Klebsiella K-36 producing novel sulfotransferase was isolated from rat intestinal flora. The novel sulfotransferase catalyzed the transfer of sulfate group from p-nitrophenylsulfate to phenolic compounds but it did not use PAPS(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate) as a donor substrate. The present enzyme was 160 K daltons. Optimal pH was 10. When p-nitrophenyl sulfate was used as a donor substrate, 1-naphthol was the best substrate, followed by phenol, phenanthrol and tyrosine. The apparent Km for phenol using p-nitrophenylsulfate as a donor substrate and that for p-nitrophenylsulfate using phenol as an acceptor substrate were determined to be 0.66 mM and 0.11 mM, respectively.
아세토인(acetoin)은 식품과 화학산업에서 플랫폼 물질로 이용되며 산업적으로 다양한 응용이 가능한 물질이다. 본 연구에서는 대사공학(metabolic engineering)을 이용하여 아세토인의 생산량이 증가한 재조합 Klebsiella pneumoniae를 구축하였다. 우선 2,3-부탄디올(2,3-butanediol)생산을 위해 제작되었던 재조합 K. pneumoniae (KMK-05)에서 두 가지 2,3-butanediol dehydrogenase (budC, dhaD)를 유전체에서 제거하여 아세토인 생산량을 늘리고, 전사인자 중 하나인 AcoK를 제거하여 아세토인을 분해하는 효소의 발현량을 줄였다. 그리고 NADH oxidase를 발현시켜 세포 내 산화 환원 균형(redox balance)을 맞춰 대사흐름을 개선하였다. 이렇게 대사공학을 통해 구축된 재조합 Klebsiella pneumoniae(KJW-03-nox)로 아세토인 생산량과 수율을 높였고, 36시간 동안의 유가식 배양을 진행하여 51 g/L의 아세토인 농도와 최대 생산성 2.6 g/L/h을 달성하였다.
Carbapenem 내성 Klebsiella pneumoniae (Carbapenem-resistant K. pneumonia, CRKP)는 전 세계적인 공중 보건 문제로 대두되고 있다. 최근 Klebsiella pneumoniae carbapenemase-2 (KPC-2) 생성 sequence type (ST)307은 CRKP의 주요 클론으로 확인되었으며, 국내에서 ST307의 확산이 보고되었다. 본 연구에서는 2020년 3월부터 2021년 12월까지 대전지역의 3차 병원에서 분리된 CRKP 50균주를 대상으로, 분자 특성과 항균제 내성 양상을 조사하였다. 역학적 관계는 multilocus sequence typing (MLST)를 통해 분석하였고, 항균제 감수성 검사는 디스크 확산법을 통해 확인하였다. PCR과 DNA 염기서열분석은 carbapenemase 유전자 확인을 위해 수행하였다. CRKP감염은 남성과 60세 이상의 환자에서 훨씬 더 빈번하게 확인되었다. CRKP 50균주 중 46균주(92.0%)는 다제내성(MDR)을 보였고, 44균주(88.0%)는 carbapenemase-producing K. pneumoniae (CPKP)로 확인되었다. 주요 carbapenemase 유형은 KPC-2 (36균주, 72.0%)였으며, New Delhi metallo-enzyme-1 (NDM-1)과 NDM-5는 각각 7균주(14.0%)와 1균주(2.0%)에서 확인되었다. 특히, KPC-2 생성 K. pneumoniae의 88.9% (32/36)가 ST307에 속한 반면, NDM-1,-5 생성 K. pneumoniae의 87.5% (7/8)가 non-ST307에 속한 것을 확인하였다. 이러한 결과는 ST307의 확산 뿐만 아니라 non-ST307의 발달을 예방하기 위한 적절한 감염관리와 효과적인 감시체계가 필요하다고 사료된다.
