Influence of amylose content on formation and characteristics of enzyme-resistant starch (RS) was investigated by scanning electron microscopy, X-ray diffractometry and differential scanning calorimetry. RS yield increased up to 36.1 % as the amylose content of corn starch increased. Starch granules of Amyulomaize V and Ⅶ were more rounded and smaller than those of regular corn ; some were elongated and had appendages. After autoclaving -cooling cycles, the granular structure disappeared and a continous spongy-like porous network was visible in regular corn starch ; the granular structure was stillevident in parts in Amylomaize V and Ⅶ starches. In all isolated RS residues , the porous structures were no longer visible and more compact formations predominated. While regular corn starch showed an A-type X-ray profile, Amylomaize V and Ⅶ starches exhibited a combination of B- and V-types. Regular corn starch lost most of its crystallinity during autoclaving , but the crystallinity was still left in Amylomaize starches as diffuse or poor B-types. All RS residues showed the presence of poor B-type regardless of amylose contents. Transition temperatures and enthalypy of native starches were a little higher in Amylomaize V and Ⅶ starches than those of regular corn starch . Regardless of amylose contents, all RS residues exhibited an endothermic transition over a similar temperature range (135 $^{\circ}C$~169$^{\circ}C$), with a mean peak temperature of ~154$^{\circ}C$, which is generally foud for retrograded amylose crystallities. Higher transition temperature, enthalypy, and RS yield of AMylomaize V and Ⅶ starches were related granular stability shown by the microscopic and crystallographic studies.
묵의 재료인 동부 전분과 그로부터 분리한 아밀로오스와 아밀로펙틴의 이화학적 생장 및 전분의 호화 특성을 조사하였다. 동부 전분은 타원형의 업자 형태를 이루고 있고, 크기는 $5-25{\mu}m$였으며, X-선 회절도에 의한 결정형은 A형에 가까운 C형이었다. Blue value는 0.39였고, 아밀로오스 함량은 20.7%였다. 동부 전분으로부터 분리한 아밀로오스와 아밀로펙틴의 blue value는 각각 1.55와 0.89였으며, ${\beta}-amylolysis$ limit은 각각 79.1과 71.9%로 나타났다. Brabender amylograph에 의한 호화 개시용도는 $75^{\circ}C$고 나타났다. 또한 8% 전분액은 6% 전분액보다 최고 점도, hot paste viscosity, 및 냉각 점도가 2배 이상으로 높았고, breakdown은 비슷한 값을 보였으며, 냉각과정에서의 consistency와 setback 은 5배 이상으로 높았다.
Raw-starch-digesting $\alpha$-amylase (Amyl III) was purified to an electrophoretically pure state from the extract of a koji culture of Aspergillus awamori KT-11 using wheat bran in the medium. The purified Amyl III digested not only soluble starch but also raw corn starch. The major products from the raw starch using Amyl III were maltotriose and maltose, although a small amount of glucose was produced. Amyl III acted on all raw starch granules that it has been tested on. However, it was considered that the action mode of the Amyl III on starch granules was different from that of glucoamylase judging from the observation of granules under a scanning electron microscope before and after enzyme reaction, and also from the reaction products. Glucoamylase (GA I) was also isolated and it was purified to an electrophoretically pure state from the extract. It was found that the electron micrographic features of the granules after treatment with the enzymes were quite different. A synergistic effect of Amyl III and GA I was observed for the digestion of raw starch granules.
