We identified differentially expressed genes in RAW264.7 cells in response to single and double ligand treatments (LPS, $IFN{\gamma}$, 2MA, LPS plus $IFN{\gamma}$, and LPS plus 2MA). The majority of the regulated transcripts responded additively to dual ligand treatment. However, a significant fraction responded in a non-additive fashion. Several cytokines showing non-additive transcriptional responses to dual ligand treatment also showed non-additive protein production/secretion responses in separately performed experiments. Many of the genes with non-additive responses to LPS plus 2MA showed enhanced responses and encoded pro-inflammatory proteins. LPS plus $IFN{\gamma}$ appeared to induce both non-additive enhancement and non-additive attenuation of gene expression. The affected genes were associated with a variety of biological functions. These experiments reveal both dependent and independent regulatory pathways and point out the specific nature of the regulatory interactions.
To study the effect of bifidobacteria on preventing allergy response, levels of IFN-$\gamma$, IgG2a, IL-4, and IgG1 were investigated in splenocytes isolated from ovalbumin (OVA)sensitized allergic mice and BGN4-administered allergysuppressed mice in the presence of various bifidobacterial strains. Most of the bifidobacteria, except 2A, increased production of Th I-associated immune markers, IFN -$\gamma$ and IgG2a. In addition, most of the bifidobacteria, except 2A and 19A, decreased production of IL-4, whereas the differences in the production of IgG1 were less pronounced. These results suggest that some strains of bifidobacteria may have the potential to prevent the occurrence of allergy by switching Th1/Th2-type antibodies and/or related cytokines.
정상 BALB/c 마우스의 복강에서 분리한 대식세포를 조제 림포카인 및 재조합 림포카인 (rGM-CSF, rIL-2, rIL-4, $rIFN-{\gamma}$)으로 18 시간 반응시켜 활성화시키고 대식세포 $1{\times}10^5$ 개와 $methyl-[^3H]-thymidine$으로 표지된 질트리코모나스 $1{\times}10^4$ 개를 10:1 비율로 넣고 18 시간 동안 $37^{\circ}C$, 5% $CO^2$ 항온항습기에서 반응시킨 다음 상청액 $100{\;}{\mu}l$씩을 scintillation cocktail 2ml에 넣어 방사능을 측정하여 세포독성을 관찰하고 nitrite 생산량을 측정하였다. rIL-2 40U/m1나 $rIFN-{\gamma}$ 100U/ml로 활성화시킨 대식세포는 대조군 보다 높은 세포독성을 보였으나 2개의 림포카인을 촌합시켰을때 낮은 세포독성을 보였다. rIL-4를 rGM-CSF, rIL-2 및 $rIFN-{\gamma}$와 각각 혼합시켰을 때 각 림포카인에 의한 대식세포의 세포독성은 감소되었다. 조제 림포 카인에서 IL-2에 대한 항체는 세포독성을 현저히 감소시켰다. Nitrite 생산량은 $rIFN-{\gamma}$ 및 rIL-4 각각으로 대식세포를 활성화시켰을 때 세포독성 정도와 비례되었고, rIL-2와 $rIFN-{\gamma}$을 혼합 시켰을 때 nitrite 생산량이 높고 증식이 억제되었으나 세포독성은 낮았다. 이러한 결과로 보아 rIL-2 및 $rIFN-{\gamma}$는 각각 단독으로도 대식세포를 활성화시켜 질트리모나스에 세포독성을 나타내며 rIL-4 는 세포독성을 억제시키는 것으로 생각되며, nitrite 생산량은 세포독성과 반드시 비례하지 않으나 nitric oxide가 질트리코모나스의 증식을 억제하는 것으로 생각된다.
In this experiment, we show the effects of herbal plant extracts on the production of nitric oxide (NO) and TNF-$\alpha$. The extracts of Angelica gigas, Astragalus membranaceus, Acanthopanax sessiliflorus and Houttuynia cordata had no effect on NO synthesis by itself in mouse macrophage cell line (RAW264.7). However, the stimulation with these extracts in the presence of murine interferon-${\gamma}$(mIFN-${\gamma}$) resulted in increased NO synthesis. When these extracts were used in combination with mIFN-${\gamma}$, there were a marked cooperative induction of NO and TNF-$\alpha$ synthesis in a dose-dependent manner. The same results were obtained in the mouse peritoneal macrophages used. The optimal concentration of these extracts on NO synthesis was shown at 100$\mu\textrm{g}$/mL with 100U/mL of mIFN-${\gamma}$. NO synthesis was inhibited by NG-monomethyl-L-arginine. When cell lines were treated with extracts, the expression of inducible NO synthetase (iNOS) was markedly increased in RT-PCR analysis. In addition, synergy between mIFN-${\gamma}$ and extracts was dependent on extracts-induced tumor necrosis factor-$\alpha$(TNF-$\alpha$). These results suggest that water extracts of herbal plants can induce iNOS, NO and TNF-$\alpha$ synthesis of mouse macrophage cell line (RAW264.7) and peritoneal macrophages in combination with mIFN-${\gamma}$.
