• Fisheries and Aquatic Sciences
• /
• 제20권11호
• /
• pp.29.1-29.7
• /
• 2017

The objective of this study was to determine a simple and reliable ploidy identification protocol for the rainbow trout (RT), Oncorhynchus mykiss, in the field condition. To evaluate the ploidy level and compare different detection protocols, triploid RT and gynogenesis were induced by UV irradiation and/or heat shock. The hatching rate at day 30 was 85.2% and the survival rate at day 90 was 69.4% (fingerling). The sex ratio of female RT was 93.75% in the gynogenesis group, illustrating that the UV irradiation inactivated the sperm DNA. The hatching rate and survival rate were 82.0 and 74.7%, respectively, in the triploid-induced group. The triploid induction rate by heat shock procedure was 73.9%. Cytogenetic protocols for ploidy identification such as chromosome counting, erythrocyte nuclear size comparison, and analysis of nucleolar organizing regions (NORs) by silver staining were compared. Silver nitrate staining showed the greatest success rate (22/23 and 32/32 for the triploid-induced group and gynogenesis group, respectively), followed by erythrocyte nuclear size comparison (16/23 and 19/32 for the triploid-induced group and gynogenesis group, respectively) and, lastly, chromosome preparation (2/23 and 6/32 for the triploid-induced group and gynogenesis group, respectively) with the lowest success rate. Based on our findings, silver staining for RT ploidy identification is speculated to be highly applicable in a wide range of research conditions, due to its cost-effectiveness and simplicity compared to other numerous ploidy detection protocols.

• 한국양식학회지
• /
• 제12권3호
• /
• pp.167-173
• /
• 1999

Blocking the 1st mitotic cleavage was performed in mud loach (Misgurmus mizolepis) using UV-irradiated cyprinid loach (M. anguillicaudatus) sperm and ternal shocks Optimum UV range for inactivation of cyprinid loach sperm and thermal shocks. Optimum UV range for inactivation of cyprinid loach sperm was between 3,150 to 4,050 ergs/m$m^2$. Heat shock treatment ($41^{\circ}C$ for 3mins) with various treatment initiation times ranged from 22 to 50 min post insemination resulted wide range of success for induced gynogenesis. Best result was obtained when haploid egges were shocked at 28 min after insemination (corresponding to metaphase division of the 1st cleavage); 26% of total eggs inseminated were viable diploid gynogens. The hatching success and early survival of the both meiotic and mitotic gynogenetic groups were significantly lower than those of control crosses (P<0.05). Maternal origin of induced gynogenetic mud loach was verified by multi-locus DNA fingerprinting.

• Fisheries and Aquatic Sciences
• /
• 제4권1호
• /
• pp.39-46
• /
• 2001

To examine the effect of copy number-dependent transgenic genotype on the expression of foreign gene, stable hemizygous and homozygous transgenic breeding line was established using artificial parthenogenesis. For this purpose, induced diploid gynogenetic transgenesis was optimized in mud loach (Misgurnus mizolepis) using UV-irradiated cyprinid loach (M. anguillicaudatus) sperm and thermal shocks. Optimum UV range for inactivation of cyprinid loach sperm was between 3,150 to $4,050\;ergs/mm^2$ The UV-irradiated sperm were inseminated into eggs from recessive color strain (yellow) or heterozygous transgenic mud loach containing CAT gene. Cold shock at $2^{\circ}C$ for 60 min, 5 min post fertilization successfully restored the diploidy of eggs inseminated with UV-irradiated sperm. Restoration to diploidy was confirmed by flow cytometry and gynogenetic status was verified by examining maternal exclusive inheritance of multi-locus DNA fingerprints, body color and transgenic marker. Putative isogenic transgenic fish clearly showed homozygous status at trans gene locus based on Southern blot hybridization and progeny testing. Further, such homozygous gynogenetic diploids revealed the increased levels of transgene expression, when compared to those of heterozygous (hemizygous) transgenic fish.

• 한국양식학회지
• /
• 제20권3호
• /
• pp.184-189
• /
• 2007

대농갱이, Leiocassis ussuriensis의 유전육종학적 연구의 일환으로 자성발생성 이배체 유도 기법을 최적화하였다. 대농갱이 반수체 유도를 위해 다양한 농도의 자외선 조사를 통해 대농갱이 및 동자개 정자의 유전학적 불활성화 실시하였으며 최적 자외선 처리 조건은 4,800 $ergs/mm^2$로 나타났고, 이 때 Hertwig effect와 함께 97% 이상의 반수체 유도가 가능하였다. 반수체 대농갱이는 전형적인 반수체 증후군(haploid syndrome)을 보였으며, 반수체 대농갱이를 이배체로 복원시키기 위해 $4^{\circ}C$ 또는 $6^{\circ}C$에서 인공 수정 후 3, 5 및 7분 후에 30, 40 및 50분 간의 처리를 수행한 결과, 가장 높은 생존율(38.6%)과 이배체 복원률(87.9%)은 수정 5분 후 $4^{\circ}C$에서 40분간 처리 조건에서 관찰되었다.

