This study was performed to investigate antigenic expression patterns in the course of HSV-1 infection. In SDS-PAGE analysis, HSV-1 antigens were detected, and among them, antigens in the size of 39, 47, 63, 86, 101, 105, 135, 159, and 181 kDa appear to be expressed in the most dominant forms. BALB/c mice were infected with HSV-1 for 29 days and antigenic expression from HSV-1 was investigated by Western blot analysis using anti-HSV-1 sera collected every two days from BALB/c mice infected with HSV-1. Most of HSV-1 antigens appeared sporadically as the infection progressed. However, antigens in the sizes of 63kDa and 135kDa were expressed from day 1 and 3, respectively, and existed continuously during the course of infection for 29 days, suggesting that they are the most dominant antigens inducing immune response durign HSV-1 infection, and they could be the target antigens for the development of vaccines. The isotype levels of IgA, IgGl, and IgM increased till the 17 th day infection and then started to decrease. During this course. IgGl was the most dominant isotype. In an indirect immunofluorescent assay, antibodies exhibited surface binding to the Vero cell infected with HSV-1, demonstrating that HSV-1 antigens are expressed on the surface of Vero cells.
Herpes simplex virus, Varicella zoster virus and Human herpes virus-6 caused central nervous system infections and latent infections but there is no data of the 3 viruses being tested from the same cerebrospinal fluid samples with aseptic meningitis or encephalitis in adults patients. These viruses produced similar neurologic symptoms but difficulties existed in differentiating of etiologic agents and therefore the viruses needed to be detected in the early state. Herpes simplex virus encephalitis (HSVE) in adults, if not treated promptly was fatal. If treated with antiviral drugs in the early phase of encephalitis, neurologic sequales decreased by 65%. Recently, a PCR method for detection of HSVE with CSF was developed. VZV primary and secondary infections caused neurologic symptoms of encephalitis or meningitis. The second frequency of adult encephalitis that caused VZV were reported. HHV-6 caused CNS latent infection that was studied with normal adults brains. But there is no data of HSV, VZV and HHV-6 for aseptic meningitis and encephalitis of Korean adults through etiologic study. We cultured CSFs on HEp-2 cells and simultaneously tested for HSV PCR, VZV nested PCR and HHV-6 PCR with 8 specific primers. The PCR results of CSF from meningitis Korean adults were 13/19 (68.4%) for HSV, 10/19 (52.6%) for VZV and 12/19 (63.2%) for HHV-67/19 (36.8%) cases were triple infected HSV PCR, VZV PCR and HHV-6 PCR positive; 3/19 (15.8%) cases were dual infected HSV PCR and HHV-6 PCR positive; 1119 (0.5%) cases was VZV PCR positive. Strong viral DNA amplification of CSF means a causative virus may be present in aseptic meningitis or encephalitis patients and may cause clinical neurologic symptoms. HSV and HHV-6 viruses detection rate were higher than VZV by PCR with CSFs.
To establish in vivo antiviral evaluation system by using murine herpesvirus intracerebral infection model, 5-6 female BALB/c mice per group aged 5 weeks were inoculated i.c. into cerebrum with different inocular HSV-1 F. Signs of clinical disease noted everyday for one month. Observed were body weight decrease, neurological signs and death caused by encephalitis. Mice discontinued body weight decrease were recovered from the disease, and keratitis was often observed during recovery. The groups inoculated with higher than 1,000 PFU showed 100% mortaltiy and $LD_{50}$ was <100 PFU/mouse. To study the effect of virus inoculum sizes on antiviral effect of acyclovir (ACV), mice inoculated with different inocula were administered i.p. with different doses of ACV immediately after infection, and twice a day for 5 days. The higher inculum size, the less protective. $ED_{50}$ of ACV was >25, >25, 18.4 and 8.0 mg/kg b.i.d. in the group infected with 1,000,000, 100,000, 10,000 and 1,000 PFU/mouse, respectively. $LD_{50}$ of ACV was 62.5 mg/kg b.i.d. Therapeutic index of ACV was <2.5, <2.5, 3.0 and 7.0 in the groups with inocula 1,000,000, 100,000, 10,000 and 1,000 PFU/mouse, respectively. Inoculum size 1,000 PFU/mouse showing 100% mortaltiy and 5-6 days mean time to death, 5 days drug administration and 14 days observation will be future experimental conditions.
