The purpose of this study was to analyze oxidized methionines in the myosin isoforms of porcine longissimus thoracis, psoas major, and semimembranosus muscles by liquid chromatography (LC) and mass spectrometry (MS). A total of 836 queries matched to four myosin isoforms (myosin-1, -2, -4, and -7) were analyzed and each myosin isoform was identified by its unique peptides (7.3-13.3). Forty-four peptides were observed from all three muscles. Seventeen peptides were unique to the myosin isoform and the others were common peptides expressed in two or more myosin isoforms. Five were identified as oxidized peptides with one or two methionine sulfoxides with 16 amu of mass modification. Methionines on residues 215 (215), 438 (438), 853 (851), 856 (854), 1071 (1069), and 1106 (1104) of myosin-1 (myosin-4) were oxidized by the addition of oxygen. Myosin-2 had two oxidized methionines on residues 215 and 438. No queries matched to myosin-7 were observed as oxidized peptides. LC-MS/MS allows analysis of the oxidation of specific amino acids on specific residue sites, as well as in specific proteins in the food system.
Cancer stem cells (CSCs) are a subpopulation of cancer that can self-renew and differentiate into large tumor masses. Evidence accumulated to date shows that CSCs affect tumor proliferation, recurrence, and resistance to chemotherapy. Recent studies have shown that, like stem cells, CSCs maintain cells with self-renewal capacity by means of asymmetric division and promote cell proliferation by means of symmetric division. This cell division is regulated by fate determinants, such as the NUMB protein, which recently has also been confirmed as a tumor suppressor. Loss of NUMB expression leads to uncontrolled proliferation and amplification of the CSC pool, which promotes the Notch signaling pathway and reduces the expression of the p53 protein. NUMB genes are alternatively spliced to produce six functionally distinct isoforms. An interesting recent discovery is that the protein NUMB isoform produced by alternative splicing of NUMB plays an important role in promoting carcinogenesis. In this review, we summarize the known functions of NUMB and NUMB isoforms related to the proliferation and generation of CSCs.
Amyloid-β (Aβ) is one of the amyloidogenic intrinsically disordered proteins (IDPs) that self-assemble to protein aggregates, incurring cell malfunction and cytotoxicity. While Aβ has been known to regulate multiple physiological functions, such as enhancing synaptic functions, aiding in the recovery of the blood-brain barrier/brain injury, and exhibiting tumor suppression/antimicrobial activities, the hydrophobicity of the primary structure promotes pathological aggregations that are closely associated with the onset of Alzheimer's disease (AD). Aβ proteins consist of multiple isoforms with 37-43 amino acid residues that are produced by the cleavage of amyloid-β precursor protein (APP). The hydrolytic products of APP are secreted to the extracellular regions of neuronal cells. Aβ 1-42 (Aβ42) and Aβ 1-40 (Aβ40) are dominant isoforms whose significance in AD pathogenesis has been highlighted in numerous studies to understand the molecular mechanism and develop AD diagnosis and therapeutic strategies. In this review, we focus on the differences between Aβ42 and Aβ40 in the molecular mechanism of amyloid aggregations mediated by the two additional residues (Ile41 and Ala42) of Aβ42. The current comprehension of Aβ42 and Aβ40 in AD progression is outlined, together with the structural features of Aβ42/Aβ40 amyloid fibrils, and the aggregation mechanisms of Aβ42/Aβ40. Furthermore, the impact of the heterogeneous distribution of Aβ isoforms during amyloid aggregations is discussed in the system mimicking the coexistence of Aβ42 and Aβ40 in human cerebrospinal fluid (CSF) and plasma.
Intercellular interactions are important for the proper development and regulation of tissue function. This is especially necessary in the epididymis, a part of male reproductive tract where sperm become mature and acquire their fertilizing capacity. The caput region of the epididymis consists of several types of cells, including principal, basal, and apical cells. Direct intercellular communication is thus required to precisely regulate the functions of the caput epididymis. In this regard, connexin (Cx) is a molecule that forms channels, which allow the direct exchange of small molecules between cells, enabling intercellular communication. In this study, the expression of Cx isoforms in the caput epididymis at different postnatal ages was determined by using quantitative real-time polymerase chain reaction analysis. Nine of 13 Cx isoforms were detected. The transcript levels of Cx30.3, 31, 31.1, 32, and 40 were highest at 45 days of age, while the expression of Cx43 and 45 gradually decreased with age. A substantial fluctuation of Cx26 expression was detected, with significant decreases before and during puberty, followed by a transient increase at adult-hood and rapid decreases at an old age. A significant increase in Cx37 transcript was observed at 25 days of age, followed by gradual decreases at adult and old ages. These results indicate the significant differential expression of various Cx isoforms in the caput epididymis during postnatal development. It further suggests that the functional regulation and developmental maturation of the caput epididymis are highly related to the postnatal age-related differential expression of Cx isoforms.
