포식성 무당벌레(Harmonia axyridis)의 난(卵)을 대상으로 저독성 약제를 선발하기 위해 농약 처리 후 esterase 활성에 대해 조사하였다. 무당벌레의 난에는 3개의 esterase bands가 존재하였고 esterase의 활성에 영향을 주는 살충제(Methidation, Chlorpyrifos, Phenthoate)는 유기인계인 것으로 나타났다. 살균제로는 트리아졸계 계통의 Hexaconazole과 Triflumizole 그리고 피리미딘계의 Nuarimol에서 esterase의 활성 저해가 관찰되었다. 선발된 농약을 바탕으로 무당벌레의 산란율과 부화율을 조사하였다. Esterase에 강한 활성저해를 보였던 농약에서는 산란율과 부화율도 낮게 나타났으며, esterase에 약하게 혹은 전혀 영향을 주지 않았던 농약에서도 정도 차이는 있으나 산란율과 부화율에 영향을 주는 것으로 관찰되었다.
무당벌레(Harmonia axyridis)의 중장 내에서 먹이 단백질이 소화되는 과정을 연구하기 위하여 진딧물과 생간의 AP를 모델 단백질로 이용하였다. 천역 먹이인 긴꼬리볼록진딧물(Megoura crassicauda)과 인공먹이인 닭의 생간은 각각 고유의 acid phosphatase(AP)를 가지고 있으며, 무당벌레의 중장 내부로 들어온 후에도 활성을 나타내었다. 무당벌레의 장에서 자체적으로 생성하여 중장 내부로 분비하는 AP는 관찰되지 않았다. 무당벌레의 단백질 소화력은 먹이의 종류에 따라 차이를 나타내는 경향을 보였다. 생간의 AP는 무당벌레 중장내에서 12시간이 지나면 거의 활성을 잃어 버리나 긴꼬리볼록 진딧물의 AP는 24시간이 경과하여도 강한 활성을 나타내었다.
Random genes were screened in two transforming ways to investigate the new genes of a ladybug using the Harmonia axyridis cDNA library stock cell cloned in the LITMUS 28i vector in a previous study. Phenotypic variation was observed after injection of the synthesized double-stranded RNA through the in vitro transcription process. The cDNA library of H. axyridis was transformed into E. coli $DH5{\alpha}$ and 10B competent cells by heat shock. Analysis of the nucleotide sequences of the 42 clones with the insert DNAs revealed that 21 clones were homologous with the genes of insects, and only one clone had a gene from H. axyridis. Thirteen of the 21 insect genes were homologous with genes from coleopteran insects. Fourteen genes were selected, which were identified by the gene screening results, and were synthesized as double-stranded RNA through in vitro transcription. One microgram of the synthesized double-stranded RNA between segments T1 and T2 were injected using a syringe into each anesthetized fourth larvae which were under 2 days old. As a result, a phenotypic variation appeared in the larva injected with the two genes. While the eggs of H. axyridis injected with distilled water hatched out three days after oviposition, the eggs of H. axyridis injected with dsHma 06 did not hatch but become shrivel a week after oviposition. Most of the H. axyridis injected with dsHma 08 died and were unable to complete the pupation or eclosion during ecdysis.
1. Author has surveyed the frequency, geographic variation and micro-geographic variation of the elytral pattern types and the elytral edge of the population of lady-beetle, Harmonia axyridis Pallace which was collected in Seoul and the other 6 localities in Korea. 2. The number of specimen collected were 3.051 in which succinea occupied 88.32 % : Axyridis, 1.00% : spectabilis, 6.145 : and Conspicua , 4.545. 3. Of all 84.80% were found to have elytral edge. 4. There was a little difference in compositional proportation of the above four types to population and in the frequency of elytral edge between the population of west seaside and that of inland of Korea. 5. An interesting micro-geographic variation was observed in Dae-Chun, a beach located on west seaside of south Korea. In this locality , the Succinea occupied 45.23% and 27.805 were found to be provided with elytral edge in the specimen collected in pine trees ( Pinus thunbergii Parlatore), while in the specimen collected in burley field, oak, willow etc. 92.00% were Succinea and 90.93% were found to have elytral edge.
진딧물방제용 살충제중 복숭아혹진딧물과 포식성 무당벌레에 대해 선택독성을 나타내는 약제를 선발하고 그 약제가 무당벌레의 성충수명, 산란수 및 차세대의 부화율에 미치는 영향을 조사하였다. 모든 실험은 진딧물의 추천농도(ppm)에서 검정하였다. 진딧물방제용 살충제 중 pirimicarb(162.5 ppm), fenvalerate(50 ppm), eldosulfan(577.5 ppm)은 추천농도(ppm)에서 무당벌레에 대해 살충율이 각각 0, 20, 22.5%로 선택독성을 나타내었다. Endosulfan과 fenvalerate은 무당벌레의 알과 유충에 대해서 48%이상의 높은 살충율을 나타내었으나, pirimicarb는 독성을 나타내지 않았다. 또한 pirimicarb는 무당벌레의 산란전기, 성충수명, 산란수 및 차세대의 부화율에 영향을 미치지 않았으며, fenvalerate와 endosulfan은 크게 영향을 미치는 것으로 나타났다. 이상의 결과에서 포식성 무당벌레에 독성이 적은 pirimicarb는 복숭아혹진딧물에 대한 종합적방제의 일환으로서 생물적방제에 이용 가능할 것으로 생각된다.