We have previously reported that simulated snuff dipping in conjunction with type I herpes simplex virus (HSV-1) induced oral malignant changes in hamsters. Present study was designed to investigate the carcinogenic effect of tobacco specific-N-nitrosamines (TSNAs) and HSV-1, alone or in combination, in hamsters. Hamsters were divided into 6 groups and the right buccal pouch mucosa were treated as follows: Grp 1, Control (Mock inoculation) [MI]+Topical Application [TA] of mineral oil[MO] : Grp 2, TA of 1% n'- nitrosonornicotine [NNN] + IM: Grp3, TA of 1% 4-N-nitrosomethylamino-1- (3-pyridyl)-1-butanone [NNK] + MI: Grp 4, HSV-1 inoculation [HI]+TA of MO : Grp 5, TA of 1% N-nitrosonornicotine [NNN] + HI: Grp 6, TA of 1% NNK + HI. TA of MO or TSNAs was initiated 1 day after the MI or HI and given 3 times per week for 20 consecutive weeks. At the buccal pouches were fixed for light microscope examination. No animal s developed tumors or malignant histopathologic changes in the mucosa of the buccal pouches. These data indicate that individual TSNAs, alone or in conjunction with HSV-1 infection, do not develop malignant changes in hamster buccal pouches.
The viruses of Herpes Simplex Virus 1 (HSV-1), Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2) and Varicella-Zoster virus (VZV) which belong to the alpha herpes subfamily are important human pathogens. When eruptions were not fully developed from these viral infections, clinical diagnosis was not always easy and required virological confirmation test. The above viruses were reactivated in individuals who were compromised in immune competence for one reason or another. Polymerase chain reaction (PCR) enables rapid and sensitive detection of HSV and VZV DNAs. Its sensitivity was largely influenced by choice of primers. Authors conducted a study to detect of those three viruses in human specimens including vesicle fluid and joint fluid and serum using PCR methods. Primers used for this study were the general primer pair GPHV-RU which was known to amplify within the genes enjoying the highest degree of homology between UL15 of HSV and UL42 of VZV. PCR with primers hybridized pair GPHV-RU amplifies a 396 bp with THP-1 and HSV-2 standard strain DNA and 405 bp with VZV standard strain DNA. Restriction enzyme cleavage with HpaII and DdeI were used to detect and distinguish DNAs of THP-1 and HSV-2 and VZV. The purpose of this study was a rapid and easy detection of VZV and THP-1 or HSV-2 from various clinical specimens (vesicle fluid, serum and joint fluid) by PCR method. Used methods were: HSV PCR with primer 1, 2 and HpaII RE digestion; VZV nested PCR; HSV PCR with primer A, Band BssHII RE digestion. 1) In 33 cases (33/42, 78.6%) VZV was detected single or mixed infection from 42 clinical specimens which included vesicle fluid (5), serum form respiratory infected children (10), serum from immune suppressed adult cancer patients (7) and joint fluid from arthritis patients (20). 2) In 20 cases (20/42, 47.6%) HSV was detected singly or mixed infection and 19 of those cases were HSV-2 and 1 case was THP-1. 3) In 19 cases (19/42, 45.2%) VZV was singly detected which included serum from respiratory infected children (6 cases), joint fluid from arthritis patients (9 cases), vesicle fluid (2 cases) and serum form immunosuppressed cancer patients (2 cases). 4) HSV was singly detected in 6 cases (6/42, 14.3%) which included joint fluid from arthritis patients (5 cases) and serum form respiratory infected children (1 cases). 5) 14 cases of VZV and HSV mixed infection (14/42, 33.3%) were detected. They included vesicle fluid (3 cases), serum form immunosuppressed cancer patients (4 cases), serum from respiratory infected children (2 cases) and joint fluid from arthritis patients (5 cases). 6) HSV-1 and HSV-2 detection and typing by HSV PCR with primer A, Band BssHII RE digestion method was more sensitive and the results were easier to detect than on other method.