Nebulin is a (Mr 600∼900 kDa) large actin-binding protein specific to skeletal muscle and thought to act as a molecular template that regulates the length of thin filaments. Cardiac muscles of higher vertebrates have been shown earlier to lack nebulin. Recently, full-length nebulin mRNA transcripts have been detected in heart muscle, but at lower levels than in skeletal muscle. Nebulin expression also was detected in the kidney, eye, and otic canal, suggesting that nebulin isoforms may also be expressed in these organs. We have searched for nebulin isoforms in brain of human using PCR and Northern blot. Here, we provide evidence that nebulin mRNA transcripts are expressed in brain. Seven nebulin isoforms (B, C, D, E, F, G and H form) are obtained in human skeletal muscle and four isoforms (B, C, G and H form) in human brain cDNA library. We cloned the 1.3 kb of nebulin fragment from human adult brain library by PCR. The identity of the PCR product was confirmed by sequence analysis. The partial brain nebulin sequence was 99% identical to the skeletal muscle cDNA as determined by Blast alignment. It contains two simple-repeats HR1, HR2 and linker-repeats exon l35∼143 except exon 140. It was different from skeletal muscle B form, which contain HR1 and HR8. These data suggest that nebulin isoform diversity occurs even more extensively than previously known, likely contributing to the distinct thin filament architecture of different striated muscles.
Kim, Yi Kyung;Cho, Young Sun;Lee, Sang Yoon;Nam, Yoon Kwon
Fisheries and Aquatic Sciences
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v.17
no.4
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pp.471-478
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2014
Genomic organization, including the structural characteristics of 5'-flanking regions of two 65-kDa protein (WAP65) isoform genes associated with warm temperature acclimation, were characterized and their transcriptional responses to immune challenges were examined in the intestine, kidney and spleen of the mud loach (Misgurnus mizolepis; Cypriniformes). Both mud loach Wap65 isoform genes displayed a 10-exon structure that is common to most teleostean Wap65 genes. The two mud loach Wap65 isoforms were predicted to possess various stress- and immune-related transcription factor binding sites in their regulatory regions; however, the predicted motif profiles differed between the two isoforms, and the inflammation-related transcription factor binding motifs, such as NF-${\kappa}B$ and CREBP sites, were more highlighted in the Wap65-2 isoform than the Wap65-1 isoform. The results of qRT-PCR indicated that experimental immune challenges using Edwardsiella tarda, lipopolysaccharide or polyI:C induced the Wap65-2 isoform more than Wap65-1 isoform, although modulation patterns in response to these challenges were tissue- and stimulant-dependent. This study confirms that functional diversification between the two mud loach Wap65 isoforms (i.e., closer involvement of Wap65-2 in the acute phase of inflammation and innate immunity) occurs at the mRNA level in multiple tissues, and suggests that such differential modulation patterns between the two isoforms are related to the different transcription factor binding profiles in their regulatory regions.
As fat consumption has increased in Korea , serum cholesterol concentrations have risen and the prevalence of atherosclerosis increased. The aim of the present study was to investigate the association among apolipoprotein E (Apo E) phenotypes, dietary fat consumption, plasma lipoprotein levels and fatty acid compositions of red blood cells in young healthy women. Seventy-one percent of participants had Apo E3/3, 14.9 percent had ApoE3/2 , 11.8% had Apo E4/3 and 1.2% had Apo E4.2. The subjects daily consumed approximately 1760kcal containing 29 energy % of fat. The ratio of polyunsaturated fat to saturated fat in a diet was 0. 73 . There were no significant differences of nutrient intakes according to Apo E phenotypes. Total cholesterol concentrations of subjects averaged approximately 160mg/dl , but 12 percent of them had over 200mg/dl, which is higher than the range recommended by the National Cholesterol Deucation Program. Notably, most subjects with 210mg/dl had Apo E4 isoforms. Subjects with Apo E4 isoforms had significantly higher total and LDL-cholesterol concentrations than those with Apo E3/2. Also subjects carrying Apo E4 isoforms tended to accumulated more fat in the body. Their BMI , WHR and arm fat area appeared to be how can arm fat area be greater no you mean grater, please check work vsage than subjects with Apo E3 isoforms, but not significantly. Fat intakes slightly influenced serum cholesterol levels. Myristic aicd intakes were positively correlated to serum total and LDL-choelsterol levels. Polyunsaturated fatty acid intakes were negatively correlated to serum total choelsterollevels. The results of 소냐 study suggest that , people with Apo E4 isoforms need to prevent the raising of serum total and LDL -cholesterol concentrations by reducing calorie and fat intakes and by maintaining a normal weight.
