The cDNA sequence of the Japanese flounder (Paralychthys olivaceus) IgD has been previously reported (GenBank accession no. AB052658) and this was followed by the detection of IgD mRNA expression in some flounder organ tissues. However, it has not been determined whether the flounder IgD gene is virtually expressed into IgD protein. To characterize the flounder immunoglobulins utilized in elucidating the mechanism, evolution and diversity of the flounder immune system, antibodies specific to IgD and IgM were necessary. In the present study, partial flounder recombinant IgD (rIgD), IgM (rIgM) and the conserved regions of IgD and IgM (rCIg) were produced by cloning the cDNA sequence using isotype specific primers which were designed to produce unique fragments of IgD and IgM specific amino acid sequences. The production of recombinant Igs was ascertained by SDS-gel electrophoresis and immunoblot analysis using anti-T7$\cdot}$Taq antibody. The produced recombinant Igs were purified using affinity columns, and used as immunogens. Antibodies specific to the isotype of flounder Igs were generated by immunizing rabbits with rfIgs and the antibodies produced were identified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblotting. Specificities of the generated antibodies were evaluated by testing cross-reactivity between recombinant IgM and IgD. By ELISA, rabbit antibodies against the rfIgD fragment (anti-rfIgD) failed to recognize any kind of flounder serum Igs, whereas respective antibodies against rfCIg (anti-rfCIg) and rfIgM fragments (anti-rfIgM) reacted with serum Igs. Likewise, in immunoblot assays, though anti-rfIgD did not, both anti-rfCIg and anti-rfIgM bound with the ~85 kd flounder IgM heavy chain. By flow cytometry analysis, anti-rfCIg, anti-rfIgD and anti-rfIgM reacted with 6%, 3% and 6.5% of cells, respectively, suggesting that flounder IgD is not secreted in serum but expressed on flounder B-like cell surfaces as in mammals. Antibodies produced against recombinant flounder Igs could be used to develop sandwich assay systems for detecting flounder Igs and for further investigating the flounder immune system.
Song Yong-Hoon;Lee Kyung-Yil;Kim Dong-Un;Koh Dae-Kyun;Lee Byung-Churl
Childhood Kidney Diseases
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v.9
no.2
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pp.143-148
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2005
Purpose : Hypogammaglobulinemia has been observed in nephrotic syndrome, but its pathophysiology remains unknown. We evaluated serum immunoglobulins, IgG subclasses, and vaccine-induced viral antibodies(anti-hepatitis B surface IgG and anti-measles IgG) in children with minimal change nephrotic syndrome(MCNS). Methods : Using the stored sera, the levels of immunoglobulin(IgC, IgM, IgA, and IgC) and IgG subclasses(IgG 1, 2, ,3, and 4), anti-HBs Ab and anti-measles IgG of 21 children with MCNS were analyzed and compared to those of 25 age-matched healthy children. Results : The mean values of IgG and IgG1 were $390{\pm}187\;mg/dL$ and $287{\pm}120\;mg/dL$ in nephrotic children, and $1,025{\pm}284\;mg/dL$ and $785{\pm}19\;mg/dL$ in control children, respectively. The values of the total IgG and the 4 IgG subclasses in nephrotic children were all significantly depressed(P<0.001), but the IgM($251{\pm}183\;mg/dL\;vs. 153{\pm}55\;mg/dL$, P=0.02) and IgE values(P=0.01) were elevated, and the IgA values were not changed. The seropositivity of anti-HBs IgG was 42.9$\%$(9 of 21 cases) in the MCNS group and 52$\%$(13/25) in the control group, and that of anti-measles IgG was 75$\%$(16/21) and 92$\%$(23/25), respectively, but there was no statistical difference between the two groups. Conclusion : IgG and IgG subclass levels in MCNS children are all depressed without significant seronegativity of the vaccine-induced viral antibodies. Further studies are needed to resolve the cause of hypogammaglobulinemia in MCNS. (J Korean Soc Pediatr Nephrol 2005;9:143-148)
