The aim of this work was to investigate the synergically bactericidal effects and cellular responses of tea polyphenols (TPP) and imipenem on imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa. Imipenem-resistant Ps. aeruginosa was isolated from patient in hospital. The bactericidal effects of TPP and imipenem were evaluated on the basis of its minimum inhibitory concentrations (MIC). The combined use of TPP and imipenem resulted in 16-fold and 8-fold reductions in the MICs of imipenem for the imipenem-susceptible and imipenem-resistant Ps. aeruginosa, respectively. The bactericidal effects of the imipenem and TPP against the Ps. aeruginosa was evaluated using the time-kill assay. The synergetic effects of the combinations of TPP and imipenem against Ps. aeruginosa were confirmed. Western blot using anti-DnaK and anti-GroEL monoclonal antibodies was performed to investigate the expression of stress shock proteins (SSPs) in imipenem-susceptible and imipenem-resistant strains exposed to TPP. The amount of SSPs were induced as the exposure time increased and decreased. The molecular weights of DnaK and GroEL were 70 kDa and 60 kDa, respectively. SDS-PAGE with silver staining revealed that the amount of lipopolysaccharides (LPS) increased or decreased in the strain treated to different concentrations and exposing periods of TPP. Scanning electron microscopic analysis demonstrated the presence of umblicated and wrinkled surfaces for cells treated with TPP or imipenem.
Four imipenem-resistant bacteria were isolated from the clinical specimens of a patient with pneumonia. To identify the isolates, we used the GN card of Vitek II system and performed a phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequence. The isolates were identified as P. aeruginosa (2 strains), P. monteilii (1 strain), and P. putida (1 strain), and were tested for antibiotic resistance after determining the MIC of imipenem to be $${\geq_-}8{\mu}g/mL$$ using the AST-N225 card of Vitek II system. The imipenem-resistant genotypes were determined using PCR products amplified using specific ${\beta}-Lactamase$ gene primers. The MBL gene was identified in all four isolates. One strain of P. aeruginosa exhibited the VIM and SHV-1 type genes, while the other strain exhibited both VIM and OXA group II genes. According to the antimicrobial susceptibility test, the bacteria were more susceptible to amikacin than other antibiotics. DNA fingerprint analysis using ERIC-PCR to analyze the epidemiological relationship between strains estimated that both the P. aeruginosa isolates were similar, but exhibited different DNA band types. It is uncommon to find four strains of imipenem-resistant bacteria with different DNA band types in a single patient.
The in vitro antibacterial activities of new carbapenem. CRB 529, 535, 538, 545 and 550 with meropenem and imipenem were compared. CRB 529. 535, 538, 545 and 550 proved to have a broad an tibacterial spectrum. Its in vitro activity against standard 20 strains was almost the same as that of imipenem and slightly higher than that of meropenem. However. against clinical isolated P. aeruginosa, CRB 529, 535, 538, 545 and 550 showed significantly higher activity than imipenem, and also CRB 529, 535, 538, 545 and 550 showed almost the same activity than imipenem and meropenem against 82 clinical isolated strains including S. aureus (MRSA), S. aureus (MSSA), E. faecalis, E. facium, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumonia, P. mirabiris, P. stuartii, M. morganii, C. freundii, E. cloacae, S. marcescens and A. calcoaceticus var. anitratus. The stability of CRB 529, 535, 538, 545 and 550 against porcine renal dehydropeptidase-I(DHP-1) was 10 folds higher than that of imipenem and was 3 folds higher than that of meropenem.
