• Current Research on Agriculture and Life Sciences
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• 제1권
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• pp.195-199
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• 1983

우백혈청(牛白血病)virus에 대한 혈청항체의 측정(測定)을 위한 간접효소면역법(間接酵素免疫法)(ELISA)의 확립(確立) 및 ELISA법(法)의 감도(感度)를 알기 위하여 한천(寒天) gel 면역확산법(免疫擴散法)(ID)과 비교검토(比較檢討)하였으며 한우(韓牛), 유우(乳牛) 및 육우(肉牛)등 264두(頭)의 혈청(血淸)을 공시(供試)하였다. 혈청(血淸)을 가(加)하지 않은 공(孔)의 흡광치(吸光値)(C)로서 혈청치(血淸値)를 제(除)한 후, 표준(標準)BLV항체흡성혈청치(N)로서 피검혈청치(被檢血淸値)(T)를 나눈치(値)(T-C/N-C)가 1.5이상(以上)인 것을 BLV항체 양성(陽性)으로 하였을 때 gp-ID의 성적(成績)과 98.5%(259/263)가 일치(一致)되었다. gp-ID 향성혈청(陽性血淸) 145예(例)중 144예(例)가 ELISA 양성(陽性)으로 99.6%, gp-ID 음성혈청(陰性血淸) 118예(例)중 115예(例)가 ELISA음성(陰性)으로 97.5%가 일치(一致)되었다. 이상에서와 같이 gp-ID용(用)의 BLV 항원(抗原)을 사용한 ELISA법(法)을 gp-ID와 동등(同等) 또는 더 감도(感度)가 우수한 BLV의 혈청항체측정법 임이 입증되었으며 실용성(實用性)이 충분(充分)하다고 사료(思料)된다.

• 대한수의학회지
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• 제34권1호
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• pp.93-97
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• 1994

A immunological survey of paratuberculosis in dairy and Korean native cattles was conducted by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA), complement fixation test(CFT), agar gel immunodiffusion test (AGID) and intradermal skin test(ID). Over all prevalence of pararuberculosis in cattles was 6.7%(109/1633) by ID, 7.5(205/2719) by AGID, 9.3% (245/2641) by CFT and 13.4%(363/2719) by ELISA. Prevalence in dairy cattle was higher than that of Korean native cattle. Of 70 ELISA-positive cattle, 23(28.6%) and 48(68.6%) cattles were classified as positive in the AGID and positive or suspect in CFT, respectively. Of 92 ELISA-suspect cattle, 32(34.9%) and 48(52.2%) cattles were classified as AGID-positive and CFT-positive or suspect, respectively. It was concluded that paratuberculosis is widespread in cattle of Korea.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제31권1호
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• pp.21-27
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• 2016

본 연구에서는 V. parahaemolyticus를 신속정확하게 고감도로 검출하기 위해 단클론성 항체를 개발하고 이를 이용하여 일반적인 효소면역분석법(ELISA)과 효소면역분석법의 낮은 민감도를 보완할 수 있는 면역선택여과법(ISF)을 개발하여 민감도 및 효율성을 비교분석 하였다. 먼저 heat killed V. parahaemolyticus (HKVP)를 준비하여 7주령 BALB/c mouse에 면역한 후 세포융합 및 클로닝을 통해 HKVP 4H9-9번 및 16번 2종의 hybridoma cell을 확보하였다. Western blot을 통해 보다 특이성이 높은 것으로 확인된 HKVP 4H9-9번 항체를 대량 생산정제하여 분석법을 확립한 결과 검출한계가 ID-ELISA법은 $10^6cell/mL$, ISF 법은 $5{\times}10^1cell/mL$로 나타나 ISF법의 민감도가 매우 높은 것으로 확인되었다. 분석효율성은 ID-ELISA법의 경우 분석을 위해 9단계의 과정을 거쳐 총 16시간의 분석시간이 소요된 반면, ISF법의 경우 3단계의 과정을 거쳐 1시간 이내에 분석을 완료할 수 있는 것으로 확인되었다. 교차반응성의 경우 두 분석법 모두 일부 Vibrio spp. (IDELISA법: V. alginolyticus, ISF법: V. vulnificus)과 S. aureus에 반응성이 있는 것으로 확인되었지만 V. parahaemolyticus에 보다 강한 반응성을 나타내었기 때문에 V. parahaemolyticus에 특이적인 분석법인 것으로 확인되었다. 특히 ISF법은 ELISA법 보다 민감도가 높고 분석에 소요되는 시간도 짧아 V. parahaemolyticus를 신속하게 분석하는데 활용이 가능할 것으로 판단된다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제29권2호
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• pp.158-163
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• 2014

