• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제6권2호
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• pp.144-149
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• 2001

For the production and purification of a single chain human insulin precursor, four types of fusion peptides $\beta$-galactosidase (LacZ), maltose binding protein (MBP), glutathione-S-transferase (GST), and (His)(sub)6-tagged sequence (HTS) were investigated. Recombinant E. coli harboring hybrid genes was cultivated at 37$\^{C}$ for 1h, and gene induction occurred when 0.2mM of isopropyl-D-thiogalactoside (IPTG) was added to the culture broth, except for E. coli BL21 (DE3) pLysS harboring a pET-BA cultivation with 1.0mM IPTG, followed by a longer than 4h batch fermentation respectively. DEAE-Sphacel and Sephadex G-200 gel filtration chromatography, amylose affinity chromatography, glutathione-sepharose 4B affinity chromatography, and a nickel chelating affinity chromatography system as a kind of immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) were all employed for the purification of a single chain human insulin precursor. The recovery yields of the HTS-fused, GST-fused, MBP-fused, and LacZ-fused single chain human insulin precursors resulted in 47%, 20%, 20%, and 18% as the total protein amounts respectively. These results show that a higher recovery yield of the finally purified recombinant peptides was achieved when affinity column chromatography was employed and when the fused peptide had a smaller molecular weight. In addition the pET expression system gave the highest productivity of a fused insulin precursor due to a two-step regulation of the gene expression, and the HTS-fused system provided the highest recovery of a fused insulin precursor based on a simple and specific separation using the IMAC technique.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제3권4호
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• pp.334-338
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• 1998

Kale(Brassica oleracea var. acephala) is one of Cruciferous vegetables that is closely related to the wild ancestral form of cabbabe. The ethanol extract of kale which contains the active compoundsss under Salmonella assay system was fractionated with chloroform to collect the nonpolar solvent soluble compounds, and then further fractionation was carried out by silica gel column chromatography. Among kale extracts separated by silical gel column chromatography, the fractions of 4, 5 and 6 exhibited strong antimutagenic activities. The major active compounds from the fraction were identified as chlorophyll derivatives by the analysis with HPLC-fritp-MS. The molecular weights of each chlorophyll derivatives in the sample were acquired from the peaks of positive ion atomosphere pressure chemical ionization (APCI) mas spectrometry.

• 분석과학
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• 제12권4호
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• pp.265-272
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• 1999

에스트로겐처럼 행동하여 호르몬 수용체와 결합하거나 세포의 신호전달 과정에 영향을 미침으로서 내분비계를 교란시킬 수 있는 환경 에스트로겐 19종 (phytoestrogen: 12종, mycoestrogen: 5종, synthetic estrogen: 2종)의 동시 프로필 분석을 시도하였다. Gas Chromatography/Mass Spectrometry (GC/MS)의 selected ion monitoring (SIM) 방법을 기본으로 하였으며, 액체-고체 추출, 효소 기수분해, 액체-액체 추출 그리고 trimethylsilyl (TMS)-ether 형태의 유도체화를 거치는 비교적 간편한 전처리 방법으로 47.6~99.5%의 회수율과 0.66~9.33%, 1.66~16.14%의 within-a-day 및 day-to-day 분석의 RSD 값을 얻었다. 이 방법을 적용하여 정상 성인 여성과 남성의 뇨 시료에 존재하는 대상 물질들의 농도범위를 결정함으로서 환경 에스트로겐의 영향을 평가하는데 기준이 될 수 있는 한국인 정상인 참고치를 설정하였다.

• Mass Spectrometry Letters
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• 제6권4호
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• pp.99-104
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• 2015

A liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) system was used to identify and distinguish oligostilbene diastereoisomers. A polyphenolic extract from Neobalanocarpus heimii known to be rich in oligostilbenes of various degrees of condensation was used as test material. Fourteen oligostilbenes were isolated from this extract on a fully automated semi-preparative HPLC system. Out of these, two pairs of dimers, one pair of trimers, two pairs of tetramers and a group of four tetramers with similar skeleton were identified as diastereoisomers. Their structures and configurations were established by spectroscopic methods. All isolated compounds were subjected to an LC-MS/MS to study their fragmentation patterns. The experiments were performed on a liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) with electrospray-ionization (ESI) interface in positive mode. MS/MS spectra of each pure compound were recorded by direct infusion in identical conditions and their product ion spectra were analysed. Some subtle yet significant differences were observed between the spectra of oligostilbenes from the various diastereoisomeric series.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제19권2호
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• pp.160-164
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• 1998

The NADH-cytochrome b5 reductase (NCBR), a mitochondrial external electron carrier, was purified from bovine heart and turnip and their properties were examined. The mitochondrial outer membranes separated were subjected to NCBR isolation through DEAE-Cellulose ion exchange, DEAE-Sephadex gel chromatography, and hydroxyapatite adsorption chromatography. These processes yielded the purification folds of 88 and 42 and the recovery percentages of 0.2%, 5.67% for turnip and bovine heart, respectively. The molecular weight of the NCBR from the two sources was estimated to be 35,000 using SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The Michaelis constant Km and maximum velocity Vmax were determined by measuring the NADH-ferricyanide redox system as well as the NADPH-ferricyanide redox system. The kinetics showed that both NCBRs had higher affinities for NADH than artificial electron-acceptor substrate ferricyanide. Although NADPH had a lower affinity for the enzymes than NADH, this study showed the 2'-phosphate dinucleotide could be used as a substrate.