무당벌레(Harmonia axyridis)의 기본적인 행동학적 특성을 살펴보았다. 무당벌레는 먹이인 진딧물을 탐색할 때에 주로 작은턱수염을 이용하여 접촉감각에 의한 기주탐색을 하고 있다. 다른 한편으로는 무당벌레가 복숭아혹진딧물을 공격하게 되면 공격받은 진딧물 주위의 다른 복숭아혹진딧물은 근처의 잎으로 이동하거나 아래로 떨어져 도망하는 방어기작이 관찰되었다. 무당벌레가 먹이탐색을 위하여 이동하는 시간과 먹이를 잡고 섭식하는 시간은 무당벌레의 발육단계에 따란 현저한 차이를 나타내고 있었다. 무당벌레의 포식력을 조사한 결과 1일 평균 복숭아혹 진딧물은 약 120마리, 목화진딧물은 약 257마리를 섭식하였다. 오이 잎과 토마토 잎에 산란된 온실가루이 알은 무당벌레 3령충의 먹이로 제공하였을 경우 오이 잎에서는 2,420개, 토마토 잎에서는 2,750개의 알을 섭식하였으나, 진딧물을 제공한 무당벌레 유충과는 달리 정상적인 발육이 이루어지지 않았다.
무당벌레(Harmonia axyridis)는 종내에서 초시색상패턴이 매우 다양하게 존재한다. 본 논문에서는 서로 다른 색상패턴의 무당벌레를 대상으로 amplified fragment length polymorphism (AFLP)을 실시하여 무당벌레의 초시색상 패턴간 유전형질의 차이를 확인하고자 하였다. 총 28 개의 프라이머 조합으로 실험을 실시한 결과, 총 2,741 개의 밴드가 검출되었다. 그 중 20 개의 밴드(S1-S20)만이 특정 색상패턴에서 나타났다. 이들 가운데 9 개의 밴드를 색상에 연관된 AFLP 후보 지표로 선발하였다. 밴드 가운데 S1과 S2, S20은 Succinea 1, 2 변이형에 공통적으로 나타났으며, S3와 S5는 Conspicua 변이형에 특이적이었다. 또한 S13는 Spectabilis 변이형에, S15와 S18, S19는 Succinea 2 변이형에 특이적이었다. 특정 색상패턴에만 나타나는 9 개의 AFLP 지표들은 cloning을 통해 염기서열 분석을 실시하였고, GenBank를 이용해 다른 염기 서열과 비교를 해보았지만 아무런 상동성도 찾을 수가 없었다. 무당벌레 종 내 유전적 다양성을 평가한 결과, Spectabilis가 Conspicua보다 Succinea 변이형에 높은 유사성을 보였다. 색상에 연관된 AFLP 후보 지표를 기준으로 sequence characterized amplified region (SCAR) 지표로 변환하여 9 개의 AFLP 분자지표들 가운데에서 5 개만이 SCAR 지표로 전환될 수 있었으며, 이를 통해 AFLP 지표가 무당벌레의 색상과 연관되어 있는지 확인할 수 있었다.
무당벌레(Harmonia axyridis)성충 더듬이에 분포하는 감각기를 주사전자현미경으로 관찰하였다. 무당벌레 성충 더듬이에서 형태적으로 크게 차이를 보이는 5종류의 감각기, $B\ddot{o}hm$, Basiconic, Chetiform, Trichoid 그리고 Coeloconic sensilla를 관찰할 수 있었다. $B\ddot{o}hm$ sensilla는 자루마디와 팔굽마디 기부안쪽의 등쪽면과 배쪽면에서만 관찰되었고, 이것은 분포된 위치로 미루어 더듬이의 움직임과 위치를 확인하는 자기반응감응성 감각기로 보여진다. Basiconic sensilla와 Chetiform sensilla는 형태적 차이에 의하여 3가지 subtype으로 나눌 수 있었으며, Trichoid sensilla는 암 수컷 더듬이 모두에서 더듬이 말단의 2마디에서만 확인되었다. 무당벌레 성충 더듬이에서 관찰된 sexual dimorphism은 더듬이 감각기의 분포와 종류가 있었는데 이것은 암컷과 수컷간의 더듬이 감각기의 분포가 다르게 나타났으며, 감각기의 다양성이 가장 높게 나타난 말단마디의 배쪽면에서 관찰된 Coeloconic sensilla는 수컷에서만 관찰되었고, Trichoid sensilla의 경우 수컷보다 암컷에서 더 많이 관찰되었다. 이러한 sexual dimorphism은 동종의 성상호간 통신에 이용되는 것으로 보여진다.
In order to cloning of PPO gene as a melanin formation related genes involved in hardening and pigmentation of insect integument or wing, we cloned cDNA and analyzed the sequence of PPO gene of H. axyridis. PPO2 primer were designed based on the sequences of PPO genes of Tribolium castaneum and Drosophila melanogaster, and then plasmid DNA were cloned from PCR products obtained from different two color patterns. When the plasmid DNA band pattern were digested by restriction enzymes, BamH1, Xba1, and EcoR1, we found same size band pattern. However, this sequence was not homologous to sequence of T. castaneum PPO gene. Using the primer designed based on the sequence of D. melanogaster, 209 bp PCR product was observed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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