GLPG (Ganoderma lucidum proteoglycan) was a bioactive fraction obtained by the liquid fermentation of the mycelia of Ganoderma lucidum, EtOH precipitation, and DEAE-cellulose column chromatography. GLPG was a proteoglycan with a carbohydrate: protein ratio of 10.4: 1. Its antiviral activities against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) were investigated using a cytopathic inhibition assay. GLPG inhibited cell death in a dose-dependent manner in HSV-infected cells. In addition, it had no cytotoxic effect even at 2 mg/ml. In order to study the mode of action of the antiviral activity of GLPG, cells were treated with GLPG before, during, and after infection, and viral titer in the supernatant of cell culture 48 h post-infection was determined using a $TCID_{50}$ assay. The antiviral effects of GLPG were more remarkable before viral treatment than after treatment. Although the precise mechanism has yet to be defined, our work suggests that GLPG inhibits viral replication by interfering with the early events of viral adsorption and entry into target cells. Thus, this proteoglycan appears to be a candidate anti-HSV agent.
항구 도시인 부산의 바이러스성 성병 감염 현황과 고위험군 지표로서 HPV, HSV 및 HBV 감염자의 성별, 연령대별 유형율 조사 등 기초자료를 확보하여 성매개감염증 사업관리 및 전파방지에 중요한 자료를 제공하고자 한다. 자궁경부도찰물 674건 중 HPV 23건(3.4%)과 HSV 1 2형 3건(0.4%) 9건(1.3%)이 각각 분리되었으며, 혈청 586건 중 HSV IgM 121건(3.6%), HSV-1 IgG 487건(83.1%), HSV-2 IgG 135건(23.0%), HBsAg 26건(4.4%), HBeAg 7건 (1.2%) 등이 검출되었다. HPV 유전자형별 분포도는 고위험군이 15종(13명), 저위험군이 6종(3명)으로 나타났으며, 복합감염은 7명이었다. 연령별 발생분포는 자궁경부도찰물의 경우 20대 이하가 24건(7.2%), 혈청의 경우 40대 이상이 101건(100%)으로 가장 높았다. 그리고 업소별 분포도는 자궁경부도찰물에서 보건소의 검진대상자(유흥업소종사자)들이 감염율이 가장 높았고, 혈청에서는 대용성병진료소의 검진대상자(특수업태부)가 감염율이 가장 높았다.
본 연구는 뉴런 세포와 슈반 세포의 공동 배양에 의한 수초화 발생 과정과 herpes simplex virus-1 감염에 의한 탈수초화 발생과정을 전자 현미경과 분자생물학적 분석에 의하여 확인하고자 하였다. 쥐의 배아로부터 후근신경절(dorsal root ganglion, DRG)을 분리하여 슈반(Schwann) 세포와 뉴런 세포(neuronal cell)를 in vitro에서 각각 배양하였다. 유사 분열 억제인자로 처리한 뉴런세포와 정제된 슈반 세포를 함께 공동 배양을 하여 수초화를 발생시켰다. 이렇게 수초화된 공동 배양 세포에 herpes simplex virus-1를 감염시켜 탈수초화를 진행시켰다. 수초 형성의 존재를 의미하는 myelin protein zero(MPZ) 항체를 사용하고 전자 현미경을 이용하여 수초 발생 및 탈수초화 과정을 관찰하였다. 이 연구는 과학 기술부, ICT 및 미래 계획 (NRF-2016R1A2B4016552 및 2017R1A2B3005753)이 자금을 지원하는 국립 연구 재단 (NRF)을 통한 기초 연구 프로그램의 지원을 받았다.
The promoter of the HSV-1 VP16 gene contains binding sites for the cellular transcription factors such as USF, CTF, and Sp1, each of which affects basal level expression of the VP16 gene. Transcription of the VP16 gene was induced by viral immediate-early proteins, ICP0 and ICP4, in a synergistic manner but repressed by ICP22. To gain further insight into the role of ICP0 in the expression of the VP16 gene during virus infection, several mutants with deletions in each of their transcriptional regulatory elements were generated. According to transient gene expression assays of these mutants using the CAT gene as a reporter, the USF and CTF binding sites were necessary for efficient induction of the promoter in the presence of transfected ICP0 or during virus infection, whereas the Sp1 binding site had little effect on ICP0-mediated VP16 expression. These results indicate that the immediate early proteins of HSV-1 regulate expression of the VP16 gene during virus infection by modulating the activities of cellular transcription factors such as USF and CTF.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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