Kim, Kye-seong;Roh, Sang-ho;Lee, Kang-nam;Lee, Byeong-chun;Hwang, Woo-suk
Korean Journal of Veterinary Research
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v.37
no.4
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pp.925-934
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1997
This study was directed at inducing the production of antibodies by immunizing heifers with bovine sperm antigen and on measuring the serum antibodies using indirect immunofluorescence assay(IFA) and agglutination test. The effect of antisperm antibodies on fertilizing capacity of bovine spermatozoa was evaluated. 1. Three heifers between 12- and 15- month old were immunized with bovine spermatozoa or phosphate-buffered saline. In heifers immunized with bovine spermatozoa serum IgG level was highest between 3 weeks and 5 weeks postimmunization detected by IFA. The antibody levels persisted through week 7 and slowly declined until week 20 and then antisperm antibodies were localized on spermatozoa. The fluorescent antisperm antibodies were detected at 2~20 weeks and at 6~9 weeks postinoculation on acrosome and tail, respectively. Among 21 sera from repeat breeder cows, only one cow has shown positive antisperm antibody response detected by IFA. 2. In spite of vital rate of bovine sperm after swim-up was not significantly affected by different concentration of antisperm antibodies in sera, the numbers of bovine sperm after swim-up were significantly reduced in proportion to the increased concentration of antibodies. Above 1/512 dilution of antibody neither influence on vital rate and numbers of bovine sperm nor sperm agglutination after swim-up. The study has also shown that the vital rate and number of sperm after swim-up and capacitation were also significantly reduced by the addition of antisperm antibodies. Although antisperm antibodies did not influence on the acrosome reaction rate of sperm during swim-up, did significantly reduce the sperm acrosome reaction rate after capacitation. The studies have resulted that the bovine antisperm antibodies can prevent the sperm motility by agglutination and block the capacitation and acrosome reaction of bovine sperm.
Korean red ginseng (KRG) is used worldwide as a popular traditional herbal medicine. KRG has shown beneficial effects on cardiovascular diseases, such as atherosclerosis, diabetes, and hypertension. Up-regulation of a cytoprotective protein, heme oxygenase (HO)-1, is considered to augment the cellular defense against various agents that may induce cytotoxic injury. In the present study, we demonstrate that KRG water extract induces HO-1 expression in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and possible involvement of the anti-oxidant transcription factor nuclear factor-eythroid 2-related factor 2 (Nrf2). KRG-induced HO-1 expression was examined by western blots, reverse transcriptase polymerase chain reaction and immunofluorescence staining. Specific silencing of Nrf2 genes with Nrf2-siRNA in HUVECs abolished HO-1 expression. In addition, the HO inhibitor zinc protoporphyrin blunted the preventive effect of KRG on $H_2O_2$-induced cell death, as demonstrated by terminal transferase dUTP nick end labeling assay. Taken together, these results suggest that KRG may exert a vasculoprotective effect through Nrf2-mediated HO-1 induction in human endothelial cell by inhibition of cell death.
Since 1993, the White Spot Syndrome Virus (WSSV) disease occurred in China among cultured shrimps resulting in mass mortality. Epizootiological surveys undertaken during the outbreak period of 1993-1994 indicated that all stages of Penaeus chinensis, P. japonicus and P. monodon were infected. Consequent to the transport of contaminated shrimp seedlings and seawater, the disease spread all over the farms of China. The disease was more rapidly transmitted at temperatures above $25^{\circ}C$. Challenge experiments showed the causative agent was highly virulent. White spots appeared on the carapace of both span-taneous and experimentally infected shrimps. Moribund shrimps contained turbid hemolymph, hypertrophied Iymphoid organ and a necrotic mid-gut gland. Electron microscopy showed the presence of viral particles in the gills, stomach, lymphoid organ, and epidermal tissue of the infected shrimp. The visions were slightly ovoid with an envelope and averaged 350 $\times$ 150 nm; nucleocapsids measured 375 $\times$ 157 nm. With discontinuous sucrose gradient of 35, 50 and 60% (w/v), the virus was separated from hemolymph of the infected shrimp. The estimated molecular weight of genomic DNA was 237 Kb with EcoR I, 247 Kb with Hind III and 241kb with Pst I. A total of 9 hybridoma colones secreting monoclonal antibodies (MAbs) were produced from mouse myeloma and spleen cells immunized with WSSV. The immunofluorescence assay of gill tissue showed that the MAbs reacted with diseased but not with healthy shrimp. The MAbs belonged to IgGl, IgG2b subclass and IgM class, all with kappa light Immune-electron-microscopy with colloidal gold marker showed the presence of 5 MAbs epitopes on the envelope and one on the capsid of the virus. Baculoviral mid-gut gland necrosis showed the specificity of the MAbs produced. For diagnosis 5 different methods were selected. Using Kimura primers for PCR, or MAbs for immunoblot, ELISA or FAT method, in situ hybridization was carried out to show the gene. All these methods detected WSSV in the organ samples of the diseased shrimp but not in healthy one.