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.32
no.8
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pp.1357-1363
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2003
This study was conducted to investigate the effect of chicken egg containing IgY against H. pylori in patients with gastritis. Sixty three H. pylori-infected volunteers (20∼43 year, Male Female=49 : 14) were randomized into four groups which were treated with one chicken egg containing IgY b.i.d. (IgY group; n=17) or omeprazole 20 mg b.i.d., amoxicillin 1.0 g b.i.d. and clarithromycin 500 mg b.i.d. (OAC group; n=17) or omeprazole 20 mg b.i.d., amoxicillin 1.0 g b.i.d., clarithromycin 500 mg b.i.d. and one chicken egg containing IgY b.i.d. (OAC with IgY group; n=16) for 2 weeks or lyophilized IgY 1 g b.i.d (lyophilized IgY group) for 1 month. $\Delta$$^{13}$$CO_2$ before and after treatment, the eradication rate of H. pylori and histologic change including H. pylori density, acute and chronic inflammation activity, intestinal metaplasia and glandular atrophy by updated sydney system were evaluated. Eradication rate of OAC with IgY group (94%) was higher than IgY group (0%), lyophilized IgY group (0%) and OAC group (88%). $\Delta$$^{13}$$CO_2$at 2 weeks after treatment in one patient of IgY group was decreased. But that was not changed in the other patients. $\Delta$$^{13}$$CO_2$ at 1 week after treatment in 15 patients of OAC with IgY group was significantly lower than pretreatment level (p<0.05), and $\Delta$$^{13}$$CO_2$ at 1 week and 2 week after treatment was decreased in the other patient. Acute inflammation activity at antrum was significantly decreased after treatment in IgY and lyophilized IgY group (p<0.01), H. pylori density at antrum was significantly decreased after treatment in IgY and lyophilized IgY group (p<0.05). Chronic inflammation activity at body was decreased after treatment in lyophilized IgY group. Intestinal metaplasia and glandular atrophy at antrum and body were not changed after treatment in IgY group. Mild intestinal metaplasia in one patient of lyophilized IgY group changed to normal after 1 month treatment. Gandular atrophy at antrum and body were not changed after treatment in lyophilized IgY group.
Background: Unusually high amounts of N region addition and CDR3 length diversity were found in immunoglobulin (Ig) light chain Vk and Jk joins in patients with rheumatoid arthritis (RA). We sought to determine whether this finding is due to excessive activity of the enzyme responsible for N region addition (terminal deoxynucleotidyl transferase [TdT]) in B lineage cells in bone marrow or from positive antigenic selection of B cells with long CDR3 lengths. Methods: We used FACS to isolate $IgM^+/IgD^+$ B cells (predominantly naive) and $IgM^-/IgD^-$ B cells (predominantly class-switched) B cells from peripheral blood of a patient with RA known to have enrichment for long Vk CDR3s and from that of two normal controls. RT-PCR of VkIII transcripts was performed, followed by sequencing of individual cDNA clones. We analyzed the CDR3 lengths and N region additions in 97 clones. Results: There was enrichment for long CDR3 lengths (11 or 12 amino acids) in both $IgM^+/IgD^+$ and $IgM^-/IgD^-$ B cells in RA compared to B cell subsets in the normal controls. The $IgM^+/IgD^+$ B cell subset in RA was markedly enriched for N region addition and was similar to that seen in the $IgM^-/IgD^-$ subset. Conclusion: These data suggest that enrichment for N region addition and long CDR3 lengths in RA may result from unusually high or prolonged activity of TdT in bone marrow.