1. 연구배경 및 목적 사상의학(四象醫學)에서 열다한소탕(熱多寒少湯)은 태음인(太陰人)의 뇌경색증 급성기에 매우 빈번하게 사용되는 처방 중 하나이다. 그래서 저자는 열다한소탕(熱多寒少湯) 투여에 따른 뇌경색증 환자의 면역계 특히 세포활성문질만계의 변화에 대해 연구하기로 하였다. 2. 방법 원광대학교 광주한방병원 사상의학과에 입원한 뇌경색증 한자 8인(남자 3명, 여자 5명)을 대상으로 하여, 내원 당시와 2-4주간의 열다한소탕 투여 후의 세포활설물질망계의 변화를 추적하였다. 또한 정상태음인의 말초혈액단핵구를 채취하여 리포다당체 처리시의 변화를 열다한소탕(熱多寒少湯) 전처리 유무에 따라 비교 분석하였다. 3. 결과 IL-2 혈장 농도는 정상 대조군보다 환자군에서 더 낮았다. $IFN-{\gamma}$의 경우 역시 정상 대조군보다 약간 낮았으나 통계학적 유의성은 없었다. IL-4, IL-6, IgE의 혈장중 수준은 정상 대조군에 비해 환자군에서 현저히 상승되어 있었다. 그러나, 2-4주간의 열다한소탕(熱多寒少湯) 투여후 $IFN-{\gamma}$, IL-2의 혈장 중 수준은 현저히 상승되었고, IL-4, IL-6, Ig E 수준은 현저히 억제되었다. 한편 정상 태음인의 말초혈액단핵구에 리포다당체 처리를 한 후 $IFN-{\gamma}$, IL-2, IL-6가 상승되었으나, 열다한소탕(熱多寒少湯) 전처리를 한 경우에서는 이들 물질의 생성이 유의하게 억제되었다.
율무 수침엑스(Co-Ex)가 대식세포내 톡소포자충(Toxoplosmo gondii RH strain)의 번식에 억제 작용이 있다는 보고(Soh et al.., 1994)에 이어 본 연구는 Co-Ex내의 유효성분(effective component)을 추구하기 위하여 이미 탈지조작과 단백질 변성과정을 거친 Co-Ex를 Tris-buffer solution에 녹인 후 원심과정으로 그 상청(WC1) 그리고 WC1을 ammonium sulfate 처리 후 원심한 상청(WC2)과 침사(WC3)를 분리하였고 WC1은 다시 column chromatography에 의하여 WC4 WC5 WC6로 분획하여 시료로 사용하였으며. 대식세포 활성에 기여하는 것으로 이미 알려진 $IFN-{\gamma}$, LPS 등을 참고자료로 하였다. 각 시험자료들의 대식세포 활성화로 인한 반응질소 중간산물(RN1) 생산량. 대식세포의 톡소포자충 감염상 대식세포내 톡소포자충 번식상 등을 비교 조사하였다 10% FCS 첨가 DMEM 배지에 배양하였고 이에 각종 시료(BRM)를 실험목적에 따라 배지에서 24시간 작용시킨 뒤 RNI를 조사하였고 이어 톡소포자충 $1\times10^6$을 30분 감염시킨 뒤 새 배지에 옮겨 48시간 배양한 뒤 Pl, Fl 등을 조사하였다. NO 생산은 각례 대조(시료 비투여)에 비하여 높았고 $IFN-{\gamma}$ 첨가는 생산량(${\mu}M/l$)을 더욱 증가시켰다(예 Control 7.5 Control + $IFN-{\gamma}$ 14.2 WC2 26.2 WC2 + $IFN-{\gamma}$ 57.8). 포자충감염율(%)은 대조에 비하여 낮았고 $IFN-{\gamma}$ 첨가시에는 더욱 낮아졌는데 $IFN-{\gamma}$ 첨가예에서의 감염율은 대조 38.0인데 비하여 WC2 19.2. WC1 + WC2 + WC3 7.2로 나타났다. 세포당감염율도 같은 경향으로 INF-$\gamma$ 첨가시험에서 대조 6.0(감염 대식세포 100개 중의 톡소포자충 평균수) WC2 1.7, WCI + WC2 + WC3 1.4 등으로 나타 났다. 결론적으로 율무엑스 수침엑스 중 WC2, WC1 등은 대식세포를 활성화하나 $IFN-{\gamma}$ 첨가는 더욱 그 활성화를 높이며 그 중 WC2가 활성화에 주역을 하는 것으로 사료되는 바이다.
