To construct the molecular systematics of the genus Megoura (Hemiptera: Aphididae), DNA based-identification was performed using four mitochondrial and three nuclear DNA regions: partial cytochrome c oxidase I (COI), partial tRNA-leucine + cytochrome c oxidase II (tRNA/COII), cytochrome b (CytB), partial 12S rRNA + tRNA-valine + 16S rRNA (12S/16S), elongation factor-1 alpha ($EF1{\alpha}$), and the internal transcribed spacers 1 and 2 (ITS1, ITS2). Pairwise sequence divergences between taxa were compared, and phylogenetic analyses were performed based on each DNA region separately, and the combined datasets. COI, CytB, $EF1{\alpha}$, ITS1, and ITS2 were relatively effective in determining species and resolving their relationships. By contrast, the sequences of tRNA/COII and 12S/16S were not able to separate the closely related species. CytB and $EF1{\alpha}$ gave better resolution with higher average sequence divergences (4.7% for CytB, 5.2% for $EF1{\alpha}$). The sequence divergence of COI (3.0%) was moderate, and those of the two ITS regions (1.8% for ITS1, 2.0% for ITS2) were very low. Phylogenetic trees were constructed by minimum evolution, maximum parsimony, maximum likelihood, and Bayesian phylogenetic analyses. The results indicated that the phylogenetic relationships between Megoura species were associated with their host preferences. Megoura brevipilosa and M. lespedezae living on Lespedeza were closely related, and M. nigra, monophagous on Vicia venosa, was rather different from M. crassicauda, M. litoralis, and M. viciae, which are oligophagous on Lathyrus and Vicia. The three populations of M. crassicauda formed a clade separated from M. litoralis and M. viciae. Nevertheless M. litoralis and M. viciae, which are morphologically similar, were not separated due to negligible sequence divergence. We discuss the phylogenetic relationships of the Megoura, and the usefulness of the seven DNA regions for determining the species level phylogeny of aphids.
To analyze nucleotide sequence encoding internal transcribed spacer (ITS) regions specific to the Laminariaceae family, genomic DNA was isolated from six brown algae species distributed along the east coast of Korea. These included three species from the Laminariaceae family (Agarum clathratum Dumortier, Costaria costata [C. Agardh] Saunders, and Saccharina japonica Areschoug) and two species from the Alariaceae family (Undaria pinnatifida [Harvey] Suringer and Ecklonia cava Kjellman), both in the order Laminariales, and one species from the family Sargassaceae in the order Fucales (Sargassum serratifolium). Based on a sequence analysis of ITS-1 and ITS-2 for A. clathratum, C. costata, and E. cava, oligonucleotides were designed from the regions that showed sequence conservation in Laminariaceae. Following polymerase chain reaction using three sets of primers, amplification of ITS-1 and ITS-2 was detected in reactions using genomic DNA isolated from the species belonging to Laminariaceae, but not from the species belonging to the other families. The results indicate that this method can be used for the detection and identification of Laminariaceae species.
본 연구에서 밝혀진 갓끈동부의 ITS1, 5.8S 및 ITS2의 염기서열은 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 GenBank에 Vigna sinensis AY195581로 등록하였다. ITS1, 5.8S 및 ITS2의 총 염기서열 507 염기서열을 이용한 Vigna sinensis (AY195581)의 분자계통분석에서 Vigna unguiculata 및 그 아종들과 98~100% 범위의 염기서열 상동성을 보였다. Vigna unguiculata는 계통분석에 이용된 다른 종들로부터 독립된 하나의 cluster로 그룹핑(grouping)이 됨을 확인하였다. 본 계통분석은 Vigna unguiculata가 Vigna 속의 다른 종에 비해 비교적 최근에 분화되었으며, 현재 유전적인 변화가 많이 일어나고 있음 보이고 있다. 또한, Vigna 속, Vigna longifolia, Vigna vexillata, Vigna membranacea, Vigna friesiorum, Vigna monophylla, Vigna schimperi, Vigna nigritia, Vigna lasiocarpa, Vigna trichocarpa, Vigna diffusa의 다른 종들과 비교하여 유전적으로 독립적인 종임을 확인하였다. 본 연구의 Vigna sinensis의 ITS1, 5.8S 및 ITS2를 이용한 계통분석은 Vigna sinensis를 Vigna unguiculata로 분류하는 것이 타당한 것으로 보여진다. 본 종은 국내에서 멸종된 것으로 알려져 있었으나 최근 토착 식물로써 발견되었고 이 갓끈동부의 관련 식물 종들과의 분자계통학적 위치를 명확히 밝힘에 의의가 있다고 하겠다.