Kim, Jong-Myeung;Oh, Se-Woong;Ha, Jong-Ryul;Kim, Hong-Gi;Lee, Jin-Man;Lee, Sang-Han;Kim, Byoung-Oh;Kim, Jong-Guk
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.34
no.4
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pp.352-356
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2006
CW-270031, an injectable carbapenem, is a novel synthesized pyrrolidinyl-thio carbapenems. It was evaluated for its in vitro antibacterial activities in comparison with those of imipenem and meropenem against standard strains and clinical isolated strains, CW-270031 was more active than imipenem against gram-negative (E. coli and Klebsiella oxytoca) clinical isolates, but it was slightly active than meropenem. Against Klebsiella aeruginosa CW-118 MIC were 0.048 $\mu$g/ml for CW-270031, 0.19 $\mu$g/ml for imipenem. Against clinical E. coli MIC range were 0.012$\sim$0.195 $\mu$g/ml for CW-270031, 0.097$\sim$0.39 $\mu$g/ml for imipenem. Against clinical Klebsiella oxytoca MIC$_{50}$ were 0.09 $\mu$g/ml for CW-270031, 0.39 $\mu$g/ml for imipenem. Against gram-positive standard strains and clinical CW-270031 was slightly more activity than meropenem, but CW-270033 was less active than imipenem against these tested isolates. The subcutaneous injection of CW-270031 in mice revealed that the half-life of CW-270031 in serum was about 13 min, long than that of meropenem (10.6 min). CW-270031. was stable to hydrolysis by dog renal dehydropeptidase I (DHP-l) enzyme, to an more stabilities shown by meropenem.
Pseudomonas aeruginosa is an aerobic, Gram-negative, glucose-nonfermenting bacterium, which has emerged as a serious opportunistic pathogen. Recently, outbreaks of carbapenem resistant P. aeruginosa give rise to significant therapeutic challenges for treating nosocomial infections. The genes of metallo-${\beta}$-lactamase (MBL), a powerful carbapenemase, are carried as a part of the mobile gene cassettes inserted into integrons playing an important role in rapid dissemination of antibiotic resistance genes among bacterial isolates. In this study, we investigated the prevalence of integron in imipenem resistant P. aeruginosa isolates. A total of 61 consecutive, non-duplicate, and imipenem resistant P. aeruginosa strains were isolated from a university hospital in the Chungcheong province of Korea. We employed repetitive extragenic palindromic sequence-based PCR (rep-PCR) method for the selection of clonally different P. aerusinosa strains. PCR and DNA sequencing were conducted for the detection of integrons. Twenty-one clonally different P. aeruginosa strains were isolated. Only one (P28) of the strains harbored $bla_{VIM-2}$ that was found as gene cassettes in class 1 integrons. Four of 21 carbapenem resistant P. aeruginosa strains harbored class 1 integron containing aminoglycoside resistance determinant. All of the integrons detected in the study contained more than one resistance gene cassette, which can mediate resistance to multiple antibiotics. To prevent further spreading of the multi-drug resistant P. aeruginosa, conseguent monitoring and clinical polices are required.
Imipenem-resistant bacteria were isolated from clinical specimens taken from hospitalized patients in Suncheon, Korea. Fifty-four isolates were phylogenetically analyzed based on 16S rRNA gene and gyrB gene sequence comparisons. Isolates were affiliated with Pseudomonas aeruginosa (30 strains; 55.6%), Acinetobacter baumannii (21; 38.9%), Enterobacter hormaechei (2) and Pseudomonas putida (2). Twenty-two isolates produced metallo-$\beta$-lactamase (MBL); 12 Acinetobacter baumannii strains, 7 Pseudomonas aeruginosa strains, 2 P. putida strains and 1 Enterobacter hormaechei strain. Antibiotic susceptibility of the isolates was determined using the disc diffusion method and Vitek system. Strains producing metallo-$\beta$-lactamase (type IMP & VIM) were more resistant to antibiotics ceftazidime, aztreonam, amikacin and gentamicin than to strains producing OXA and SHV type of $\beta$-lactamase.
Carbapenem resistance, mediated by the major acquired metallo-β-lactamase (MBL) genes, has been increasingly reported, particularly for clinical isolates of Acinetobacter spp. Of the 191 nonduplicate clinical isolates of the carbapenem-nonsusceptible Acinetobacter spp. evaluated, 125 isolates (65.4%) were positive for the modified imipenem or meropenem-Hodge test, and 49 isolates (25.7%) were positive for the imipenem-EDTA+SMA double disk synergy test (DDS). PCR and sequencing of the blaVIM-2-allele and blaIMP-1-allele showed that 29 A. baumannii isolates and 1 A. calcoaceticus isolate had blaVIM-2, whereas 16 A. baumannii isolates and 2 A. calcoaceticus isolates had blaIMP-6; 1 isolate of the A. genomospecies 3 had blaVIM-2 and blaAIM-1. All the above MBL genes belong to class 1 integron. The size of class 1 integron encompassing blaVIM-2 or blaIMP-6 ranges from 2.8 kb to 3.2 kb in clinical isolates of A. baumannii, and 3.2 kb to 3.5 kb in clinical isolates of A. genomospecies 3. blaVIM-2 was most often located first or second in the class 1 integron, and these integrons often included aacA4. Due to dispersion of the MBL-producing Acinetobacter spp. as well as integron, which may encompass various resistance genes, there is an expectation for the increase of multidrug resistant Gram-negative bacteria, including resistance of carbapenems such as imipenem or meropenem. Hence, the development of new antimicrobial agents for treating severe Acinetobacter spp. infections is needed.