• 미생물학회지
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• 제23권1호
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• pp.25-33
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• 1985

Cellulomonas flavigena KIST 321이 생산하는 균체외 cellulose 분해효소를 gel filtration법과 ion-exchange chromatography법으로 3종의 다른 효소를 분리하여 이들을 A, B, 및 C 효소로 명명하였다. 분리된 각 효소를 결정적 기질에 처리하여 일어나는 기질의 구조변화를 적회전 분광법과 X-ray crystallography법으로 측정하여 다음 결론을 얻었다. B효소는 결정성 cellulosem이 구성단위인 glucopyranose의 불안정화로 그 결정도를 감소시키는 $C_1$형의 효소이며 A 및 C 효소는 $C_x$형의 효소로 B 효소의 반응생성물에 작용하여 glucose를 생산하였다. 이들 각 효소의 작용에서 본균의 cellulase의 작용기작을 고찰하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권1호
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• pp.18-22
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• 1993

Oligofructo당 생산에 이용될 수있는 endoinulinase 분석방법은 그 균주가 endo- 및 exoinulinase를 함께 내는 경우, 일반적인 환원당 분석법으로는 정량하기가 어려워진다. 이 실험에서는 endoinulinase만을 선택적으로 정량하기 위한 하나의 방법으로써 항체 분석법을 이용하였다. Aspergillus niger ATCC 16882 조효소액을 CM-DEAE ion exchange chromatography, pI 2.5-5에서 preparative isoelectric focusing, HPLC gel filtration을 통해 순수하게 endoinulinase에 대한 항체를 얻었다.DEAE-ion exchange 및 protein A에서 정제된 이항체는 immunoassay 한 결과, exoinulinase 가 아닌 endoinulinase와 만 특이하게 반응하였고, immuno affinity chromatography 결과들은 배양액 중의 다른 단백질과 반응하지 않음이 확인되었다. 이눌린을 유일한 탄소원으로 한 배지에서 자란 1200여개의 야생균주들로부터 배양 특성이 우수한 균주를 1차로 선별하고 이 균주들의 endoinulinase 함량을 rocket immunoassay를 통하여 조사하였다. 이 중 1개의 균주는 Novozyme의 ATCC 1688와 비교할만한 정도의 endoinulinase를 배양액 중에 분비함을 확임할 수 있었다.

• Journal of Radiation Protection and Research
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• 제28권1호
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• pp.25-33
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• 2003

악성 종양 진단에 사용되고 있는 방사성 동위원소 $^{67}Ga$의 대량생산을 위한 자동화장치를 개발하였다. $^{67}Ga$은 조사된 $^{68}Zn$ 농축타켓에서 분리 생산하며 생산방법으로는 크게 용매추출법과 이온수지 법이 이용된다. 분리과정을 자동화하기 위해서 전도도 측정 장치, 화학처리 초자, 에어 공급 및 용액공급튜브, 밸브들로 이루어진 분액장치와, 이 장치를 구동하고 제어하는 PLC 기반 콘트롤러 및 사용자 직접제어용 모니터링 장치로 구성된 시스템을 개발하였다. 개발된 시스템을 사용함으로써 생산 중에 발생되는 불필요한 방사선 피폭으로부터 생산자를 보호할 뿐만 아니라, 생산시간의 단축, 생산효율의 증대로 $^{67}Ga$ 대량 생산이 가능하게 되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제38권2호
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• pp.169-175
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• 2006

Citrate Iyase(CL)와 oxaloacetate decarboxylase(OD)를 고정화하여 효소 반응기를 제작하고 효소반응으로 생성된 carbonate ion을 ion selective electrode를 이용한 전위차법 FIA system으로 식품에함유된 구연산의 농도를 측정하였다. 최적 센서 시스템의 조건은 CL과 OD을 같이 고정화시키는 방법으로 CL과 OD의 양이 각각 10 units, 60 units, 담체량은 0.3 g, carrier buffer 1(0.1 MTris buffer)은 pH 7.5, carrier buffer의 유속은 12 mL/hr으로 결정되었다. 최적 상태에서의 표준검량곡선은 $10^{-1}\;M-10^{-3}\;M$ 범위에서 직선적인 상관관계$(r^2=0.9986)$를 나타내었다. 당류와 유기산류에 대한 센서 시스템에 대한 방해효과를 측정한 결과 당류는 거의 저해효과를 보이지 않았으며 유기산의 경우도 저해 효과가 5% 미만으로 이들 물질에 의해 감응도가 크게 방해받지 않은 것으로 나타났다. 구연산 바이오센서와 GC를 사용하여 식품 시료에 함유된 구연산의 농도를 분석한 결과 두 방법간에 유의적인 차이가 없는 것으로 나타나 본 연구에서 구축한 구연산 바이오센서 시스템은 식품에 함유된 구연산 분석시 신뢰성 있는 결과를 주는 것으로 보여졌다.

• 한국식품영양학회지
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• 제12권2호
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• pp.184-190
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• 1999

Soybean protein consists of two major components $\beta$-conglycinin and glycinin which together consti-tute 70% of the total seed storage protein at maturity. $\beta$-Conglycinin is trimeric glycoprotein and for-med by the assembly of various combinations of three subunits $\alpha$,$\alpha$' and $\beta$ which have molecular weig-hts of 69,000, 72,000 and 42,000, respectively. Recently $\beta$-conglycinin was identified as powerful LDL lip-oprotein receptor activation hypercholesterolemia and major allergenic proteins. To investigate these reasons we constructed an expression system of cDNA encoding $\alpha$-subunit of $\beta$-conglycinin in Escherichia coli and purified the expressed protein. The pro-$\beta$-conglycinin synthesized in Escherichia coli BL 21 (DE3)comprised approximately 15% of the total bacterial proteins and the expressed protein are formed sol-uble and trimer such as native protein in Escherichia coli cells. The highly expressed protein was purified to homogeneity by salt precipitation with 20~40 % ammonium sulfate ion-exchange chromatography with Q-sepharose and hydrophobic column chromatography with Butyltoyopearl.