• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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• pp.316.2-317
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• 2003

Immunoglobulin Y (IgY) obtained from chicken as the immunization host brings several advantages to antibody production, such as improved yield, lower cost, longer stability, and higher specificity than mammalian immunoglobulin. In the present study, we attempted to purify Maackia fauriei lectin using antilectin IgY-affinity chromatography in order to produce a good yield and to reduce the purification time. (omitted)

• 미생물학회지
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• 제42권4호
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• pp.294-298
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• 2006

Streptomyces somaliensis가 생산하는 phospholipase D (PLD)를 정제하기 위하여 펩티드 항체 결합 면역 친화 크로마토그래피용 칼럼을 개발하였다. 단백질 구조 예측 프로그램과 Streptomyces PLD X-선 결정구조를 참조하여, S. somaliensis PLD의 1차 구조로부터 항원특성이 높고. 표면에 위치하는 것으로 예상된 5종류의 펩티드들을 epitope로 선정한 뒤, 이에 대한 항체로 면역친화 크로마토그래피용 칼럼을 제작하였다. 배양 농축액을 칼럼에 통과시켜 정제한 활성 분획을 SDS-PAGE 및 Western blot 결과, 칼럼 종류에 따라 순수한 PLD또는 35 kDa의 단백질 불순물만을 포함하는 PLD 정제 분획을 보여 면역친화 칼럼의 높은 항원결합 특이성을 보여주었다. 그러나 수용액상에서 PLD 자체의 구조적 불안정성 때문에 정제 후 PLD의 특이적 활성 및 정제 수율은 낮았다.

• 한국식품조리과학회지
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• 제18권1호
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• pp.94-100
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• 2002

The dietary carbohydrates are mainly digested and adsorbed at small intestine. We developed a new food additive as an egg yolk antibody(1gY) against maltase, sucrase and sodium dependent g1ucose cotransporter(SGLT) for the regulation of blood glucose level and weight control. The maltase, sucrase and SGLT were purified from porcine small intestine which is very similar to that of human in physiological characteristics. The purification step contained an ultracentrifugation, ion exchange chromatography and hydrophobic chromatography. The hens were immunized by purified protein and the IgY activities against immunized antigens were determined. This antibody obtained from the immunized hen's egg yolks directly inhibited the activities of maltase and sucrase in vitro. And the IgY delayed and decreased the increment of blood g1ucose level after administration of maltose, sucrose and glucose in rat about 30 to 60%. The results of this study suggest that the IgY inhibiting the carbohydrate digestion could be used as functional food materials for weight control and regulation of blood glucose level in diabetes.

• 생명과학회지
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• 제13권1호
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• pp.67-72
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• 2003

위염, 위궤양 및 위암의 원인 균인 Helicobacter pylori 가균체 표면에 다량 함유하며 주된 생존 인자이며 병원성 인자인 urease를 대장균에서 발현시키고 이 효소에 대한 항체 또는 기질과의 특이 상호 작용을 이용하여 두 단계의 간편한 방법에 의하여 정제하였다. 우선 anti-H. pylori Urease IgG-Sepharose column과 urea-Sepharose column을 각각 제조하고 DEAE-Sepharose 음이온 교환수지를 통하여 1차 정제한 시료를 각각 적용하고 제반 조건에서 용출시켰다. Anti-H. pylori urease IgG-Sepharose column의 경우에는 urease 시료가 너무 강력하게 결합함으로써 극단적인 pH조건에서만 용출이 가능함이 관찰되었으므로, 100 mM 탄산 완충액(pH 10.5)으로 최종 용출하였을 때 비교적 순수한 효소를 얻었으나, 비활성이 다소 감소된 것으로 나타났다. 한편, urea-Sepharose에 적용시킨 시료는 100 mM urea-HEB 완충액(pH 7.5)으로 비교적 용이하게 용출되어 비교적 높은 순도와 비활성의 urease 효소를 얻을 수 있었으나 이 경우에는 urease의 smaller subunit인 UreA peptide band의 강도가 다소 감소한 것이 관찰되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권1호
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• pp.9-18
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• 1996

