Various kinds of antibiotics are generally believed to have inhibitory effects on the antibody response. However, as polymyxin B which belongs to the cyclic polypeptide group of antibiotic was found to have some enhancing effects on the antibody response of rabbits to enterobacterial common antigen(CA) under specified conditions, experiments were carried out on this problem with the following results. 1. When mixture of polymyxin B and CA derived from Salmonella typhimurium(STM) was treated 30 minutes at $37^{\circ}C$ and injected three times into rabbits by intravenous route, the antibody response to CA was weaker than rabbits injected CA only. 2. Mixture of polymyxin B and CA showed a marked antibody production when injected into rabbits primed with small amounts of heat-extracted antigen of STM, while the injection of CA alone showed low titers of response. 3. Mixture of polymyxin B and heat-extracted CA-containing antigen of Escherichia coli 014 also showed a increased antibody production than CA alone in rabbits primed with antigen of STM. 4. The effect of polymyxin B appeared in different ways. This antibiotic did not enhance the CA antibody response in rabbits primed with small amounts of E. coli 0111 and 055, but enhance in rabbits primed with Shigella flexneri. 5. No enhancing effect on the antibody response was observed by polymyxin B in rabbits primed with CA. 6. No enhancing effect on the antibody response was also noted in rabbits primed with STM antigen in case polymyxin B and CA were administered simultaneously but in veins of different places. 7. Bacitracin did not enhance the CA antibody response in primed rabbits with STM antigen, but neomycin slightly enhance the response. 8. Lipopolysaccharide showed no priming effect on the CA antibody response, and no enhancement of the CA antibody response in rabbits printed with STM. 9. The priming effect of STM antigen against CA antibody response was very weak as compared with the effect of CA derived from STM antigen.
A procedure for extraction and purification of 8 kDa antigen of Brucella abortus RB51 was developed. Bacteria heat inactivated at $60^{\circ}C$, 30 min was extracted by 1% sarcosine and followed by fluid pressure liquid gel filtration chromatography of 2 series, Superose 12 HR 10/30 and Sephacryl S-100. There was produced $71.46{\mu}g/g$(wet) of 8 kDa antigen, and it resisted 1% trypsin, solved 1% triton X-100 higher than distilled water and inactivated 0.1% proteinase K. These results show that 8 kDa antigen may be a lipoprotein existed cell surface of B. abortus RB51. Also, we developed ELISA using purified 8 kDa surface antigen of Brucella abortus RB51 strain, its specificity and sensitivity was 95.0%, 98.6%, respectively. As compared with dot-blot assay using whole cell and ELISA using 8 kDa antigen, its correlation was 93.5%.
여러 다른 S. aureus strains및 토끼항체를 사용하여 항체감작을 시킬 때 나타나는 S. aureus의 자체응집을 방지키 위한 분석과 함께 cogglutination의 최적 조건을 확립하였다. 적정화된 coagglutination기법을 실험실과 현장에서의 edwardsiellosis의 진단에 응용하였을 때 약 $10\;{\mu}g/m1$의 E. tarda까지 검출 할 수 있었다. 더구나 이 방법은 E. tarda의 FKC, EDTA또는 열탕추출 항원에 대해서 까지 좋은 진단결과를 보여주었다. 현장에서 edwardsiellosis에 감염된 어류로부터 직접 분리된 E. tarda 균주들은 토끼 항체생성을 위해 사용된 E. tarda 219와 응집항체법및 cogglutination법에서 모두 교차반응을 보여 주었다. 이러한 교차반응의 정도는 현장에서 나타나는 여러다른 E. tarda 균주에 감염 될 수 있는 어류의 질병진단에 사용하기에 충분한 정도로 나타났으며 감염어의 조직마쇄물을 1000배 이상 희석하여도 토끼 항 E. tarde 항체로 감작시킨 S. aureus와 coagglutination 될수 있는 양의 E. tarda를 함유하고 있었다. 자연감염 또는 인위감염된 넙치, 틸라피아의 조직마쇄물, 열탕추출항원에 대한 이 방법의 적용 결과는 본방법이 특별한 장비없이 현장에서 질병진단 기법으로 사용할 수 있다는 것을 보여 준다.