It has been shown that the butanol extract of Lonicera japonica has antimicrobial and other potentially useful biological activities. The purpose of this study was to determine the in vitro activity of Lonicera japonica compared to other antimicrobial agents against anaerobic bacteria. Specifically, the in vitro activity of the butanol extract was investigated against 104 clinical isolates of anaerobic bacteria using an agar dilution method and the results were compared to erythromycin, cefoxitin, imipenem, clindamycin, and metronidazole. It was found that Lonicera japonica and imipenem were the most active antimicrobial agents tested.
The susceptibilities of major enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains to antimicrobial agents and the cytotoxicity of these agents were examined using a total of 38 strains of E. coli O26, O111, and O157, which are the major serogroups of EHEC. Among the 38 strains, 35, 36, and 36 were susceptible to amikacin, imipenem, and norfloxacin, respectively. These antimicrobial agents were further examined to determine their cytotoxicity on Vero cells as well as their effect on the release of Shiga toxins along with trimethoprim/sulfamethoxazole. Each of the E. coli O26, O111, and O157 strains containing both the stx1 and stx2 genes were grown in the absence or presence of these agents at 1/4 minimal inhibitory concentration for 6 h, 12 h, and 18 h. At the concentrations used in this study, none of the agents significantly altered cell count compared with the control group. The level of cytotoxicity in the imipenem group was lower at 12 hand 18 h than their respective controls. In contrast, the level of cytotoxicity in cultures treated with trimethoprim/sulfamethoxazole, norfloxacin, and amikacin was increased. The strains were also examined for the release of Shiga toxins 1 and 2 following treatment with the agents, which were measured by the reversed passive latex agglutination (RPLA) method. The RPLA assay showed a suppression of release of Shiga toxin 2 in the strain cultures containing imipenem. These results indicate that imipenem may be a safe and effective agent for inhibition of these bacteria, which has clinical implications for the treatment of EHEC infections.
Pseudomonas aeruginosa are important nosocomial pathogens. Their resistance to carbapenem is increasing and causing concerns in Korea. An increasing prevalence of carbapenem resistance mediated by acquired carbapenemase is being reported. Over a 10 month-period from July 2007 to April 2008, 32 strains of imipenem-nonsusceptible P. auruginosa were isolated from Kangwon National University Hospital. To determine the prevalence and genotypes of the carbapenemase-producing clinical isolates, the antibiotic susceptibility was determined by Microscan Walkaway 96 SI System and the carbapenem activity was detected by the modified Hodge test and the imipenem-EDTA-SMA double-disk synergy test. The metallo-${\beta}$-lactamase gene and OXA-type ${\beta}$-lactamase gene reported in Korea were detected by PCR. As for the result of PCR, 30 isolates of P. aeruginosa were found to have $bla_{IMP-1}$-like and 1 isolate was found to have $bla_{IMP-1}$-like and $bla_{IMP-2}$. No clinical isolates were found to have $bla_{SIM-1}$, $bla_{OXA-23}$-like and $bla_{OXA-24}$-like. Random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR and dendrogram for genetical similarity to band patterns of each clinical isolates were examined. P. aeruginosa were grouped into 7 clusters of up to 50% of similarity index. In the P. aeruginosa group, PS3 was resistant to the most antibiotics, PS1 was susceptible to the most antibiotics. PS7 was resistant to aztreonam unlike other groups. This is the first report of prevalence of carbapenemase in Chuncheon.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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