Aim: To identify new biomarkers for NPC diagnosis with an anti-EBV Western blot test kit. Methods: Serum samples from 64 NPC patients and healthy subjects with four specific VCA-IgA/EA-IgA profiles were tested with an anti-EBV Western blot test kit from EUROIMMUN AG. Proteins were quantified with scores of intensity visually assigned to the protein bands. The markers which showed statistical differences between the NPC and non-NPC subjects were further evaluated in another 32 NPC patients and 32 controls in comparison with established biomarkers including VCA-IgA, EA-IgA, EBV-related protein IgG, and EBV DNA. Results: Among the markers screened, EA-D p45-IgG showed a statistically significant difference (p < 0.05) between NPC and non-NPC subjects with VCA-IgA positivy. In 32 VCA-IgA positive NPC patients and 32 control subjects, the diagnostic accuracy of EA-D p45-IgG was 78.1% with a positive predictive value of 77.8% and a negative predictive value of 78.6%. In the verification experiment, the specificity and sensitivity of EA-D p45-IgG were 75.0% and 90.6 %, respectively. Conclusions: EA-D p45-IgG might be a potential biomarker for NPC diagnosis, especially among VCA-IgA positive subjects.
Moon, H.K.;Hanz, In K.;Gentry, J.L.;Parmentier, H.K.;Schrama, J.W.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.12
no.2
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pp.180-185
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1999
Effects of host immunization on bacterial translocation and growth performance in weanling piglets were studied. Twenty four barrows were assigned to one of two immunization treatments: Control group (CON: immunized with placebo) or Immunization group [IMMU: immunized with Antigen cocktail; Keyhole limpet hemocyanin (KLH), Ovalbumin (OA), and Tetanus toxoid (TT)]. On d0, piglets were weaned and intramuscularly immunized with 2 ml of placebo or Antigen cocktail, respectively. Antigen-specific Ig titers were determined by ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay). Ig titers to E. coli-derived lipopolysaccharides (LPS) were measured as the indicator of bacterial translocation. Ig titers to LPS were higher (p<0.10, 0.05 or 0.01) in CON group before immunization (d0), but the difference disappeared with time and IgA titers to LPS became higher (p<0.05) in IMMU group on d39. In IMMU group, IgG titers to LPS from d28 onwards showed positive correlations (p<0.10, 0.05, 0.01 or 0.001) with IgG titers to KLH from d11 onwards and with IgM titers to KLH from d7 onwards. Generally, growth performance was negatively related to IgG titers to LPS. Average daily gain for d28 to d35 showed negative correlations (p<0.10, 0.05, or 0.01) with IgG titers to LPS on d28 onwards in immunization group. These results reveal some evidences that host immunization might facilitate bacterial translocation and high humoral immune responses to LPS are negatively related with the growth performance.
Carrageenan (CGN) has been used as a safe food additive for several decades. CGN has also been widely used to induce inflammation in various animal models. Likewise, degraded CGN (dCGN), which is produced by subjecting CGN to acid hydrolysis, also induces inflammation and does so more effectively than CGN. One of the most important characteristics of an immunological adjuvant is its ability to activate innate immunity. The immune-adjuvant effects of CGN and dCGN have not yet been studied in detail. The purpose of this study was to evaluate the immunological adjuvant activities of both CGN and dCGN, which was done by comparing the levels of an ovalbumin (OVA)-specific antibody after treatment with OVA in the absence or presence of CGN or dCGN in plasma from immunized mice. CGN and dCGN showed similar levels of adjuvant activity, as evidenced by increased antibody titer. Specifically, both CGN and dCGN significantly increased the levels of OVA-specific IgG, IgG1, and IgG2a antibodies in the plasma as compared with OVA alone (the control). However, compared to the positive control (Freund's adjuvant), both CGN and dCGN caused greater increases in IgG1 than in IgG2a. These results suggest that CGN and dCGN have similar adjuvant activities and produce more IgG1 antibodies than IgG2a.
