Because of the cases of Japanese Encephalitis(J.E.) were reported every year in Korea. We, Dong-A Pharmaceutical Co., Ltd., produced J.E. virus vaccine, with lower price, since 1970 in order to prevent ourselves from being infected by the disease. And inoculated the J.E. virus vaccine for the children with a great success. We are going to report several questions which brought about in producing the J.E. virus vaccine by alcohol precipitation, protamine sulfate treatment method. The results obtained were as folows ; 1) In process treated with 40% alcohol, we used to ethanol made in Germany, but it was too expensive to use it. As the result which we had studied about it, we were satisfied with J.E. virus vaccine which produced with alcohol made in Korea, and then, we treated with accurate specific gravity of 40% ethanol for the precipitation of the virus. And also, we knew that it was the best method to be treated it for 3hrs, $13^{\circ}C$. 2) When we treated with protamine sulfate (0.025mg/ml), we acquired the highest potent titer, and suited into purpose for the nitrogen concentration. 3) The filtration of the purified J.E. virus vaccine, in case of millipore filter paper of large pore size was not suitable for the sterility. Therefore the pore size less than 0.8.$\mu$ (AA filter paper) in millipore filter paper was very suitable. But it seemed to be important subhects that the smaller was the pore size, the lower was the potent titer.
일본뇌염은 동남아시아에서 일본뇌염 바이러스에 의해 발생하는 흔한 감염이며, Culex 모기에 의해 인간으로 전파된다. 일본뇌염에서의 자기공명영상은 양측의 시상 침범이 있는 것이 흔한 소견이다. 저자들은 시상 침범 없이 연수막 조영증강의 형태로 나타난 일본뇌염의 드문 증례에 대해 보고하고자 한다. 치료 후, 연수막 조영증강은 사라졌으며, 비특이적인 다발성 및 양측의 고신호강도가 추적 MRI 영상에서 새롭게 나타났다.
Three dimensional structures of envelope protein from Korean isolates and Nakayama-NIH strain of Japanese encephalitis virus (JEV) were deduced by a computer program (HyperChem 4.0 Chemplus 1.0) based on the data of the three dimentional structure of Tick-borne encephalitis virus. In the three dimensional structure of envelope protein, neutralizing epitope and T-helper cell recognition site of C-terminal region of Korean isolates were structually similar to those of Nakayama-NIH but the N-terminal region was not. Korean JE isolates were compared with Nakayama-NIH strain by using cross-neutralization antibody test. Neutralizing activities of Korean isolates derived from guinea pigs were higher than those of Nakayama-NIH strain against Korean isolates, although the polyclonal antibody titers of Nakayama-NlH showed 1:160 to 1:640 against Korean isolates. According to the results from three dimentional structures and cross-neutralization analyses, the antigenic difference between Korean JE isolates and Nakayama-NIH strain may be dependent on structural difference of envelope protein.
Since the report in 1946 on the first isolation of Japanese encephalitis virus in Korea, the disease is known to occur every year and has occasionally spread in epidemic proportion among human populations. Because of its public health importance, it was deemed highly desirable to gain specific information as to natural history of the disease in Korea if we are to accomplish our ultimate objective of controling the disease in Korea. There still remain, however, unknown factors as to the ecology of Japanese encephalitis virus in Korea. This paper presents the results of serologic study on Korean cattle, hog and horse by means of hemagglutination inhibition (H.I.) test. The serum specimens were collected from Korean cattle, hog and horse their estimated ages being 3 to 9 years, 6 to 24 months and 2 to 14 years respectively, by jugular puncture; in Seoul and Kyung-Ki are a from the first part of May to November last, 1968. The strain used was designated by M 5/596. The methods of H.I. test employed in this study were essentially simillar to those employed by Clark and Fred. The results obtained summarized as follows; 1. Of samples of cattle sera tested, 183 (98%) was found to be positive, H.I. antibodies showing the highest proportion, on September. The lowest proportion showed 81 (68%) of 117 samples, on June. 2. One hundred and ninety-five and 114 swine serum samples tested were all of positive in both on September and October respectively. The lowest proportion showed 92 (29%) of 314 on June too. 3. Ninety (99%) of 91 equine serum samples tested contained demonstrable H.I. antibodies the highest proportion, on August. The lowest proportion was 19 (27%) of 70 samples on June. 4. Implications of these findings in the ecology of Japanese encephalitis Seoul and Kyung-Ki area were discussed.
The characterization of the 5 Korean isolates (K96P10, K94P05, K91P55, K87P39, and K82P01) of Japanese encephalitis virus (JEV) was compared with JE virus prototype Nakayama-NIH (NKY-NIH) using prM/M and envelope gene sequences of the JEV genome and phylogenetic analysis. The antigenic analysis of these viruses were done by the cross-hamagglutination inhibition (HI) test using polyclonal antibodies against Korean isolates and NKY-NIH. The sequence homology of the Korean isolates and NKY-NIH ranged between 87.4 % - 95.6 % at the nucleotide level and between 98.2 % - 97.2 % at the amino acid level over the E nucleotides compared. Alignment of E protein amino acid sequences revealed that residue positions E89, E129, E221, E244, E327, E366, E459, and E477 characterized the Korean strains. According to phylogenetic analysis bases on the E nucleotide, there are at least 2 genetic types of JEV existing in Korea and Korean strains were distinct from NKY-NIH. However, the cross HI test results of all the Korean isolates were serologically no different from NKY-NIH strain.
