의 경우 17.085~7.824%, isoform 8의 경우 7.642~1.964%을 보여줌과 동시에 isoform 4의 면적은 isoform 5의 면적보다 항상 작아야한다. 이상 두 가지 시험결과와 in vitro assay 결과를 combine해서 in vivo assay를 대체할 수 있다는 좋은 실험적 data를 얻었으므로 이상 위의 3가지 분석법을 활용한 combined in vitro bioassay 법의 기초를 확립하였다.
Objectives : The contents of aconitine in aconiti radix lateralis preparata, purified hot water extract of Aconiti Radix lateralis preparata, and purified hot water extract of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata was analyzed to compare toxicity. Toxicity of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata was assessed with a single oral toxicity test on 6-week-old male and female Sprague-Dawley rats. Methods : 1. The contents of aconitine in Aconiti Radix lateralis preparata, purified hot water extract of Aconiti Radix lateralis preparata, and purified hot water extract of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata was analyzed using the purity test according to the "Korean Herbal Pharmacopoeia". 2. 2,000mg/kg was injected for the single oral toxicity test of purified hot water extract of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata, and the test was done for a test group (injection) and a control group, each with 5 male and 5 female rats. For 14 days after injection, rats were observed for general symptoms and changes in weight. Afterwards, blood biochemical test, autopsy, and histophathological exam of the liver was conducted. Results : 1. The contents of aconitine was 0.0785% for Aconiti Radix lateralis preparata, 0.1510% for purified hot water extract of Aconiti Radix lateralis preparata, and 0.1248% for purified hot water extract of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata. 2. There was no death of either male or female rats in both the control group and the test group (injection of 2,000mg/kg). 3. No unusual symptom was observed in both the control group and the test group (injection of 2,000mg/kg). 4. No significant change in weight was observed for both male and female rats in the test group (2,000mg/kg). 5. The histopathological exam of ALT, AST, ALP, GGT and LDH showed no significant changes for both male and female rats in the test group (2,000mg/kg). 6. According to the autopsy results, no visible abnormality of organs or tissues was found in both the control group and the test group (2,000mg/kg). 7. According to the histopathological exam of the liver, the effect of the injected material was not observed for either male or female rats in the test group (2,000mg/kg). Conclusions : The contents of aconitine in Aconiti Radix lateralis preparata was lower for decoction of Sambutang-P with ginseng radix alba than for decoction of only Aconiti Radix lateralis preparata. This suggests that ginseng radix alba can dilute toxicity of Aconiti Radix lateralis preparata. As for a single oral toxicity test of Sambutang-P that contains Aconiti Radix lateralis preparata, no abnormal reaction was observed even when the injection amount far exceeded a toxic dose or a lethal dose. Thus, it is deemed that using Sambutang-P at a clinically prescribed dose would not lead to hepatoxicity.
지황은 국내 주요 약용작물 중 하나로, 크게 생지황, 건지황, 숙지황으로 나누어 용도에 맞게 이용된다. 본 연구에서는 시중에서 많이 이용되고 있는 4가지 육성품종에 대하여 이화학적 특성을 평가하고 숙지황에 가장 적합한 품종을 선발하고자 하였다. 본 실험에서는 지황 1호, 고강, 토강, 다강 총 4품종의 생지황을 이용하여 건조한 후, 막걸리에 담그는 작업부터 증숙 및 건조 작업까지를 1증으로 하여, 총 9회 반복하였다. 1증이 끝날 때마다, 산업적으로 중요한 요인 중 하나인 수율을 포함해 여러 이화학적 특성들을 평가하였다. 수율은 토강이 가장 높았고, 다강이 가장 낮게 나타났는데 이러한 수치들은 수분함량과 높은 부의 상관관계를 보였다. Fructose와 Glucose 함량은 초기에 일시적으로 증가하였다가 일정 시점 이후로는 감소하는 경향을 보였으며, Sucrose와 Raffinose, Stachyose는 점차 감소하다가 Raffinose, Stachyose의 경우, 4~5증 이후에는 검출되지 않았다. 유효성분인 Catalpol 함량도 모든 품종에서 4증 이후에는 검출되지 않았다. 반면 5-HMF 함량은 증숙이 진행됨에 따라 증가하였으며, 대한약전 기준인 0.1% 이상을 만족하였다. 지황 1호와 토강의 경우, 5증 이후 0.14%로, 타 품종에 비해 기준치에 빨리 도달하였다. 4가지 육성품종을 이용하여 숙지황을 제조하여 품질 특성을 평가한 결과, 전반적인 특성들을 종합적으로 고려하였을 때, 숙지황용으로는 토강이 상대적으로 수율이 높고 증숙시간도 짧게 소요되어 가장 적합할 것으로 보인다. 본 연구결과는 품종별 특성에 따라 산업적으로 적합한 용도로 활용하는 데에 유용한 정보가 될 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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