Amylomyces rouxii is commonly found as amylolytic fungi in tapai fermentation. However, its diversity is rarely reported despite being often used for food production in Southeast Asia. This research aims to analyze the genetic diversity and the distribution pattern of A. rouxii from Ragi tapai in Java Island, Indonesia. We isolated the fungus from samples obtained from Ragi tapai producing centers in Bandung, Sumedang, Muntilan, Blora, Yogyakarta, and Bondowoso. The obtained isolates were molecularly identified based on the ribosomal regions ITS1/ITS2 and D1/D2, then analyzed for phylogenetic tree reconstruction, genetic distance, genetic variation, and haplotype networking. Six isolates showed specific morphological traits of A. rouxii. However, phylogenetic tree reconstruction on the ribosomal genes showed that the isolates were grouped into two different clades related to two species. Clade A included BDG, SMD, and MTL isolates related to A. rouxii, whereas clade B included YOG, BLR, and BDS isolates related to Mucor indicus. The genetic distances between clades for ITS1/ITS2 and D1/D2 were 0.6145 and 0.1556, respectively. In conclusion, we confirmed the genetic diversity of molds from Ragi tapai in Java Island and showed that the isolates are not only related to A. rouxii as reported before.
In the present work, we studied the structure-activity relationship (SAR) of tautomycetin (TMC) and its derivatives. Further, we demonstrated the correlation between the immunosuppressive fuction, anticancer activity and protein phosphatase type 1 (PP1) inhibition of TMC and its derivatives. We have prepared some TMC derivatives via combinatorial biosynthesis, isolation from fermentation broth or chemical degradation of TMC. We found that the immunosuppressive activity was correlated with anticancer activity for TMC and its analog compounds, indicating that TMC may home at the same targets for its immunosuppressive and anticancer activities. Interestingly, TMC-F1, TMC-D1 and TMC-D2 all retained significant, albeit reduced PP1 inhibitory activity compared to TMC. However, only TMC-D2 showed immunosuppressive and anticancer activities in studies carried out in cell lines. Moreover, TMC-Chain did not show any significant inhibitory activity towards PP1 but showed strong growth inhibitory effect. This observation implicates that the maleic anhydride moiety of TMC is critical for its phosphatase inhibitory activity whereas the C1-C18 moiety of TMC is essential for the inhibition of tumor cell proliferation. Furthermore, we measured $in$$vivo$ phosphatase activities of PP1 in MCF-7 cell extracts treated with TMC and its related compounds, and the results indicate that the cytotoxicity of TMC doesn't correlate with its $in$$vivo$ PP1 inhibition activity. Taken together, our study suggests that the immunosuppressive and anticancer activities of TMC are not due to the inhibition of PP1. Our results provide a novel insight for the elucidation of the underlying molecular mechanisms of TMC's important biological functions.
남부 지방의 밀양 근교에 자생하고 있는 야생 동충하초 균주(Cordyceps sp., Paecilomyces sp., Beauveria sp., Aranthomyces sp., Isaria sp., Himenostilbe sp.)를 채집 분리하여 rDNA 및 internal transcribed spacer (ITS) 부위의 염기서열을 비교하였다. ITS 영역에 특정적인 프라이머인 ITS1과 ITS4를 이용하여 PCR을 수행하여 증폭하였다. 다양한 균주에서 같은 크기의 PCR 생산물을 얻을 수 있었고, 이들의 서열분석을 위하여 pGEM-T easy 벡터에 클로닝하였으며, ITS1, 5.8S, ITS2 영역 부위의 염기서열들을 BLAST 수행하여 유연관계를 분석하였다. 밀양 근교에서 분리한 32개의 균주 중에 Cordyceps militaris는 서열이 등록된 유전정보 AY49191, EU825999, AY491992와 100% 일치하였으며, 몇 개의 종은 보고된 서열과 모두 일치하지는 않았다. 예를 들어 strain P17은 울주군 가지산에서 분리한 P. tenuipes로서 밀양시 조천읍 가지산에서 분리한 P. tenuipes와는 서열상에서 다른 부분들이 있었다. 결론적으로 밀양 근교의 균주들을 분리하는데 ITS영역분석이 분류와 검정에 효율적이고, 본 연구를 통하여 동충하초의 생태학적인 유전자원들을 확보할 수 있었다.