본 연구에서는 상용화 되고 있는 PCR 및 ELISA kit를 사용하여 국내에서 유통되고 있는 소, 돼지, 닭, 오리, 칠면조, 염소, 양, 말 등 8종의 식육, 혼합육, 그리고 식육가공품에 대하여 축종 감별능력을 평가하였다. 신선육에 대한 RAW meat ELISA kit$^{(R)}$의 검출한계는 축종별 함유율 0.20%~0.05% 이었고, 열처리 혼합육에서는 열처리 온도 및 시간, 그리고 축종별로 검출한계는 함유율 1.0%~0.05% 이하까지 다양한 차이를 나타내었다. 8종의 식육에 대한 축종별 감별력은 소 94.5%, 돼지 93.3%, 양 90.0%, 오리, 염소, 말, 칠면조 모두에서 100%를 나타내었다. Powercheck Animal Species ID PCR kit$^{TM}$의 경우에는 함유율 0.05%의 검출한계를 나타내었고 8종의 모든 축종에서 100%의 특이도를 나타내어 축종별 감별력이 우수한 것으로 나타났다. 또한, 햄, 소시지, 분쇄가공품, 식육추출가공품 등 총 60개 식육가공품에 대한 Cooked meat ELISA kit$^{(R)}$의 감별력은 햄(35.3%), 소시지(13.6%), 분쇄가공육(12.5%)의 순으로 나타났으며, 2종 이상의 혼합육에서는 상대적으로 낮은 감별력을 보여 제조과정에서 식육간 교차오염에 의한 혼입가능성이 있는 것으로 확인되었다. 쇠고기 육포 54개 제품에 대하여 다른 고기 혼입여부를 PCR Kit로 검사한 결과 13개 제품에서 돼지고기 유전자가 검출되었지만 ELISA Kit에서는 모두 음성으로 나타났다. PCR 양성 시료의 제조공정 중 교차오염 여부를 조사한 결과, 텀블러, 채반, 절단기, 건조기가 쇠고기 및 돼지고기 육포 생산라인에 동일하게 사용되어 교차오염에 의한 혼입으로 추정되었다. 종교적 이유 및 일부 특정 육류에 대한 알러지 반응 등 식품안전 확보차원에서 제품의 원재료의 올바른 표시와 식육간 교차오염이 발생되지 않도록 철저한 품질관리가 되어야 할 것으로 판단된다.

• 한국식품과학회지
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• 제42권3호
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• pp.329-334
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• 2010

본 연구에서는 최근 식품이나 농축산물 등에서 빈번하게 검출되고 있는 장관출혈성 대장균인 E. coli O157:H7에 대한 단크론성 항체를 생산하고, 신속 정확하게 검색할 수 있는 간접효소면역분석법을 개발한 후 시료적용가능성을 확인하였다. 먼저 LPS, HKEC 및 FKEC를 E. coli O157:H7의 면역원으로 준비하여 mouse 면역에 사용하였고, 세포융합과 cloning을 실시하여 단클론성 항체를 생산하였으며, 생산된 항체 중 높은 역가를 나타낸 HKEC 4G8-5 항체로 ID-ELISA법을 개발하였다. 개발된 IDELISA법의 최저검출한계는 $10^5\;cell/mL$이었고, S. aureus와 Sal. Typhimurium에 대해서 약간의 반응성을 나타내었지만 E. coli O157:H7에 대해 보다 강한 반응성을 나타내었기 때문에 E. coli O157:H7에 매우 특이적인 분석법인 것으로 확인되었다. 개발된 ID-ELISA법을 이용하여 돼지고기, 소고기, 닭고기 및 새싹채소에 대한 검출률 향상을 위해 각 시료를 증균한 결과, 3종의 육류와 새싹채소는 각각 증균 6시간과 2시간부터 검출이 가능한 것으로 나타나 기존의 증균법보다 신속하게 시료 속 E. coli O157:H7을 분석할 수 있을 것으로 판단된다. 따라서 본 연구에서 개발된 IDELISA법을 적용하여 농축산물 중에 존재하는 E. coli O157:H7을 분석한다면 보다 신속하고 간편하게 분석할 수 있을 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제22권12호
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• pp.1776-1781
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• 2012