• 한국양식학회지
• /
• 제13권4호
• /
• pp.359-362
• /
• 2000

Mitotic gynogenesis was induced in the far eastern catfish, Silurus asotus using UV-irradiated heterospecific sperm and cold shock treatment. Eggs were activated with the sperm of mud loach, Misgurnus mizolepis which has been irradiated with UV at dose of 9,000 ergs/$mm^2$. To determine the optimum duration required to prevent the first cleavage, a cold shock at 4$^{\circ}C$ with duration of 20, 30 or 40 min was applied to the eggs 50 min after activation. To induce diploidization of mitogenesis, the most effective protocol was to apply cold shock to 50-min old (after activation) eggs at 4$^{\Circ}C$ for 30min.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
• /
• 제6권2호
• /
• pp.71-76
• /
• 2002

최첨단 연구로 성장하고 있는 해양생물공학 연구 중 염색체공학 연구의 배수체 조작, 성분화, 자성 발생, 형질전환 어류와 유전자 조작에 관한 최근의 연구 동향을 분석하고 향후 발전 방향에 관하여 살펴보았다. 배수체 연구 중 3배체 어류 생산 연구는 20여종의 어류들 중 무지개 송어와 메기가 물리적 충격을 이용한 실험법으로 산업적으로 이용 가능한 수준에 있다. 성분화를 포함한 약 15종의 고급 어종이 방사선 투사법에 의해 자성 발생 2배체를 생산 유도하였다. 형질전환 어류는 1985년 이래 약 40여종의 어류가 외래 유전자를 미세 조작이나 전기충격법에 의해 형질전환되고 있다. 최근에 역바이러스성 벡터들에 의한 외래 유전자를 이용한 형질전환 어류가 생산되었으며 이러한 형질전환 어류는 기초과학 육성은 물론 해양생물공학 연구의 발전이 기대되고 있다.

• 한국양식학회지
• /
• 제8권4호
• /
• pp.295-306
• /
• 1995

본 연구는 틸라피아의 생산성 향상을 위한 유전 육종학적 연구의 일환으로 성전환 기법과 자성발생성 이배체 유도 기법을 통해 순계의 암컷 및 수컷을 확립하고자 실시하였다. O. niloticus를 대상으로 $17\beta-estradiol$을 480 ppm의 농도로 경구 투여하여 수컷을 암컷으로 성전환시킨 격과 $95\~100\%$의 놀은 성전환 유도율을 보였다. 유도된 XY 암컷 4마리를 수컷을 달리하여 자손 감정을 실시한 곁과 $71.4\~73.3\%$의 수컷 출현 빈도를 보여 \chi^2$(1:1) 에 대해 P<0.01 수준에서 높은 유의차를 보였으나 X" (1 : 3)에 대해서는 P) 0.05 수준에서 유의차가 없었다. 또한 이들 성전환된 XY 암컷으로부터 유도된 난을 4,050 $erg/mm^2$의 자외선으로 불활성화시킨 정y.t와 수정 3분 후 저온 처리하여 자성발생성 이배체를 유도했다. 자성발생성 이배체의 수정율은 대조군과 차이가 없었으나 부화율 및 초기 생존율은 대조군 보다 약간 낮았다. 부화 후 80일째 자성발생성 이배체의 성비 조사격과 수컷이 암컷보다 출현 빈도가 높게 나타났으며(P<0.01), 자성발생성 이배체의 세포 및 핵의 크기는 정강 이배체와 동일하였다. 본 연구에서 유도된 자성발생성 이배체 틸라핀량 형질의 순계 확보를 가능하게 함으로써 틸라피아 양식의 생산성 향상을 꾀할 수 있을 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
• /
• 제20권11호
• /
• pp.1634-1639
• /
• 2010

본 연구는 무지개송어 양식 산업의 생산성 향상을 위해 전 암컷 무지개송어 대량생산을 위한 일환으로 성호르몬에 의한 생리학적 성전환과 자성발생 2배체어를 유도하였다. 생리학적으로 성전환된 수컷을 만들기 위하여 부화 후 첫 먹이를 먹는 시기에 웅성호르몬인 17 alpha-methyltestosterone (MT) 5 mg을 사료에 흡착시켜 사육수온 $13^{\circ}C$에서 적산수온 $800^{\circ}C$까지 처리한 결과 96.7%의 수컷 유도율을 보였다. 또한 정상 수컷 정액을 이용하여 수정 10분 후 $28^{\circ}C$에서 20분간 고온 처리하여 61.7%의 자성발생 2배체가 유도되었다.