Streptococcus mutans has been implicated as primary causative agents of dental caries by insoluble glucan (IG) in human and experimental animals. An attempt was made to search for the ${\alpha}$-1,3 glucanase that degrades IG produced by S. mutans. ${\alpha}$-1,3 glucanase was detected in the culture supernatant of microorganisms, which are isolated from soils on agar medium containing IG as a sole carbon source. This Streptomyces sp. hydrolysed IG produced by immobilized S. mutans and was named as Y9373. This enzyme required ${\alpha}$-1,3 glucan (IG) as an inducer. The optimum conditions for enzyme production were studied. The enzyme was purified by 30~70% $(NH_4)_2SO_4$ precipitation, anion exchange chroma tography on DEAE-cellulose and gel filtration on Sepadex G-75. The purified enzyme has a specific activity of 7840.0 U/mg protein giving 32.1-fold purification and final yield of 0.53%. The molecular weight was estimated to be about 22.5 kDa by SDS-PAGE. The optimum pH and temperature for enzyme reaction were 6.5 and 37$^{\circ}C$, respectively and the enzyme was relatively stable at the temperature below 60$^{\circ}C$. The activity of purified enzyme was enhanced by adding $Co^{2+},\;Mn^{2+}\;and\;Mg^{2+}$ into the medium, whereas inhibited by adding $Hg^{2+},\;Zn^{2+}$ and SDS. The $K_m\;and\;V_{max}$ value of ${\alpha}$-1,3 glucanase for IG were estimated to be 2.50 mM and 0.0431 mM/min, respectively. The thin layer chromatographic analysis of hydrolysates from IG with ${\alpha}$-1,3 glucanase showed that glucose was the main product of reaction. This enzyme activity was about 14 times higher than marketing dextranase as preventive agent against artificial dental caries by S. mutans in TH medium including 5% sucrose after 30 minutes.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제45권4호
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• pp.287-293
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• 2007

The identification and characterization of antigens that elicit human T cell responses is an important step toward understanding of Leishmania major infection and ultimately in the development of a vaccine. Micropreparative SDS-PAGE followed by electro transfer to a PVDF membrane and elution of proteins from the PVDF, was used to separate 2 novel proteins from L. major promastigotes, which can induce antibodies of the IgG2a isotype in mice and also are recognized by antisera of recovered human cutaneous leishmaniasis subjects. Fractionation of the crude extract of L. major revealed that all detectable proteins of interest were present within the soluble Leishmania antigens (SLA). Quantitation of these proteins showed that their expression in promastigotes is relatively very low. Considering the molecular weight, immunoreactivity, chromatographic and electrophoretic behavior in reducing and non-reducing conditions, these proteins are probably 2 isoforms of a single protein. A digest of these proteins was resolved on Tricine-SDS-PAGE and immunoreactive fragments were identified by human sera. Two immunoreactive fragments (36.4 and 34.8 kDa) were only generated by endoproteinase Glu-C treatment. These immunoreactive fragments or their parent molecules may be ideal candidates for incorporation in a cocktail vaccine against cutaneous leishmaniasis.

• 한국해양바이오학회지
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• 제1권3호
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• pp.218-223
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• 2006

어류의 세균성질병 원인체인 Edwardsiella tarda 감염의 예방과 치료에 E. tarda로 면역한 계란으로부터 얻어진 난황항체 (IgY)의 잠정적인 사용을 평가하였다. PEG법으로 정제된 IgY는 64 kDa의 heavy chain과 27 kDa의 light chain을 가지고 있었다. IgY는 사료 공급 후 위의 pH가 3.4로 낮아지는 2시간째에는 대부분의 활성을 상실하였으나, 장내에서는 IgY의 활성이 나타났다. IgY의 효능 실험 결과 감염 초기에 IgY를 20 mg/fish로 공급한 그룹은 모든 실험에서 대조 그룹에 비해 높은 생존율을 나타내었으며, 장기 내에서 균의 감염 정도 역시 낮았다. 그러나 감염 후기에서는 생존율에 있어서의 유의적인 차이를 확인하기 힘들었다. 이는 넙치의 위에서 대부분의 IgY가 활성을 잃어 낮은 농도만이 장으로 이동하기 때문일 것으로 사료되며, 이 농도에서 IgY는 E. tarda에 대한 뚜렷한 예방이나 치료의 효과 보다는 감염시기를 어느 정도 연장시키는 역할을 하는 것으로 추정된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제29권1호
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• pp.1-8
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• 1991