The present research was chiefly designed to determine the effect of the treatment of estrogenic agonist, estradiol benzoate (EB), or antiandrogenic compound, flutamide (Flu), at the weaning age on the expression of connexin (Cx) isoforms in the caudal epididymis of adult male rat. Animals were subcutaneously administrated with a single shot of either EB at a low-dose ($0.015{\mu}g$ of EB/kg body weight (BW)) or a high-dose ($1.5{\mu}g$ of EB/kg BW) or Flu at a low-dose ($500{\mu}g$ of EB/kg BW) or a high-dose (5 mg of EB/kg BW). Expressional changes of Cx isoforms in the adult caudal epididymis were examined by quantitative real-time PCR analysis. The treatment of a low-dose EB caused significant increases of Cx30.3, Cx31, Cx32, and Cx43 transcript levels but reduction of Cx31.1, Cx37, and Cx45 expression. Exposure to a high-dose EB resulted in very close responses observed in a low-dose EB treatment, except no significant expressional change of Cx37 and a significant induction of Cx40. Expression of all Cx isoforms, except Cx45, was significantly increased by a low-dose Flu treatment. Expressional increases of all Cx isoforms were detected by a high-dose Flu treatment. The current study demonstrates that a single exposure to estrogenic or antiandrogenic compound during the early postnatal developmental period is sufficient to disrupt normal expression of Cx isoforms in the adult caudal epididymis.
Seo, Hee-Jung;Seon, Chan-Wook;Choi, In-Ho;Cheon, Yong-Pil;Cheon, Tae-Hoon;Lee, Ki-Ho
Reproductive and Developmental Biology
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v.34
no.2
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pp.103-109
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2010
Functional regulation of a specific tissue or organ is controlled by a number of ways, including local cell-cell interaction. Of several forms of cell-cell junctional complexes, gap junctions are caught a great attention due to a formation of direct linkage between neighboring cells. Gap junctions are consisted of connexin (Cx) isoforms. In the present study, we evaluated expressional profiling of Cx isoforms in the rat initial segment (IS) of the male reproductive tract at different postnatal ages. The presence and expression of 13 Cx isoform mRNAs were determined by semi-quantitative real-time PCR analyses. A total of 8 Cx isoform mRNAs were detected in the IS of the male rats during postnatal development. The highest level of Cx30.3 mRNA was found at 5 months of age, while abundance of Cx31 mRNA was the highest at 1 year of age. Expression of Cx31.1 gene was relatively consistent during the postnatal development. Fluctuation of Cx32 and 37 gene expression was observed during the postnatal period. Significant elevation of Cx40 mRNA abundance was detected at 25 days of age and older ages. Expression patterns of Cx43 and 45 genes were similar with the highest level at 2 weeks of age, followed by gradual decreases at older ages. These results indicate differential regulation on expression of Cx isoforms in the rat IS during postnatal development. A complicated regulation of gene expression of Cx isoforms in the IS at different postnatal ages is suggested.
Glucose is a major source of metabolic fuel and lipid and protein syntheses. Transport of glucose into the cell is regulated by an action of glucose transport.associated transporters, especially solute carriers 2A (Slc2a, protein symbol GLUT). The present study was focused on examination of mRNA expression of various Slc2a isoforms in the epididymis during postnatal development. Total RNAs isolated from different epididymal segments (caput, corpus, and caudal epididymis) were utilized for real-time polymerase chain reaction analyses. Results showed that Slc2a 1, 3, 4, 5, and 8 were expressed in the entire epididymal regions. In addition, the abundance of these Slc2a isoforms' transcripts was different within each epididymal regions. Moreover, the present study showed differential expression of these Slc2a isoforms among different epididymal segments according to postnatal ages. The current study suggests that glucose transport in the epididymis via various Slc2a isoforms would be necessary for maintenance of the epididymal functions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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