Kim, Do-Hee;Lee, Seung-Woo;Lee, Kyung-Yil;Youn, You-Sook;Hwang, Ja-Young;Rhim, Jung-Woo;Koh, Dae-Kyun;Lee, Jun-Sung
Childhood Kidney Diseases
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v.13
no.2
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pp.138-145
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2009
Purpose : This study was aimed to evaluate the changes of immunologic parameters during hospitalization, and the relationship between IgG and other laboratory or clinical indices in patients with acute poststreptococcal glomerulonephritis (APSGN). Methods : We reviewed the medical charts of 36 children with APSGN who showed ASO titer>250 Todd U/L and C3<70 mg/dL. We evaluated the levels of IgG and other laboratory parameters including C3 and ASO at admission and at discharge (14 cases). Results : The mean age of APSGN patients was $7.5{\pm}2.6$ year of age, and male-to-female ratio was 2.3:1. At presentation, hypertension (systolic blood pressure>125 mmHg), gross hematuria, and weight gain were observed in 27.8% (10/36), 80.1% (29/36), and 80% (24/30) of the patients, respectively. The mean IgG level was $1,432{\pm}322$ mg/dL ($1,025{\pm}234$ mg/dL in control group, P<0.001), and C3 and ASO levels were $26.1{\pm}16.1$ mg/dL and $1,068{\pm}730$ Todd U, respectively. There were no correlation between IgG level and the levels of any of the parameters analyzed (ASO, C3, BUN, creatinine and white blood cell count), and the severity of the disease assessed by the weight-change during admission. The patients aged<6 years of age (10 cases) had less degree of the weight-change, compared to those of the patients aged>8 years of age (15 cases) (-0.6% vs. -5.7%, P=0.01). The IgG and ASO levels did not change, but C3 (P=0.001) and IgM (P=0.02) levels increased during admission. Conclusion : Increased IgG and ASO levels in APSGN did not change, but C3 level increased during admission. IgG level was not correlated with other laboratory parameters (ASO and C3) and the severity of the disease. Younger children seem to have less severe clinical course compare to older children. With our hypothetic pathogenesis of APSGN, further studies are needed to resolve the pathogenesis of the disease including the increase of IgG.
Purpose : Hypogammaglobulinemia has been observed in nephrotic syndrome, but its pathophysiology remains unknown. We evaluated the relationship between the serum IgG and at bumin levels for children with minimal change nephrotic syndrome(MCNS). Methods : The levels of immunoglobulin G(IgG), albumin and total cholesterol of a total of 46 children with MCNS(proteinuria $>40mg/m^2/h$, and serum albumin level <2.5g/dL were analyzed. Results : The mean values of albumin, IgG and total cholesterol in MCNS children were $1.7{\pm}0.3g/dL,\;368{\pm}143mg/dL\;and\;431{\pm}78mg/dL$, respectively. There was an inverse correlation between the albumin values and the total cholesterol values(r=0.68, P=0.0001), whereas there was a direct-proportional correlation between albumin values and the IgG values(r=0.4, P=0.01). Conclusion : The IgG level is associated with albumin level, and it may reflect the severity of urinary protein loss in MCNS. Further studies are needed to evaluate this phenomenon.
The random V(D)J recombination process ensures the diversity of the primary immunoglobulin (Ig) repertoire. In two thirds of cases, imprecise recombination between variable (V), diversity (D), and joining (J) segments induces a frameshift in the open reading frame that leads to the appearance of premature termination codons (PTCs). Thus, many B lineage cells harbour biallelic V(D)J-rearrangements of Ig heavy or light chain genes, with a productively-recombined allele encoding the functional Ig chain and a nonproductive allele potentially encoding truncated Ig polypeptides. Since the pattern of Ig gene expression is mostly biallelic, transcription initiated from nonproductive Ig alleles generates considerable amounts of primary transcripts with out-of-frame V(D)J junctions. How RNA surveillance pathways cooperate to control the noise from nonproductive Ig genes will be discussed in this review, focusing on the benefits of nonsense- mediated mRNA decay (NMD) activation during B-cell development and detrimental effects of nonsense-associated altered splicing (NAS) in terminally differentiated plasma cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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