Multiple viruses such as Lily symptomless virus (LSV), Lily mottle virus (LMoV), and cucumber mosaic virus (CMV) are the most prevalent viruses infecting lilies in Korea. Leaf samples and bulbs showing characteristic symptoms of virus infection were collected from Gangwon, Chungnam, and Jeju provinces of Korea in 2008-2011. Coat protein (CP) genes of LSV and LMoV were amplified from collected samples by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and cloned into a pET21d(+) expression vector to generate recombinant CPs. The resulting carboxy-terminal His-tagged CPs were expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3) by isopropyl-1-thio-${\beta}$-D-galactoside induction. The recombinant proteins were purified using Ni-NTA agarose beads, and the purified proteins were used as an immunogen to produce polyclonal antibodies in rabbits. The resulting polyclonal antisera recognized specifically LSV and LMoV from infected plant tissues in Western blotting assays. Indirect enzymelinked immunosorbent assay and immunocapture RT-PCR using these polyclonal antisera were developed for the sensitive, efficient, economic, and rapid detection of Lily viruses. These results suggest that large-scale bulb tests and economic detection of Lily viruses in epidemiological studies can be performed routinely using these polyclonal antisera.

• 식물병연구
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• 제9권2호
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• pp.94-98
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• 2003

느타리버섯에 발생하여 갈색부패병을 일으키는 P. tolaasii 및 P.agarici 를 면역화학적 방법으로 신속하게 검출하기 위한 항체를 생산하였고 면역확산법과 ELISA 로 본 항체의 특이성을 조사하였다. $\alpha$-P tolaasii 항체는 P. tolaasii와 반응하여 선명한 침강선을 형성하지 않아 P. tolaasii 에 대하여만 특이적으로 반응하는 항체임을 알 수 있었다. 한편 $\alpha$-P. agarici 항체는 P.agarici뿐만 아니라 다른 세균에 대해서도 침강선을 형성하지 않는 특징을 나타내었다. 비경합 간접 ELISA의 표준곡선으로부터 P.agarici의 검출에 대하여 최고 발색치의 50% 갑을 나타내는 균의 밀도는 $2{\times}10^4$ cfu/ml로 나타났으며, 검출한계농도는 $2{\times}10^3$ cfu/ml 이었다.${\alpha}$-P. agarici 항체는 P. tolaasii의 특이적인 검출에도 효과를 나타냈다. ${\alpha}$-P. tolaasii, ${\alpha}$-P. agarici 항체를 이용하여 확립한 ELISA법은 직접 균체나 버섯 자실체내 P. tolaasii 와 P. agarici의 신속한 검출을 가능하게 하였고, P. tolaasii 와 P. agarici에 오염된 시료를 간단하게 진단하는데 아주 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단되었다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제22권3호
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• pp.29.1-29.6
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• 2021

West Nile virus (WNV), a neurotropic arbovirus, has been detected in mosquitos, birds, wildlife, horses, and humans in Malaysia, but limited information is available on WNV infection in Malaysian pigs. We tested 80 archived swine serum samples for the presence of WNV antibody and West Nile (WN) viral RNA using ID Screen West Nile Competition Multi-species enzyme-linked immunosorbent assay kits and WNV-specific primers in reverse transcription polymerase chain reaction assays, respectively. A WNV seroprevalence of 62.5% (50/80) at 95% confidence interval (51.6%-72.3%) was recorded, with a significantly higher seroprevalence among young pigs (weaner and grower) and pigs from south Malaysia. One sample was positive for Japanese encephalitis virus antibodies; WN viral RNA was not detected in any of the serum samples.

• International Journal of Oral Biology
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• 제42권1호
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• pp.17-23
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• 2017

