Park, Young-Il;Kim, Hee-Guen;Kim, Yoo-Young;Kim, In-Soo
Applied Biological Chemistry
/
v.39
no.6
/
pp.494-500
/
1996
Uptake of hen metal ions by water dropwort (Oenanthe stolonifera DC.) and its cadmium-binding protein were studied to probe for good method to remove heavy metal contaminants from environments. The plant was cultured in the culture medium (pH 7.0) containing the various concentrations of $Cd^{2+}$, $Cr^{3+}$ or $Pb^{2+}$, for 3 and 7 days. The residual heavy metals deposited in roots linearly increased as the metal ions concentration increased up to 17 ppm for $Cd^{2+}$, 20 ppm for $Cr^{3+}$ and 50 ppm for $Pb^{2+}$. Above these concentrations, the plant growth was inhibited and the uptake rates of the metal ions decreased. The heavy metals absorbed by the plant were mostly deposited in roots. In particular, the residual concentration of lead in roots was about four times higher than those of cadmium and chromium. When cultured in the medium containing 20 ppm of each metal ion, 80% of cadmium, 90% of cromium and 96% of lead were deposited in roots out of the total residual metal ions in the plant. These values correspond to 6.1 mg of cadmium, 5.2 mg of chromium and 23.6 mg of lead per one gram of roots tissue on a dry weight basis. A cadmium-binding protein was partially purified by extraction, gel filtration and DEAE-Cellulose chromatography from water dropworts that was grown in the medium containing 20 ppm $Cd^{2+}$. The purified protein was a single band on SDS- and non-denaturing- polyacrylamide gel electrophoresis. Its molecular mass was estimated to be ca. 5,000 dalton by gel filteration. Analysis of amino acid composition of the protein indicated that it had a typical amino acid composition of heavy metal-binding protein in that it contained 27% of acidic amino acids and 9.9% of cysteine. However, it is likely that the protein is a new plant metal-binding protein, since its amino acid composition is somewhat different from those of phytochelatins that have been known so far.
In this study we purified a fibrinolytic enzyme from Cordyceps militaris using a combination of ion-exchange chromatography on a DEAE Sephadex A-50 column, gel filtration chromatography on a Sephadex G-75 column, and FPLC on a HiLoad 16/60 Superdex 75 column. This purification protocol resulted in a 191.8-fold purification of the enzyme and a final yield of 12.9 %. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 52 kDa by SDS-PAGE, fibrin-zymography, and gel filtration chromatography. The first 19 amino acid residues of the N-terminal sequence were ALTTQSNV THGLATISLRQ, which is similar to the subtilisin-like serine protease PR1J from Metarhizium anisopliae var. anisopliase. This enzyme is a neutral protease with an optimal reaction pH and temperature of 7.4 and $37^{\circ}C$, respectively. Results for the fibrinolysis pattern showed that the enzyme rapidly hydrolyzed the fibrin $\alpha$-chain followed by the $\gamma$-$\gamma$ chains. It also hydrolyzed the $\beta$-chain, but more slowly. The A$\alpha$, B$\beta$, and $\gamma$ chains of fibrinogen were also cleaved very rapidly. We found that enzyme activity was inhibited by $Cu^{2+}$ and $Co^{2+}$, but enhanced by the additions of $Ca^{2+}$ and $Mg^{2+}$ ions. Furthermore, fibrinolytic enzyme activity was potently inhibited by PMSF and APMSF. This enzyme exhibited a high specificity for the chymotrypsin substrate S-2586 indicating it's a chymotrypsin-like serine protease. The data we present suggest that the fibrinolytic enzyme derived from the edible and medicinal mushroom Cordyceps militaris has fibrin binding activity, which allows for the local activation of the fibrin degradation pathway.
Cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) of Bacillus sp. isolated from soil was purified and its enzymological characteristics were investigated. It was found that the production of CGTase reached to the maximum when the strain was cultured in the broth containing 0.1 % albumin, 2% $NH_4Cl$, 2% soluble starch and 0.2% $NH_2PO_4$ for 72 hrs at $37^{\circ}C$. The purity of CGTase was increased by 9.7 folds through purification procedures by the following column chromatography DEAE-cellulose ion exchange chromatography and Sephadex G-100, G-150 gel filtration and its specific activity was 528.0 unit/mg. The optimum pH and temperature for the CGTase activity were 8.0 and $80^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable in pH $8.0{\sim}11.0$ at $60{\sim}80^{\circ}C$. The activity of purified enzyme was inhibited by $Pb^{2+},\;Hg^{2+}$ and $Zn^{2+}$. When CGTase was treated with each 20.5 unit, 41 unit, 205 unit and 410 unit to investigate the transglucosylation to stevioside by purified cyclodextrin glucanotransferase, transglucosylation rate to stevioside was 74.9%, 75.7%, 68.7% and 57.9%. Brown effect was observed above the concentration amounting to 205 unit of our CGTase.
Hydrogen sulfide ($H_2S$) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though $H_2S$ can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirable aroma, it plays prominent roles as a neuromodulator in the mammalian brain as well as a smooth muscle relaxant. Nowadays studies on the proteins which produce $H_2S$ are carried out in various fields such as structure, function, and metabolism. Here we propose to develop a simple and rapid $H_2S$ forming assay method, which will lead to speed up preparing the $H_2S$ forming proteins for identification by MALDI-TOF MS analysis. We detected three kinds of proteins which produce $H_2S$ in the crude extract of Saccharomyces cerevisiae. Those proteins were cystathionie $\beta$-synthase, O-acetylserine sulfhydrylase, and cystathionine $\gamma$-lyase.
An alkalophilic Cephalosporium sp. RYM-202 capable of producing cellulase components was isolated from soil. This organism grew best at an initial pH 9.0 and produced cellulase maximal at an initial pH 9.5-10.0. Three carboxymethyl cellulases(CMCases), P-I-I, P-I-II and P-II-I, were partially purified by DEAE-Sephadex A-50 ion exchange column followed by Sephadex G-150 gel filtration. The optimum pH values for activity were 7.5 for P-I-I, 8.0-9.5 for P-I-II and 7.5-10.0 for P-II-I. All CMCases were stable between pH 4.5 and 12.0. Temperature optima for activity ranged between 40 and $60^{\circ}C$ and more than 50% of the maximum activity was observed at $20^{\circ}C$ for both of P-I-I and P-II-I. The activity of CMCases was significantly stable in the presence of various laundry components, such as, surfactants, chelating agents and alkaline proteinases.
To optimize the expression and secretion of ferritin protein associated with ion storage in the mushroom, Pleurotus eryngii, a recombinant secretion vector, harboring the ferritin gene, was constructed using a pPEVPR1b vector under the control of the CaMV 35S promoter and signal sequence of pathogen related protein (PR1b). The ferritin gene was isolated from the T-Fer vector following digestion with EcoRI and HindIII. The gene was then introduced into the pPEVPR1b secretion vector, and it was then named pPEVPR1b-Fer. The recombinant vector was transferred into P. eryngii via Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. The transformants were selected on MCM medium supplemented with kanamycin and its expression was confirmed by SDS-PAGE and western blotting. Expression of ferritin protein was optimized by modifying the culture conditions such as incubation time and temperature in batch and 20 L airlift type fermenter. The optimal conditions for ferritin production were achieved at 25℃ and after incubating for 8 days on MCM medium. The amount of ferritin protein was 2.4 mg/g mycelia, as measured by a quantitative protein assay. However, the signal sequence of PR1b (32 amino acids) seems to be correctly processed by peptidase and ferritin protein may be targeted in the apoplast region of mycelia, and it might not be secreted in the culture medium. The iron binding activity was confirmed by Perls' staining in a 7.5% non-denaturing gel, indicating that the multimeric ferritin (composed of 24 subunits) was formed in P. eryngii mycelia. Mycelium powder containing ferritin was tested as a feed additive in broilers. The addition of ferritin powder stimulated the growth of young broilers and improved their feed efficiency and production index.
The purpose of this study was to find out a suitable resin to remove $NO_3-N$ from groundwater. Four different commercial resins differentiated by type, porosity and nitrate selectivity were used to compare the performance of nitrate removal. Gel type, Type 2 anion exchange resin was preferable when anion concentration of raw water was low. But efficiency of this resin decreased as flow rate increased. However, macroporous type resins were not affected by increasing flow rate. Macroporous resins were preferable when anion concentrations in raw water were high and high flow rate was proposed. And the general type resin showed better efficiency when sulfate concentrations were low. However the nitrate selective resin had better efficiency in treating raw water of high sulfate concentration. From the results, it may be drawn that nitrate selective resins are preferable to general type when a sulfate concentration in groundwater is over 50mg/l.