스파르가눔 생리식염수 추출액 내에 포함되어 있는 성분단백질 중 스파르가눔증 환자 혈청내 특이 IgG항체와 민감하고 특이하게 반응하는 항원단벼질인 36, 29 kDa단백질을 단세포군 항체를 이용한 면역친화성 크로마토그 래피로 순수분리할 수 있음은 이미 보고하였다. 이 연구에서는 스파르가눔 추출액 내에 포함된 이 36, 29 kDa단백질이 젤라틴을 고리로 한 친화성 크로마토그래피로 훨씬 쉽게 순수분리할 수 있음을 증명하고자 하였다. 젤라틴을 고리로 부착시킨 Sepharose 4B column에 스파르가눔 추출액을 통과시키고 젤라틴에 부착한 단백질은 4 M urea/0.1M NaCl 용액을 분리완충액으로 분리하였다. 이렇게 분리한 단백질은 SDS-PAGE에서 36, 29 kDa band로 구성되어 있었고, SDS-PAGE/immunoblot 결과 환자의 polyclonal 항체는 이들 band에만 반응하였다. 스파르가눔증, 기타 기생충증 환자 및 건강대조군 혈청내 스파르가눔 특이항체가(IgG)를 면역효소측정 법으로 측정 한 결과 순수분리한 이 단백질은 특히 특이도가 95.8%로 생리식염수 추출액의 89%보다 우수하였고 민감도는 차이가 없었다. 이상의 결과는 젤라틴을 고리로 이용한 친화성 크로마토그래피는 스파르가눔 생리식염수 추출액 내의 36 및 29 kDa 단백질을 간편하게 순수분리할 수 있고 단백질의 항원성도 유지할 수 있음을 보이고 있었다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제45권3호
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• pp.491-498
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• 2003

본 연구는 우유로부터 OPN을 분리 정제하여 그 특성을 규명하기 위해서 수행되었다. 먼저 ion-exchange와 hydrophobic chromatography를 이용하여 우유로부터 OPN을 분리 정제하였다. OPN의 분자량은 SDS-전기영동 상에서 약 60,000dalton이었고, NH2-terminal amino acid sequence를 확인한 결과 Leu-Pro-Val-Lys-Pro- Thr-Ser 순이었다. OPN을 35주령된 SCWL를 이용하여 산란계를 면역 시키고, 형성된 anti- OPN IgY 항체를 분리․정제한 후 ELISA test로 항체가를 측정하였다. 또한 RID test을 이용하여 OPN 함량에 따른 정량곡선을 작성하고, 이 곡선에 의해 우유 중 OPN 함량을 정량하였다. 그 결과 원유, 탈지유, 시유에서 각각39.78, 31.74, 37.48${\mu}g$/$m\ell$을 함유하고 있는 것으로 나타났다. 또한 OPN의 Ca 가용화 능력을 검정한 결과 OPN이 CPP와 poly-glutamic acid 보다 더 우수한 것으로 나타났다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제52권2호
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• pp.137-142
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• 2014

Serologic tests are widely accepted for diagnosing Toxoplasma gondii but purification and standardization of antigen needs to be improved. Recently, surface tachyzoite and bradyzoite antigens have become more attractive for this purpose. In this study, diagnostic usefulness of 3 recombinant antigens (SAG1, SAG2, and SAG3) were evaluated, and their efficacy was compared with the available commercial ELISA. The recombinant plasmids were transformed to JM109 strain of Escherichia coli, and the recombinants were expressed and purified. Recombinant SAG1, SAG2, and SAG3 antigens were evaluated using different groups of sera in an ELISA system, and the results were compared to those of a commercial IgG and IgM ELISA kit. The sensitivity and specificity of recombinant surface antigens for detection of anti-Toxoplasma IgG in comparison with commercially available ELISA were as follows: SAG1 (93.6% and 92.9%), SAG2 (100.0% and 89.4%), and SAG3 (95.4% and 91.2%), respectively. A high degree of agreement (96.9%) was observed between recombinant SAG2 and commercial ELISA in terms of detecting IgG anti-Toxoplasma antibodies. P22 had the best performance in detecting anti-Toxoplasma IgM in comparison with the other 2 recombinant antigens. Recombinant SAG1, SAG2, and SAG3 could all be used for diagnosis of IgG-specific antibodies against T. gondii.