Background: Periodontitis is generally a chronic disorder characterized by the breakdown of tooth-supporting tissues. P. gingivalis, a Gram-negative anaerobic rod, is one of the major pathogens associated with periodontitis. Frequently, P. gingivalis infection leads to cell death. However, the correlation between P. gingivalis-induced cell death and periodontal inflammation remains to be elucidated. Among cell deaths, the death of immune cells appears to play a significant role in inflammatory response. Thus, the aim of this study was to examine P. gingivalis-induced cell death, focusing on autophagy and apoptosis in THP-1 cells. Methods: Human acute monocytic leukemia cell line (THP-1) was used for all experiments. Autophagy induced by P. gingivalis in THP-1 cells was examined by Cyto ID staining. Intracellular autophagic vacuoles were observed by fluorescence microscopy using staining Acridine orange (AO); and 3-methyladenine (3-MA) was used to inhibit autophagy. Total cell death was measured by LDH assay. Cytokine production was measured by an ELISA method. Results: P. gingivalis induced autophagy in an MOI-dependent manner in THP-1 cells, but 3-MA treatment decreased autophagy and increased the apoptotic blebs. P. gingivalis infection did not increase apoptosis compared to the control cells, whereas inhibition of autophagy by 3-MA significantly increased apoptosis in P. gingivalis-infected THP-1 cells. Inhibition of autophagy by 3-MA also increased total cell deaths and inflammatory cytokine production, including $IL-1{\beta}$ and $TNF-{\alpha}$. Conclusion: P. gingivalis induced autophagy in THP-1 cells, but the inhibition of autophagy by 3-MA stimulated apoptosis, leading to increased cell deaths and pro-inflammatory cytokines production. Hence, the modulation of cell deaths may provide a mechanism to fight against invading microorganisms in host cells and could be a promising way to control inflammation.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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• 제42권4호
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• pp.307-313
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• 2008

목적: 혈관내피성장인자(VEGF)와 그 수용체는 종양의 성장과 전이에 매우 중요한 역할을 한다 3개의 수용체가 알려져 있는데 그 중에서도 VEGFR2 (Flk-1/KDR)가 종양 angiogenesis에 매우 밀접하게 관련한 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 마우스 Flk-1 항체로 알려진 DC101에 I-131을 표지하여 매우 공격적인 종양으로 알려진 흑색 종의 치료 정도를 확인해 보고자 하였다. 방법: 하이브리도마 세포에서 Flk-1 항체인 DC101을 분리하여 western blot, ELISA, maldi-tof 방법을 이용하여 순도를 확인하고 항체 에 chloramin T를 이용하여 I-131을 표지하였다. 누드마우스에 B16F10세포를 주사하여 흑색종 모델을 만들고 평균 $200-250\;mm^3$으로 키워 $^{131}I$-DC101을 주사하여 영상과 시간별 장기섭취율(%ID/g)을 비교하고, 종양내 Flk-1 발현을 확인하기 위하여 면역염색 등을 시행하였다. 흑색종 동물모델을 5개 군으로 나누어 각각 치료를 시행하였다. 1군은 PBS만을, 2군은 $^{131}I$-DC101 $50\;{\mu}g(200\;{\mu}Ci)$을, 3군은 DC101 $50\;{\mu}g$을, 4군은 $^{131}I$-DC101 $30\;{\mu}g(200\;{\mu}Ci)$을, 5군은 $^{131}I$-DC101 $15\;{\mu}g(200\;{\mu}Ci)$을 각각 매 3일 ${\sim}$ 4일마다 주사하고 전체 5회를 주사하였고 종양볼륨을 측정하였다. 결과: $^{131}I$-DC101을 흑색종 모델에 정맥주사하고 78시간까지 영상을 얻은 결과 시간에 따라 종양섭취가 증가 하는 영상을 보였다. 시간대별 장기섭취를 정확히 확인하기 위하여 1시간, 6시간, 24시간, 48시간, 72시간 장기섭취율을 비교한 결과 시간에 따라 혈액내 방사능치가 서서히 감소하였고 다른 장기의 섭취도 시간에 따라 감소하였고 종양의 섭취는 48시간까지 증가하였다가 그 이후는 감소하였다. 흑색종 동물모델에 $^{131}I$-DC101 치료를 시행한 결과 3번째 주사까지는 각군간의 유의한 차이를 보이지 않다가 4번째 주사를 시행한 때부터 1군과 2군, 또는 1군과 4군간의 유의한 차이를 보이기 시작했다. 또한 5번째 주사 이후에는 5군에서도 유의한 차이를 보여 I-131 에 의한 효과가 뚜렷해짐을 확인하였다. 결론 마우스 Flk-1 항체로 알려진 DC101을 흑색종 모델에 정맥내 주사하였을 때, 종양성장억제 효과를 보이지 않는 항체양에서도 I-131을 표지하여 치료를 시행했을 경우에는 효율적인 종양성장억제 효과를 보였다.