• 한국미생물·생명공학회지
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• 제34권4호
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• pp.318-322
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• 2006

알칼리와 고온에 대한 내성을 가진 invertase를 대량생산하기 위하여 호알칼리성이며 고온성 세균인 Bacillus sp. TA-11의 세포내 invertase유전자를 pUC 19벡터를 이용하여 E. coli HB101에 클로닝 시키고 발현시켜 invertase를 강력하게 생산하는 재조합 E. coli (pYC17)를 얻었다. 재조합 E. coli(pYC17)를 이용한 invertase 생산 최적조건을 검토한 결과 E. coil(pYC17)를 0.25% sucrose, 0.5% yeast extract, 0.1% $K_2HPO_4$와 0.1% $KH_2PO_4$을 함유한 SY배지(초기 pH 9.0)에 접종하여 37$^{\circ}C$에서 9시간 배양하였을 때 친주보다도 많은 47.7 U/ml-cell free extract의 invertase가 생산되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제30권2호
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• pp.169-178
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• 1987

Kluyveromyces marxianus로 부터 inulase를 생산하고 정제하며 intra 및 extracellular inulase의 성질을 조사하였다. 본 균주는 stationary phase인 24시간째 intra 및 extracelullar enzyme의 생산이 최고에 달했으며 유기 질소원으로 YNB를 사용하고 배양 중 pH를 조절해 줌으로써 효소 생산을 향상시킬 수 있었다. 조효소는 DEAE-cellulose에 의해 intra 및 extracellular inulase 모두 2개의 fraction으로 분리되었고 각 fraction의 전기영동 양상은 비슷하여 주 band를 비롯 모두 3개의 glycoprotein band가 관찰되었으며 이중 주 band만 inulase 및 invertase activity를 보유하고 있었다. 정제 효소의 inulase 및 invertase의 최적 pH는 각각 5.0과 4.5였고 intra가 extracellular enzyme 에 비해 다소 넓은 범위의 pH에서 높은 활성을 나타내었다. 모든 fraction의 최적 온도는 inulase가 $40^{\circ}C$, invertase가 $50^{\circ}C$였으며 intracellular enzyme이 더 넓은 범위의 온도에서 안정하였고 열에 대한 안정성도 intracellular inulase가 extracellular inulase보다 높게 나타났다. Km value는 intra가 $16{\sim}19mM$, extracellular inulase가 $9{\sim}11mM$로써 extracellular inulase가 inulin에 대한 친화력이 더 높았으나 모두 exo-type의 inulase로 판명되었다.

• 자연과학논문집
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• 제18권1호
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• pp.29-38
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• 2007

호 알칼리성이며 고온성인 Bacillus cereus TA-11이 세포내로 생성하는 invertase의 생합성 조절 양상을 조사하였다. Bacillus cereus TA-11의 세포내 invertase는 10 mM sucrose의 180분 처리와 25 mM raffinose의 90분 처리에서 각각 효율적으로 유도되었다. 또한 glucose는 sucrose에 의한 invertase의 유도를 억제하였고 cAMP첨가는 catabolite repression을 감소시키지 못하였다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제50권4호
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• pp.196-201
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• 2007

An intracellular invertase was purified to homogeneity from the cell extract of an alkalophilic and thermophilic Bacillus sp. TA-11, which was classified as a new species belonging to Bacillus cereus based on chemotaxanomic and phylogenetic analyses. The purified enzyme with a recovery of 26.6% was determined to be a monomeric protein with a molecular weight of 23 kDa by SDS-PAGE and 26 kDa by gel filtration. The maximum enzyme activity was observed at pH 7.0 and $50^{\circ}C$, and the purified enzyme was stable at the pH range of 5.0 to 8.0 and below $60^{\circ}C$. $K_m$ and $V_{max}$ values of the enzyme for sucrose were 370 mM and 3.0 ${\mu}M$ per min, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited by bivalent metal ions ($Hg^{2+}$, $Cd^{2+}$ and $Cu^{2+}$) and sugars (glucose and fructose).

• Journal of Life Science
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• 제11권1호
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• pp.14-21
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• 2001

To investigate the changes of carbohydrate metabolism in the senescing leaves of Zea mays during dark-induced senescence, the changes in the contents of reducing sugar, sucrose and starch as well as the activities of sucrose synthase, three isozymes of invertase, and ${\alpha}$-amylase were measured. In the senescing leaves, the content of reducing sugars temporarily increased at 4 d and rapidly decreased thereafter, whereas sucrose contents gradually decreased thereafter, whereas sucrose contents gradually decreased until 3 d of senscence and significantly decreased thereafter. The activities of intracellular invertases such as soluble acid and alkaline formed gradually enhanced until 4 d of leaf senescence and significantly declined thereafter. The extracellular invertase activity showed no significant changes during leaf senescence. The deactivation of sucrose synthase was observed within 3 d of leaf senscence. On the other hand, the starch contents gradually declined during 2 d of leaf senescence, and showed a temporary increase at 3 d, which is similar to the pattern of sucrose synthase activity., These results imply that sucrose in the senescing leaves. The major enzymes which correlated to the breakdown of sucrose during dark-induced senescence were soluble acid and alkaline invertases, not sucrose and ABA accelerated leaf senescence by inducing the accumulation of reducing sugar. These result, therefore, that leaf senescence may be mediated by the temporary quantitative changes of reducing sugar induced by the activation of intracellualr inveertases.

• 생명과학회지
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• 제14권3호
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• pp.429-434
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• 2004

Zymomonas mobilis 유래 levansucrase 유전자(levU)를 GAL1 promoter 하류에 연결시킨 pYES-levU와 GAL10 promoter 하류에 Kluyveromyces marxianus exoinulinase의 분비 신호서열(INU1 ss) 하류에 연결시킨 pYInu-levU를 각각 구축하였다. 이들 plasmid를 invertase 결손 변이주(suc2-$\Delta$9)인 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환시켜 고활성 형질전환주를 선발하였다. 효모 형질전환주를 galactose 함유 배지로 배양한 결과, pYES-levU 함유 형질전환주인 경우 levansucrase의 총활성은 7.17U/ml이고, pYInu-levU 함유 형질전환주인 경우 6.61U/ml에 도달하였다. 발현된 levansucrase 약 50% 정도가 배지와 periplasmic space에 존재하였고, INU1 ss에 의한 분비효율 증가는 관찰할 수 없었다. 또한, 효모에서 발현된 재조합 levansucrase는 과당쇄화된 형으로 생산되는 것으로 보여진다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권3호
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• pp.206-211
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• 2004

Pseudomonas aurantiaca 유래 levansucrase 유전자(lscA)를 GAL1 promoter 하류에 연결시킨 pYES-lscA와 CAL10 promoter와 Kluyveromyces marxianus exoinulinase의 분비 신호서열(INU1 ss)하류에 연결시킨 pYInu-lscA를 각각 구축하였다. 이들 plasmid를 invertase 결손 변이주(suc2-$\Delta$9)인 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환시켜 고활성 형질전환주를 선발하였다. 효모 형질전환주를 galactose 함유 배지로 배양한 결과, pYES-lscA 함유 형질전환주인 경우 levansucrase의 총활성은 8.62 U/ml이고, pYInu-lscA 함유 형질전환주인 경우 5.43 U/ml에 도달하였다. 발현된 levansucrase의 약 80% 정도가 periplasmic space와 cytopla느에 존재하였고, INU1 ss에 의한 분비효율 증가는 관찰할 수 없었다. 또한, 효모에서 발현된 재조합 levansucrase는 과당쇄화된 형으로 생산되는 것으로 보여진다.