Cordyceps militaris has shown to have various pharmacological activities including an immune-modulatory effect. Previously, we reported that anti-influenza effect of C. militaris in DBA/2 mice was mediated by increased IL-12 and the activation of NK cells. In this study, we investigated the effect of C. militaris on adaptive immune responses using DBA2 mice immunized with influenza vaccine. To determine the effect of C. militaris on antigen presentation capability, we treated RAW 264.7 cells with various concentrations of ethanol extract of C. militaris, which showed a significant upregulation of CD86 (B7.2), CD284 (TLR4), CD40, H-2k (MHC I) and I-Ad (MHC II). To examine the direct effect of C. militaris on adaptive immune responses, we immunized DBA2 mice with influenza vaccine in presence or absence of C. militaris. After 2 or 4 weeks, influenza-specific T cell proliferation, HAI titers and IFN-${\gamma}$ production were measured in plasma or PBMCs isolated from animals. Influenza-specific T cell proliferation and HAI titers were not considerably increased in immunized mice in presence of C. militaris. However, the production of IFN-${\gamma}$ was much greater in immunized mice with C. militaris as adjuvant than only immunized mice.
Acorns have been used as a traditional remed as well as food source. However, few studies on their immunomodulating effects have been reported. In this study, the combined immunomodulative effect of a water extract of acorns was tested on seven to eight weeks old mice(balb/c). The mice were fed ad libitum on a chow diet, and a water extract of the plant mixture was orally administered every other day for four weeks at two different concentrations(50 and 500 mg/kg B.W.). The production of cytokine(IL-$1{\beta}$, IL-6, IL-2, IL-10, IFN-$\gamma$), secreted by macrophages stimulated with LPS or not, detected by ELISA assay using cytokine kit. After 48 h of incubation with mitogen(ConA or LPS) ex vivo study showed that cytokine (IL-$1{\beta}$, IL-6, IL-2, IL-10, IFN-$\gamma$) was detected in both of the 50 and 500 mg/kg B.W. supplementation groups with LPS stimulation. The results of this study may suggest that supplementation with acorn water extract increase immune function by regulating cytokine production capacity by activated macrophages.
본 연구에서는 참치 추출물 및 분획물들에 의한 NO 생성에 미치는 영향을 살펴보았고 참치 85% aq. MeOH 분획물을 중심으로 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 IL-6, IFN-${\gamma}$ 및 TNF-${\alpha}$ 같은 사이토카인의 생성을 측정하여 참치 추출물에 의한 면역 기능 조절에 대하여 검토하였다. 참치 추출물과 각 분획물들은 control보다 낮은 NO 생성량을 나타내었으며, 특히 85% aq. MeOH 및 n-hexane 분획물에 의한 저해효과가 높았다. IL-6와 TNF-${\alpha}$의 경우, 참치 85% aq. MeOH 분획물을 농도별(1, 3 및 $10{\mu}g$)로 처리했을 때 그 중 $10{\mu}g/mL$ 첨가농도에서 6시간 배양 후 가장 낮은 IL-6 및 TNF-${\alpha}$ 생성량을 확인할 수가 있었다(p<0.05). IFN-${\gamma}$의 생성은 참치 85% aq. MeOH 분획물(1, $3{\mu}g/mLg$ 첨가농도)을 LPS와 함께 처리 했을 때 24시간과 48시간 배양 시 생성량이 증가하는 경향이었으나 유의적 차이는 없었다. 따라서 참치 85% aq. MeOH 분획물은 NO 생성과 pro-inflammatory 사이토카인(IL-6와 TNF-${\alpha}$)을 감소시켜 염증반응을 예방할 것으로 기대된다.
Objectives : Zingberis Rhizoma (ZR) and Glycyrrihizae Radix (GR) have been widely used to prevent or treat allergic diseases. However, relatively little research has been conducted on the immune response to Senggang Gamcho-tang (SG) in a mixture of ZR and GR. The purpose of this study was to determine antiallergic effects of Senggang Gamcho-tang (SG) extracts ZR and GR on activity of murine splenocytes. Methods : This study was performed to investigate the effect of SG in mice, using in vitro experiments. Cells were treated with SG extract (1 ${\mu}g$/ml, 10 ${\mu}g$/ml and 100 ${\mu}g$/ml) plus Con A (2 ${\mu}g$/ml) and ZR (6.6 ${\mu}g$/ml and 66 ${\mu}g$/ml), GR (3.3 ${\mu}g$/ml and 33 ${\mu}g$/ml) respectively for 48 hrs. The production of IFN-${\gamma}$ and IL-4 were determined by ELISA. Results : No toxicity was found in splenocytes treated with SG extract for 48 hrs at the concentration of 0 ${\mu}g$/ml, 1 ${\mu}g$/ml, 10 ${\mu}g$/ml and 100 ${\mu}g$/ml, respectively. The production of IFN-${\gamma}$ increased to 23,968.7 pg/ml (p<0.001) while that of IL-4 significantly decreased to 14.1 pg/m l(p<0.05) only at the SG concentration of 100 ${\mu}g$/ml. With the GR concentration of 33 ${\mu}g$/ml in SG extract, the production of IFN-${\gamma}$ rose to 32,102.2 pg/ml (p<0.001) while that of IL-4 (p<0.05) declined to 34.2 pg/ml. However, there was no significant observation with regard to the effect of ZR on production of IFN-${\gamma}$ and IL-4. Conclusions : This study suggests an antiallergic effect of Senggang Gamcho-tang, which leads to the implication that SG extract may be used to enhance human immune function.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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