폴리 젖산의 원료가 되는 젖산은 D-, L의 광학이성질체로 존재하는데 L젖산 폴리머와 라세미 폴리머는 결정성과 녹는점이 다르므로 플라스틱으로서의 만족할 만한 물성을 기대하기 위하여 원료로서 광학적으로 순수한 L-lactic acid가 요구된다. 이를 위하여 한 종류의 이성질체만을 선택적으로 생산하는 젖산균주를 탐색하여 분리함으로써 광학적으로 순수한 산물을 얻을 뿐만 아니라 이러한 발효법에 의한 젖산생산은 자연계에 풍부한 starch나 cellulose, 음식물쓰레기와 같은 재생 가능한 자원을 기질로 사용하여 젖산발효에서 전분의 당화 공정에 필요한 시간과 노력을 최소화하며 젖산 생산에 드는 전체적인 비용을 절감할 수 있다. 전분을 직접 이용하는 것은 젖산균의 일반적인 성질이 아니므로 전분이 풍부한 누룩을 수집하여 직접적으로 전분을 분해하여 젖산발효를 수행하는 균주를 누룩에서 분리하였다. 분리균주는 형태학적, 배양학적,생화학적 특성 및 16s rDNA 분석을 통하여 Enterococcus sp.으로 동정되어 Enterococcus sp. JA-27로 명명하였다. 생육에 따른 L-lactic acid의 최적 생산 조건을 검토한 결과, 최적 배지조건은 탄소원으로 1.5% soluble starch, 질소원으로 3.5% tryptone, 그 외의 다른 조성들은 0.1% $K_2$$HPO_4$, 0.04% $MgSO_4$$.$$7H_2$O, 0.014% $MnSO_4$$.$$4H_2$O, 0.04% $MgSO_4$$.$$7H_2$O이었고 최적 배양조건은 $30^{\circ}C$, pH 8이었다. 대량생산을 위한 기초자료를 제공하기 위하여 회분배양과 유가배양을 실시하였고, 회분배양이 L-lactic acid의 생산수율(0.134 g, L-lactic acid/g, soluble starch)이 더 높게 나타나 효과적이었다. 7 L 발효조 배양시 pH를 control한 결과, L-lactic acid 생산이 삼각플라스크에 비해 1.5배 더 증가하였다. 배지 중의 젖산을 정제하기 위한 방법으로 이온교환 칼럼크로마토그라피(ion-exchange column chromatography)를 사용하였고 일련의 정제 과정을 통하여 배양액 중의 L-lactic acid 정제 수율은 약 85% 정도로 나타났으며 HPLC로 분석한 결과 99.7%의 순도를 확인할 수 있었다.
B-amylase(EC 3.2.1.2) was isolated from the root of arrowroot(Peuria thunbergiana Bentham) with distilled water and then fractionated with ammonium sulfate. Crude extract was partially purified by ion exchange chromatography and gel filtration. The enzymatic properties of partially purified $\beta$-amylase were as follows, the enzyme was fractionated with ammonium sulfate between 0.2 and 0.4 saturation, and showed the typical reaction properties of B-amylase producing only maltose from starch. Optinum pH and temperature were pH 6.5, $50^{\circ}C$ respectively. The activity of the enzyme had proportional relations with enzyme protein concentration below 4mg, and had Michaelis constant of 66.7mg% for soluble starch. The enzyme was inhibited by some metal louts such as silver, cadmium, mercury, aluminum, iron and copper.
Starch contents play important roles in determining the fruit quality. Stawberry accumulates starch in the early stages and then mobilized into soluble sugars during fruit ripening. To date the molecular studies on the ADP-glucose pyrophosphorylase (AGPase), a key enzyme of starch biosynthesis, were not reported. cDNAs encoding small (FagpS) and large (FagpL1 and FaspL2) AGPase subunits were isolated from strawberry (Fragaria ${\times}$ ananassa Duch. cv. Niyobou). Both FagpS and FagpL1 cDNAs have open reading frames deriving 55-58 kDa polypeptides, where FagpL2 contains a partial fragment. Sequence analyses showed that FagpS has a glutamate-threonine-cysteine-leucine (ETCL) instead of a glutamine-threonine-cysteine-leucine (QTCL) motif found in all the dicot plants except for Citrus. In fruits, FagpS and FagpL1 were expressed in all stages with a little change in the amounts of transcripts. In the case of FagpL2, we were not able to detect any signal from all stages of fruit development and all tissues except for very a weak signal from the leaf. The results indicate that FagpL1 and FagpL2 show ubiquitous and leaf-specific expression patterns, respectively. The studies suggest that the starch contents in strawberry might be controlled by the expression of AGPase gene at both the transcriptional and post-transcriptional levels during fruit development.