One hundred and thirty-six strains of Klebsiella pneumoniae were isolated from clinical specimen taken from pediatric patiants at 6 different hospitals and identified, characterized and investigated on the patterns of antibiotic resistance. The 136 strains showed the positive reactions in the 17 tests; Voges-Proskauer, ONPG, cirate utilization, KCN degradation, productions of lysine decarboxylase, acid and gas from glucose, utilizations of malonate, manitol, rhamnose, salicin, sucrose, raffinose, arabinose, lactose, sucrose, inositol and raffinose, but the strains showed the negative reactions in the 8 tests; production of $H_2S$, indole, arginine dehydrolase, ornithine decaraoxylase, phenylalanine deaminase, motility, methly red and gelatin liquefaction. 41 did not utilize dulcitol, and 32 did not utilize adonitol. The 36 out of them produced klebecin. The 136 strains were resistant to ampicillin, 2 to gentamicin, 14 to cephalothin, 16 to chloramphenicol, 8 to kanamycin, 13 to streptomycin, and 17 to tetracycline. Twenty strains were resistant to 2 kinds of antibiotics 5 strains to 3, 4 to 4 and 1 to 6 and 7.
Taylorella equigenitalis (T. equigenitalis), Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae), and Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) are sexually transmittable bacteria known to cause venereal diseases (VD) in horses. T. equigenitalis causes contagious equine metritis (CEM), which is a considerable concern for equine breeding industry. K. pneumoniae and P. aeruginosa may cause endometritis and infertility in susceptible mares. The purpose of this study was to investigate the prevalence of these bacteria among breeding Thoroughbreds in South Korea. External genital swabs were collected from 178 breeding Thoroughbreds, including 11 stallions and 167 mares. The samples were tested using a commercial multiplex real-time PCR kit. T. equigenitalis, P. aeruginosa, and K. pneumoniae were present in 5.6%, 7.3%, and 5.6% of tested Thoroughbreds, respectively. The results highlight the need for regular testing of South Korean Thoroughbreds, particularly those used for breeding, for these bacteria. The regular pre-breeding test for these bacteria will prevent health complications for the horse and financial losses for the owner as a result of VD.
횐 쥐에서 sulfotransferase 양성균주를 검색한 결과 호기성 조건보다는 혐기성 조건의 균이 많은 것으로 나타났다. 이러한 곁과는 장내미생물의 대부분이 혐기성균이라는 것과도 일치하는 것이다. 검색용 배지에서 형광을 나타내는 Sulfotransferase를 생산하는 4개 균주에서 가장 활성이 높은 k-36균주에 대하여 동정하였다. K-36 균주는 혐기적 및 호기적 양조건에서 잘 자라는 통성혐기성균이고, Gas를 생산하며 포자를 생성하지 않는 Gram음성의 간균이었다. 이것으로 보아 이균은 Enterobacteriacease의 Klebsiella oxytoca 로 동정했다. K-36에서 분리한 Sulfotransferase의 반응양식은 p-nitrophenylsulfate와 p-nitrophenol이 반응시간과 함께 동량씩 감소하여 반응 생성물인 phenylsulfate와 p-nitrophenol을 생성시켰으며 sulfatase 반응은 진행되지 않았다.
한국의 특산수종인 구상나무(Abies koreana Wilson) 목부 에탄올 추출물의 diethyl ether가용부로부터 단리된 리그난류의 항균활성 결과를 요약하였다. 디에틸에테르 가용부로부터 단리된 각 화합물의 $10^3\;ppm$ 및 $10^4\;ppm$ 농도에서 공시균에 대한 활성은 타균에 비해 K. pneumoniae와 V. parahaenolyticus균의 2개균에 대하여 높은 활성을 보였다. 특히, 화합물 V는 V. parahaenolyticus균에 대해 $10^4\;ppm$ 농도의 처리에서 약 1.7배의 활성을 보였으며, 화합물 III은 K. pneumoniae 및 S. aureus 두 균에 대하여 대조구의 약 36%와 37%의 저해활성을 보였다. 그리고 화합물 II와 VI은 V. parahaenolyticus 균에 대하여 각각 48%와 66%의 생장 저해활성을 보였다.