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Non-small cell lung cancer is mostly recognized among other types of lung cancer with a poor prognosis by cause of chemotherapeutic resistance and increased metastasis. Luteolin has been found to decrease cell metastasis. However, its underlying mechanisms remain unresolved. The objective of this study was to examine the effect (and its mechanism) of luteolin on the migration and invasion of human non-small cell lung cancer A549 cells. MATERIALS/METHODS: Cell viability was investigated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Wound healing and transwell assays were evaluated to assess migration and invasion, respectively. Western blot analysis and immunofluorescence were further performed to investigate the role of luteolin and its mechanisms of action. RESULTS: Administration with up to 40 μM luteolin showed no cytotoxic activity on lung cancer A549 cells or non-cancer MRC-5 cells. Additionally, luteolin at 20-40 μM significantly suppressed A549 cells' migration, invasion, and the formation of filopodia in a concentration-dependent manner at 24 h. This is similar with western blot analysis, which revealed diminished the phosphorylated focal adhesion kinase (pFAK), phosphorylated non-receptor tyrosine kinase (pSrc), Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1 (Rac1), cell division control protein 42 (Cdc42), and Ras homolog gene family member A (RhoA) expression levels. CONCLUSIONS: Overall, our data indicate that luteolin plays a role in controlling lung cancer cells' migration and invasion via Src/FAK and its downstream Rac1, Cdc42, and RhoA pathways. Luteolin might be considered a promising candidate for suppressing invasion and metastasis of lung cancer cells.
Kim, Ju Gyeong;Kim, Min Jeong;Lee, Ji Su;Sydara, Kongmany;Lee, Sangwoo;Byun, Sanguine;Jung, Sung Keun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.6
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pp.822-829
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2020
Nutraceutical treatments can reduce inflammation and prevent the development of inflammatory diseases. In this study, the anti-inflammatory effects of Smilax guianensis Vitman extract (SGE) were examined. SGE suppressed lipopolysaccharide (LPS)-mediated nitrite production in RAW 264.7 cells. SGE also prevented the LPS-induced expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) but not cyclooxygenase (COX)-2. Western blot analysis showed that SGE attenuated LPS-induced phosphorylation of IκB kinase (IKK), inhibitor of kappa B (IκB), and p65. Additionally, SGE inhibited LPS-induced IκB degradation in RAW 264.7 cells. Western blot analysis of the cytosolic and nuclear fractions, as well as immunofluorescence assay results, revealed that SGE suppressed LPS-induced p65 nuclear translocation in RAW 264.7 cells. Moreover, SGE reduced LPS-induced interleukin (IL)-1β, IL-6, and tumor necrosis factor-α (TNF-α) mRNA expression and IL-1β and IL-6 protein expression in RAW 264.7 cells. Collectively, these results indicate that SGE suppresses the NF-κB signaling pathway and thereby inhibits the production of NO, IL-1β, and IL-6.
Purpose: To investigate the anticancer effects and underlying mechanisms of parthenolide on HepG2 human hepatocellular carcinoma cells. Materials and Methods: Cell viability was assessed by MTT assay and cell apoptosis through DAPI, TUNEL staining and Western blotting. Monodansylcadaverin(MDC) and AO staining were used to detect cell autophagy. Cell proliferation was assessed by Ki67 immunofluorescence staining. Results: Parthenolide induced growth inhibition in HepG2 cells. DAPI and TUNEL staining showed that parthenolide could increase the number of apoptotic nuclei, while reducing the expression of the anti-apoptotic protein Bcl-2 and elevating the expression of related proteins, like p53, Bax, cleaved caspase9 and cleaved caspase3. Parthenolide could induce autophagy in HepG2 cells and inhibited the expression of proliferation-related gene, Ki-67. Conclusions: Parthenolide can exert anti-cancer effects by inducing cell apoptosis, activating autophagy and inhibiting cell proliferation.
Nasr, Mohamed Y;Deeb, Ammar S Ali;Badra, Gamal;Sayed, Ibrahim H El
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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v.17
no.11
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pp.4977-4982
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2016
Introduction: Elevated serum interleukin (IL) 6 has been reported in patients infected with the hepatitis C virus (HCV), but it remains debatable whether this influences the production of autoantibodies and the biochemical profile of HCV disease. Therefore, this current study was conducted to evaluate the relationship between IL-6 and circulating autoantibody levels in HCV positive patients. Methods: Levels of IL-6 in serum samples from 102 patients with HCV and 103 normal controls were determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Autoantibodies were detected by immunofluorescence. Results: Levels of IL-6 were significantly higher (p=0.028) in patients infected with (HCV) compared with normal group. Autoantibodies were noted in in 43.1% of the patients; of these, 23.5% featured anti-nuclear antibodies (ANA+), 16.7% anti-smooth muscle antibodies (ASMA+), 7.8% anti-mitochondrial antibodies (AMA+), 17.6% anti-parietal cell antibodies (APCA+), 7.8% anti canalicular antibodies, and 2.9% anti reticulin antibodies (ARA+). No patients were found to be positive for anti-brush border antibodies (ABBA) or anti-ribosomal antibodies. (ARiA). No links with IL-6 levels were apparent. Conclusions: IL-6 levels are increased in patients infected with HCV disease and could influence the production of autoantibodies. However, this study did not provide evidence of a specific relationship between IL6 and circulating autoantibodies in such cases.