Japanese encephalitis virus (JEV) envelope (E) protein holds great promise for use in the development of a recombinant vaccine. Purified recombinant E (rE) protein may be useful for numerous clinical applications; however, there are limitations in using the Escherichia coli expression system for producing high-quality rE protein. Therefore, in this study, the yeast expression system was used to generate the rE protein. For protein production using the yeast system, the full-length JEV E gene was cloned into Pichia pastoris. SDS-PAGE and immunoblotting analysis demonstrated that the rE protein had a molecular mass of 58 kDa and was glycosylated. The predicted size of the mature unmodified E protein is 53 kDa, suggesting that post-translational modifications resulted in the higher molecular mass. The rE protein was purified to greater than 95% purity using combined ammonium sulfate precipitation and a SP-Sepharose Fast Flow column. This purified rE protein was evaluated for immunogenicity and protective efficacy in mice. The survival rates of mice immunized with the rE protein were significantly increased over that of Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus E protein (HcE). Our results indicate that the rE protein expressed in the P. pastoris expression system holds great promise for use in the development of a subunit vaccine against JEV.
Japanese encephalitis (JE) is an important zoonosis caused by the mosquito-transmitted JE virus (JEV), which is a causative agent of reproductive failure in pregnant sows. Detection of JEV antibodies in swine is performed by hemagglutination inhibition (HI), virus neutralization (VN), and the plaque reduction neutralization test (PRNT). The most stringent PRNT is the 90% endpoint PRNT ($PRNT_{90}$). These conventional assays are difficult to carry out in diagnostic laboratories with insufficient instruments or cell culture systems. An alternative assay that is easily conducted and time efficient is required. In this study, we improved the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) with clarified antigen for the detection of JEV antibodies. The I-ELISA results obtained from 175 swine serum samples were compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results. The sensitivity of I-ELISA was 91.8%, 95.0%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. The specificity of I-ELISA was 92.2%, 94.7%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. Moreover, the I-ELISA results were significantly correlated with the HI (r = 0.93), VN (r = 0.95), and $PRNT_{90}$ (r = 0.92) results. These results suggest that the improved I-ELISA is useful for serosurveillance of JEV in swine.
박쥐 총 453 수의 일본뇌염 바이러스에 대한 HI 항체가를 조사하였던 바 1 :10 이상 양성률은 453 수 중 335 수(74.0%) 로 높은 양성률을 보였고 성별 항체보유율은 수컷이 70.0%(237수 중 166 수) 이고 암컷이 78.2%(216수 중 169수) 로 암켓이 약간 높게 나타났다. 박쥐 종류별 일본뇌염 바이러스 (Japanese Encephalitis Virus, JEV) 에 대한 HI 항체 양성률을 조사한 바 관박쥐 (Rhinolophus ferrumeguinum) 는 75.0%(360 수 중 34 수) 양셩이고 안주애기박쥐(Verpertilio superrans) 는 87.5%(24 수 중 21 수) 가 향체가를 보였고 큰수염박쥐 (Myotis mystatinus) 도 수가 적어 비교가 어려우나 항체보유률은 83.3%(12 수 중 10 수)가 양성이었다. JEV(Nakayama strain)을 한국산 야생박쥐 뇌내에 감염시켜서 되염 바이러스가 박쥐 뇌내 세포에서 증식하는지 여부를 확인하였다. 박쥐 뇌세포에서 JEV 항원과 바이러스의 감염입자를 전자 현미경으로 확인하였다.
일본뇌염바이러스(Japanese encephalitis virus, JEV) Nakayama strain을 초기 multiplicity of infection 5.0으로 Vero세포에 감염하여 1년 이상 안정적으로 바이러스를 방출하는 지속감염(persistently-infected)세포주를 확립하였다. 지속감염 세포에서 지속적으로 방출되는 총 11 개의 Plaque 형태 변이바이러스(morphology mutants)클론을 확보하였다. 분리된 변이바이러스의 복제효율을 분석한 결과 생물학적 표현형과 복제효율은 유의하게 상관하였다. 변이바이러스 RNA 게놈 양 말단의 non-coding region 및 envelop 단백질의 ORF에서는 유의한 염기서열 변화가 관찰되지 않아 JEV 약독화에 새로운 인자가 추가로 관여할 가능성을 제시하였다. 변이바이러스에 감염된 신선한 Vero세포는 wild-type JEV의 일반적 감염성상과 다르게 대다수의 세포가 유의할 만한 세포병변현상을 나타내지 않았다. 감염된 Vero세포에서 wild-type JEV 및 large plaque을 형성하는 변이바이러스의 경우 mRNA와 함께 Bcl-2의 발현은 모두 유의하게 감소하였으며 p53은 뚜렷하게 증가하였다. 반면 small plaque을 형성하는 변이바이러스의 감염세포에서는 Bcl-2와 p53 모두 유의한 변화를 볼 수 없었다. 이상의 결과들과 함께, 감염된 Vero세포의 internucleosomal DNA fragmentation과DNA profile의 유형분석에 따르면 궁극적 인 세포병변효과의 변화는 변이바이러스의 복제효율과 더불어 p53에 비의존적인 apoptosis 수위의 전반적인 감소에 기인하는 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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