어류의 edwardsiellosis를 진단하기 위한 solid phase ELISA법에 대한 최적화 분석을 실시하였다. 부분 정제한 E. tarda Edk-2에 대한 토끼 항혈청을 sodium bicarbonate 완충용액에 $50{\mu}g/ml$ 농도로 희석하여 overnight 반응시켜 주었을 때 polystyrene bead 표면의 항체 immobilization이 최적화되었다. $50{\mu}g/ml$의 biotin 표지화 항체와 1:2000으로 희석된 extravidin-peroxidase를 차례로 처리하였을 때 최적의 반응을 나타내었으며 이렇게 최적화시킨 정성적 solid phase ELISA법은 EDTA 추출법으로 조제된 항원에 대해서는 $1{\times}10^5$ cells/ml, 열 추출법으로 조제된 항원에 대해서는 $1{\times}10^5$ cells/ml의 검출한계를 나타내었다. E. tarda Edk-2에 대한 토끼 항혈청을 이용한 본 연구의 solid phase ELISA법은 우리나라 양어장의 넙치 병어로부터 분리한 여러 한국형 E. tarda 균주와도 높은 교차반응을 나타내었다. 이러한 것은 본 기법을 다른 지역에서 분리한 여러 strain의 E. tarda에 대한 진단을 위하여 본 실험의 항혈청을 사용하여 가능하다는 것을 보여 주었다.
Purpose: There is no clear evidence of the original cause of hypertrophic scar, and the effective method of treatment is not yet established. Recently the steps of searching in gene and molecular level are proceeding. we are trying to recognize the difference between keratinocytes of hypertrophic scar and normal skin. Then we do support the comprehension of the scar formation mechanism and scar management. Methods: Total RNAs were extracted from cultured keratinocytes from 4 hypertrophic scars and normal skins. The cDNA chips were prepared. A total of 3063 cDNAs from human cDNA library were arrayed. And the scanning data were analyzed. Results: On microarray, heat shock protein, pyruvate kinase, tumor rejection antigen were more than 2 fold intensity genes. Among them, heat shock 70 kd protein showed the strongest intensity difference. Conclusion: In this study, it can be concluded that heat shock proteins play an important role in the process of wound healing and scar formation. This study provides basic biologic information for scar research. The new way of the prevention and treatment of scar formation would be introduced with further investigations.
Recently developed cDNA microarray or DNA chip technology allows expression monitoring of expression of hundreds and thousands of genes simultaneously and provides a format for identifying genes as well as changes in their activity. In order to search for changes in gene expression after X irradiation in HL60 cells, cDNA microarray technique was done. In this study, expression of 588 human genes (including oncogenes, tumor suppressor genes, cell cycle regulator genes, intracellular signal transduction modulator genes, apoptosis related genes, transcription factor genes, growth factors and receptor genes, cytokine genes, etc) were analyzed. For cDNA microarray analysis mRNAs were extracted from control and 8 Gy-irradiated HL60 cells. As a result the changes in expression of several genes were observed. This alteration of gene expression was confirmed by reverse transcription-polymerase chain reaction. The expression of heat shock 60 KD protein, c-jun, erythroid differentiation factor, CPP32, myeloid cell nuclear differentiation antigen, MAP kinase-activated protein kinase, interleukin-8, monocyte chemotactic peptide 1 and RANTES genes was increased, but the expression of p55CDC gene was decreased after X irradiation.
본 실험은 육가공품에 첨가된 대두단백질(soy protein)을 정량하기 위한 면역분석법의 개발을 위해 고기 혼합물, 유화형소세지 및 시판육제품을 사용하여 정량실험을 설시하였다. 본 실험에 사용한 standard 항원을 추출과정 전과 후에 가열처리하여 반응성을 조사한 결과 가열온도에 따른 반응성 변화의 유의성은 인정되지 않았다. 고기혼합물과 유화형소세지의 대두단백 회수율에서 가열온도에 따른 반응성 변화의 유의성은 인정되지 않았으며, 지방 및 첨가된 향신료에 의한 반응성의 방해는 나타나지 않았다. 실험의 연관성은 대두함량이 높은 10% 첨가구에서 낮은 첨가구(2, 5%)보다 다소 낮게 나타났다. 시판 육제품의 대두단백 회수율은 제품간의 차이를 나타냈으며, 생야채와 소맥전분 등을 첨가한 일부 제품에서는 다소 낮게 나타냈으나, 실험을 통한 회수율의 연관성은 인정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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