RAPD와 ITS 염기서열 분석을 통하여 $Ligularia$ 속 식물 5종류의 유연관계를 밝혔다. RAPD 분석에서는 총 196개의 random primer를 사용하여 밴드수가 많고 선명한 63개의 primer를 선발하였다. 다형성을 나타낸 밴드는 141개(31.8%)이었으며, 증폭된 크기는 0.2-1.6kb로 다양하였다. 유집 분석 결과, 유사도 값은 0.54-0.95의 범위로 나타났고, 0.77을 기준으로 크게 5그룹으로 나누었다. ITS 영역의 염기서열 분석 결과, ITS 1과 ITS 2 지역은 각각 248-256bp와, 220-222bp로 구성되어 있으며, 5.8S 부분은 164bp로 나타났다. ITS 1과 ITS 2 지역의 총 478개의 염기 중 49(10.2%)군데에서 변이가 있었으며, 구아닌(G)과 시토신(C)의 비율은 ITS 1 지역에서 49.4%, ITS 2에서는 53.5%로 나타났다. 염기서열 분석결과 5종류는 단계통을 형성하였으며, 갯취는 군외군으로 부터 가장 먼저 분계조를 형성하였다. 한대리곰취와 어리곤달비는 79%의 지지율을 가지고 유집되었으며, 곰취와 곤달비도 함께 유집되었지만 지지도는 52%로 낮았다. 이상의 결과에서 두 데이터는 일치하는 결과를 보였지만 한 대리 곰취의 분류학적 위치는 RAPD와 ITS 분석결과가 일치하지 않았다.
ITS (Intelligent Transportation System) has been more popular but ITS project managements remain complex because of diverse stakeholders and multidisciplinary processes of ITS. The multidisciplinary process enforces specialized competencies on ITS project managers comparing to other system integration project managers. In this paper, we derived core competencies of ITS projects from previous researches, built the hierarchy of the competencies, and employed AHP (Analytic Hierarchy Process) surveying ITS project managers and auditors with the hierarchy. Finally, we analyzed the difference of evaluation model on ITS project manager between project managers and auditors using Mann-Whitney U test. Additionally we suggest a method of building MECE (Mutually Exclusive and Collectively Exhaustive) structure for AHP using the HoQ (House of Quality). We expect our model to give some inspirations for raising capable ITS project managers and selecting a proper project manager for an ITS project.
Dorsoventral patterning of body axis in vertebrate embryo is tightly controlled by a complex regulatory network of transcription factors. Ventx1.1 is known as a transcriptional repressor to inhibit dorsal mesoderm formation and neural differentiation in Xenopus. In an attempt to identify, using chromatin immunoprecipitation (ChIP)-Seq, genome-wide binding pattern of Ventx1.1 in Xenopus gastrulae, we observed that Ventx1.1 associates with its own 5'-flanking sequence. In this study, we present evidence that Ventx1.1 binds a cis-acting Ventx1.1 response element (VRE) in its own promoter, leading to repression of its own transcription. Site-directed mutagenesis of the VRE in the Ventx1.1 promoter significantly abrogated this inhibitory autoregulation of Ventx1.1 transcription. Notably, Ventx1.1 and Xcad2, an activator of Ventx1.1 transcription, competitively co-occupied the VRE in the Ventx1.1 promoter. In support of this, mutation of the VRE down-regulated basal and Xcad2-induced levels of Ventx1.1 promoter activity. In addition, overexpression of Ventx1.1 prevented Xcad2 from binding to the Ventx1.1 promoter, and vice versa. Taken together, these results suggest that Ventx1.1 negatively regulates its own transcription in competition with Xcad2, thereby fine-tuning its own expression levels during dorsoventral patterning of Xenopus early embryo.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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