Cheon, Yoon-Hee;Kim, Min Seob;Kim, Ju-Young;Kim, Dong Hyun;Han, Seung Yoon;Lee, Jae-Hoon
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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v.24
no.2
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pp.157-163
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2020
Chronic inflammatory airway diseases, such as chronic rhinosinusitis, chronic obstructive pulmonary disease, and asthma, are associated with excessive mucus production. Hence, the regulation of mucus production is important for the treatment of upper and lower airway diseases. Eupatilin is a pharmacologically active ingredient obtained from Artemisia asiatica Nakai (Asteraceae) and exerts potent anti-inflammatory, anti-allergic, and anti-tumor activities. In the present study, we investigated the effect of eupatilin on phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-induced MUC5AC and MUC5B expression in human airway epithelial cells. We found that eupatilin treatment significantly inhibited PMA-induced mucus secretion in PAS staining. In addition, qRT-PCR results showed that eupatilin dose-dependently decreased the mRNA expression of MUC5AC in human airway epithelial cells. Western blot and immunofluorescence assay also showed that PMA-induced protein expression of MUC5AC was inhibited by eupatilin treatment. Finally, we investigated MAPKs activity after stimulation with PMA using western blot analysis in human airway epithelial cells. The results showed that eupatilin downregulated the levels of phosphorylated p38, ERK, and JNK. In summary, the anti-inflammatory activities of eupatilin, characterized as the suppression of MUC5AC expression and secretion in human airway epithelial cells, were found to be associated with the inhibition of p38/ERK/JNK MAPKs signaling pathway of MUC5AC secretion.
Kim, Jeong-Hwan;Oh, Chang-Taek;Kwon, Tae-Rin;Kim, Jong Hwan;Bak, Dong-Ho;Kim, Hyuk;Park, Won-Seok;Kim, Beom Joon
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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v.24
no.2
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pp.149-156
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2020
Sodium 2-mercaptoethanesulfonate (mesna) is a protective agent that is widely used in medicine because of its antioxidant effects. Recently, reactive oxygen species (ROS) were shown to increase pigmentation. Thus, ROS scavengers and inhibitors of ROS production may suppress melanogenesis. Forkhead box-O3a (FoxO3a) is an antimelanogenic factor that mediates ROS-induced skin pigmentation. In this study, we aimed to investigate the whitening effect of mesna and the signaling mechanism mediating this effect. Human melanoma (MNT-1) cells were used in this study. mRNA and protein expression were measured by real-time quantitative PCR and Western blotting analysis to track changes in FoxO3a-related signals induced by mesna. An immunofluorescence assay was performed to determine the nuclear translocation of FoxO3a. When MNT-1 melanoma cells were treated with mesna, melanin production and secretion decreased. These effects were accompanied by increases in FoxO3a activation and nuclear translocation, resulting in downregulation of four master genes of melanogenesis: MITF, TYR, TRP1, and TRP2. We found that mesna, an antioxidant and radical scavenger, suppresses melanin production and may therefore be a useful agent for the clinical treatment of hyperpigmentation disorders.
Sixteen Korean field transmissible gastroenteritis viruses (TGEVs) were isolated using swine testicular cell (STC) and the genomic diversity of them was analyzed. All TGEV isolates produced a typical cytopathic effect in STC and were confirmed as TGEV by immunofluorescence assay using monoclonal antibody against TGEV and PCR using TGEV specific primers. RNAs from TGEV field isolates and vaccine TGEV were extracted and amplified by RT and PCR. The RT-PCR products were digested with selected restriction enzymes and analyzed RFLP patterns. The N-terminal end region of S gene and ORF 3 and 3-1 genes of TGEV amplified by TGEV specific primer pairs seemed to be conserved. Most specific variations were detected in S gene amplified by TGEV 4/6 primer pairs which includes antigenic sites A and D. When the PCR products were treated with Sau3AI and Ssp I, Bvac(vaccine strain), field isolates 133 and 347 were differentiated from Miller and Purdue types. In the case of D5 field isolates, it was classified into Purdue type by Sau 3AI but classified into independent TGEV by Ssp I. Two different TGEV strains from D2 sample were confirmed by plaque purification and RT-PCR-RFLP analysis. To investigate the change occurring in TGEV genome after serial passage, the TGEV P44 strain was passaged through STC. There were specific changes in S gene and a large deletion was observed in ORF 3 and 3-1 genes. These studies showed that a distinct difference in genome exists among TGEV field isolates.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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