Two trypsin-like enzymes, designated trypsin A and 3, purified from the intestine of menhaden by $(NH_4)_2SO_4$ fractionation, Benzamidine-Sepharose 6B affinity chromatography, DEAE-Sephacel ion exchange chromatography and Sephadex G-75 gel filtration chromatography. The two trypsins were subjected to compare the enzymatic properties of the trypsin-like enzymes from the other dark fleshed fishes. Both trypsins catalysed the hydrolysis of N$\alpha$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide and they were remarkably inhibited by several well known trypsin-inhibitors, tosyllysyl chloromethyl ketone, soybean trypsin inhibitor, be-nzamidine, leupeptin and antipain, etc. Therefore, it was ascertained that the two enzymes are serine-type trypsins. The molecular weights of these enzymes were about 25,000 and 26,200, respectively, ;Is determined by SDS-PAG electrophoresis and by Sephadex G-100 gel filtration, and the molecular weights of these two enzymes are somewhat fewer than those from the other dark fleshed fishes. Both enzymes had less basic amino acids such as arginine and Iysine, whereas they had slightly high contents of neutral amino acids, glycine, alanine and tryptophane. The enzymes showed a pH optimum of $8\~11$ at $60^{\circ}C$ against the $N\alpha$-benzoyl-DL-argi-nine-p-nitroanilide substrate and they were quite unstable above $40^{\circ}C$ and under the atidic pH region. The Km constant of the two enzymes against the $N\alpha$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide was $1.4\times10^{-4}M$ for trypsin A and $4.3\times10^{-5}M$ for trypsin B, respectively.
The objective of this research was to characterize fucoidans isolated from Laminaria religiosa and Undaria pinnatifida in Korea to obtain basic data for Production of soluble dietary fiber materials with biological functionality. Fucoidans were successively extracted 3 times at $65\%$ for 1hr with arid solution of pH 2.0, and cetylpyridinium chloride was used for partial purification. The yields of partially purified fucoidans were $2.71\%$ for L. religiosa, $6.65\%$ for sporophylls of U. pinnatifida and $0.40\%$ for blade of U. pinnatifida. The yield from sporophylls of U. pinnatifida was highest among the sample tested, whereas the yield from blade of U. pinnatifida was lowest. It appeared that the fuconidans content in different parts of U. pinnatifida varied. Partially purified fucoidans were separated into 3 fractions by DEAE-Sephadex A-25 ion exchange column and the maior fractions were refractionated with tractional precipitation with ethanol. $60-70\%$ ethanol precipitated fractions of 1. religiosa and sporophylls of U. pinnatifida turned out to be homogeneous by cellulose acetate electrophoresis and gel filteration chromatography. The molar ratios of fucose, galactose, and sulfate in the purified fucoidans(ethanol precipitated fractions) were 1 : 0.31 : 2.43 for L. religiosa and 1 : 0.97 : 1.99 for sporophylls of U. pinnatifida. The averaged molecular weights of the purified fucoidans from L. religiosa and sporophylls of U. pinnatifida were 31,000 and 38,000, respectively.
A carotenoprotein from the muscle of Ascidian (Halocynthia roretzi) was purified by ion exchange chromatography and gel filtration chromatography, and analyzed molecular weight, stability of pH and heat, effect of denaturing agents, amino acids and fatty acids composition. The purified carotenoprotein had absorption maxima of 463 nm and 439 nm. The carotenoprotein had an approxmimate molecular weight of 64.4 kDa in polyacrylamide gel electrophoresis. The amino acid compositions of carotenoprotein were mainly Gly (15.39%), Asn (11.31%), Gln (10.62%) and Ser (13.35%). The major fatty acids composition of carotenoprotein were $C_{16:1(n-7)}\;(15.4%)$, $C_{22:1(n-9)}\;(14.5%)$ and $C_{20:1(n-11)}\;(11.4%)$. The monounsaturated fatty acids (45.2%) contained abundant content compared to other saturated (38.1%) and polyunsaturated (11.7%) fatty acids.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.