본 연구에서는 식품산업에 적용 가능한 amylase의 발굴을 위하여 된장으로부터 amylase를 생산하는 균주를 분리하였고, 분리된 미생물들의 동정을 통하여 GRAS 미생물로 부터 생산되는 amylase에 대한 효소 특성을 규명하였다. 그 결과 균주 유래 16S ribosomal RNA 유전자 염기서열에서 B. subtilis로 동정되어 본 균주를B. subtilis CBD2로 명명하였다. B. subtilis CBD2 균주의 생육에 미치는 배지 성분에 대한 특성을 검토한 결과 본 균주는 pH 7.0, NaCl 3%, glucose 10%에서 가장 높은 균 생육 특성을 나타내었다. 그리고 본 균주의 amylase 생산에 미치는 탄소원의 영향을 검토한 결과, 본 균주는 soluble starch, corn starch, maize amylopectin 및 wheat starch 중에서 soluble starch를 탄소원으로 사용하였을 때 가장 높은 amylase 생산성을 나타내었다. B. subtilis CBD2유래 amylase의 활성에 미치는 반응조건을 검토한 결과 본 균주 유래 amylase는 pH 8.0 그리고 $50^{\circ}C$에서 가장 높은 효소 활성을 나타내었으며 기질특이성에 대한 검토에서는 corn starch>wheat starch>soluble starch>maize amylopectin 순으로 효소 활성을 나타내었다. B. subtilis CBD2가 생성하는 amylase 효소와 corn starch 기질 반응에 대한 전분 분해능 및 당 생성율 변화에서는 24시간에서 가장 높은 전분 분해능 및 당 생성율을 나타내어 corn starch를 이용한 효소 반응은 24시간이 가장 적절함을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 분리된 균주는 GRAS 미생물인B. subtilis이었으며 본 균주 유래의 amylase 특성을 활용한다면 향 후 식품산업에 있어서 전분 분해 관련 분야에 유용하게 이용될 것으로 기대되어진다.
메밀묵의 부패에 관련된 주요 미생물을 분리 동정하고, chitosan을 농도별(0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0%)로 첨가하여 메밀묵의 저장성과 품질에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, 묵의 부패에 관여하는 주요균은 Serratia liquefaciens와 Staphylococcus lentus로 간주되었다. 메밀묵을 18$^{\circ}C$에서 6일간 저장시 chitosan의 첨가량이 1.5% 이상일 때는 균의 성장이 상당히 억제되었으며, 수분활성도 chitosan의 첨가량이 1.0% 이상일 때 변화가 적었다. 색상은 대조구와 chitosan 처리구 모두 뚜렷한 차이는 나타나지 않았다. 관능적 평가에서는 1.0% chitosan 처리구가 가장 좋은 것으로 평가되었으며 chitosan 농도가 1.5% 이상에서는 기호도가 떨어졌다. 따라서 메밀묵 제조시 chitosan을 1.0% chitosan 처리구가 가장 좋은 것으로 평가되었으며 chitosan 농도가 1.5% 이상에서는 기호도가 떨어졌다. 따라서 메밀묵 제조시 chitosan을 1.0% 첨가함으로써 대조구에 비하여 관능적 품질 향상뿐만 아니라 저장성도 1~2일정도 연장시킬수 있으리라 여겨졌다.
$\alpha$-Amylase (EC.3.2.1.1) of Neurospora crassa (ATCC9279) was cloned in E. coli HB101 using shotgun method, and the enzymes isolated from both N. crassa and E. coli were compared. Chromosomal DNA isolated from the spores of N. crassa was partially digested with PstI restriction endonuclease and rejoined to pBR322 which had been digested with the same enzyme. The resulting recombinant DNA were introduced into E. coli HB101 which had competancy by treating with $CaCl_{2}$. As the result, about 8000 colonies which showed tetracycline resistance were selected and two of the colonies which had 13.5Kb recombinant plasmid exhibit starch degrading activity on starch-containing plate when treated with D-cycloserine. $\alpha$-Amylases from both N.crassa and E. coli were isolated by using ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose ion exchange column chromatography and Bio-Gel P150 gel foltration column. As the result, about 81.3 fold and 5.6 fold purifications in specific activities were obtained respectively, and specific activities of the gel filtrates were 6.1u/mg and 85u/mg respectively. The properties of both enzymes were compared and they showed quite the similar patterns in optimal temperature, optimal pH and had same molecular weight about 100,000 daltons on gel filtration method. Optimal temperatures for both enzymes were $70^{\circ}C$ and optimal pH were about 6 and 10.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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