The emergence of antibiotic-resistant bacterial strains is one of the most critical problems of modern medicine. Bacteriophages have been suggested as an alternative therapeutic agent for such bacterial infections. In the present study, we examined the therapeutic potential of phage Kpn5 in the treatment of Klebsiella pneumoniae B5055-induced burn wound infection in a mouse model. An experimental model of contact burn wound infection was established in mice employing K. pneumoniae B5055 to assess the efficacy of phage Kpn5 in vivo. Survival and stability of phage Kpn5 were evaluated in mice and the maximum phage count in various organs was obtained at 6 h and persisted until 36 h. The Kpn5 phage was found to be effective in the treatment of Klebsiella-induced burn wound infection in mice when phage was administered immediately after bacterial challange. Even when treatment was delayed up to 18 h post infection, when all animals were moribund, approximately 26.66% of the mice could be rescued by a single injection of this phage preparation. The ability of this phage to protect bacteremic mice was demonstrated to be due to the functional capabilities of the phage and not due to a nonspecific immune effect. The levels of pro-inflammatory cytokines (IL-$1{\beta}$ and TNF-${\alpha}$) and anti-inflammatory cytokines (IL-10) were significantly lower in sera and lungs of phage-treated mice than phage untreated control mice. The results of the present study bring out the potential of bacteriophage therapy as an alternate preventive approach to treat K. pneumoniae B5055-induced burn wound infections. This approach not only helps in the clearance of bacteria from the host but also protects against the ensuing inflammatory damage due to the exaggerated response seen in any infectious process.
보다 우수한 살모넬라 진단법을 개발하고자, 면역리포좀을 이용하여 계란에서의 살모넬라를 분석하는 새로운 진단법과 시판 간이키트를 사용한 살모넬라 분석과의 결과를 비교하였다. 면역리포좀을 이용하여 난각을 분석한 결과, 36개의 계란 시료 중 1건에서 살모넬라 양성 결과가 나타났으며 시판 간이키트를 이용하여 분석한 결과, 36개의 계란 시료 중 6건에서 살모넬라 양성 결과가 나타났다. 총 7건의 양성 결과는 생화학적 동정에 의해서 살모넬라균이 아닌 것으로 확인되었다. 난황과 난백으로 이루어진 내용물의 경우, 두 분석법에 의하여 살모넬라 균이 전혀 검출되지 않았으며 이는 배지 배양법과 일치하는 결과였다. 면역리포좀을 이용한 진단법은 시판 간이키트에 비해 민감도가 높고 분석에 소요되는 총 시간이 24시간 단축되는 우수성을 보였다. 난각에서는 Acinetobacter baumanni, Chryseomonas luteola, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Escherichia hermannii, Klebsiella pneumonia, Pantoea spp., Pasteurella pneumotropica와 같은 세균이 분리되었는데, A. baumanni와 P. pneumotropica를 제외한 대부분의 세균들은 계란의 전처리 공정 중에 빈번하게 분리되는 균들로 확인되었다.
지네 Scolopendra subspinipes multilans L. Koch로부터 정제한 Centipedin의 gram-negative, gram-positive bacteria 및 fungi에 대한 광범위 항균 spectrum을 조사하였으며 액체배지를 사용하여 각 균주에 대한 minimal inhibitory concentrations(MICs)값을 측정하였다. 인체의 기관중 주로 폐에 감염되는 gram-negative bacteria인 Klebsiella pneumoniae ATCC 8308 균주에 대한 MIC값이 $2{\mu}g/ml$로서 가장 강한 항균력을 나타내었고 화농균인 Proteus vulgaris NRRL B-123 균주에 대해서도 MIC값이 $16{\mu}g/ml$로 비교적 높은 항균력을 나타내었으며 항균제로서의 작용 mechanism을 시험한 결과 prokaryotic RNA transcription을 억제함을 알 수 있었다. Human blood leukemia(HL-60)와 mouse B lymphocyte myeloma cell 등의 동물세포에 대한 Centipedin의 cytotoxicity는 없는 것으로 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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