• 한국수정란이식학회지
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• 제27권4호
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• pp.253-258
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• 2012

This study was carried out to effects of ethylene glycol concentration, sucrose and culture day of in vitro production embryo on slow-down freezing in Hanwoo. 6, 7, 8 and 9 day embryos produced in vitro were frozen using 1.8M EG+0.1M sucrose, 1.8M EG+0.5% BSA and 1.5M EG+0.1M sucrose media. Survivability was confirmed after frozen-thawed 24 and 48h and ICM, TE cell number were counted by Hoechst 33342 and PI staining after frozen-thawed 24h. As a result, 1.8M EG+0.1M sucrose group was most significantly (p<0.05) higher compared with the other treatment groups on survivability, TE and total cell number after frozen-thawed 24h ($94.2{\pm}2.6%$, $94.67{\pm}3.4$ and $129.67{\pm}5.5$). ICM number did not found significant (p<0.05) differences between the three treatment groups. in 6, 7, 8 and 9 day of embryos using three types of freezing media, frozen-thawed, 1.8M EG+0.1M sucrose groups with embryos cultured 8 day was significantly (p<0.05) highest survivability to $98.3{\pm}1.7%$ after frozen-thawed 24h. 1.5M EG+0.1 sucrose group with embryos cultured 9 day was significantly higher survivability than group of embryos cultured 8 day after frozen-thawed 24 and 48h. In conclusion, 1.8M EG+0.1M sucrose media is considered to be effective to cryopreservation of embryos cultured 8 and 9 day.

• 한국수정란이식학회지
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• 제31권3호
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• pp.221-226
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• 2016

The aim of the present study was to assess the embryo development and survivability of post-thawed bovine embryos produced in vitro by addition of cysteine. The rates of metaphase II formation were not differed significantly among three groups(TCM199 73.8%, TCM199 with 0.3% cysteine 76.9%, TCM199 with 0.5% cysteine 83.8%, respectively). No difference of cleavage rate(70.6~74.6%) was seen among three culture medium(TCM199 70.6%, CR1aa 71.3%, SOF 74.6%) with 0.5M cysteine. however, Significantly(P<0.05) higher development rate into blastocyst stage by 0.5M cysteine addition was obtained in SOF medium(35.6%) than in TCM199(27.6%) or CR1aa(26.6%), however no significant differences in the cleavage rates were among three culture medium. After frozen the blastocysts cultured with 0.5M cysteine, The re-expansion rates were 61.3%~86.4% among groups, and hatching rates were 26.3%~46.9% among groups, the rates of re-expansion and hatching were significantly(P<0.05) higher in SOF medium(86.4% and 46.9%) than those in TCM199(61.3% and 26.3%) and CR1aa medium(87.1 and 44.4%). After thawing, the blastocyst re-expansion rate was significantly(P<0.05) higher in in vivo (87.1%) and in vitro (70.3%) embryos. In conclusion, our results demonstrate that supplementation of IVM and IVC medium with 0.5M cysteine improved the quality of in vitro production embryo and post- thawed embryo. Future studies comparing these media systems in well-designed trials should be performed.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제65권4호
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• pp.779-791
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• 2023

This study aimed to assess the effects of embryonic developmental stage, quality grade, and fresh or frozen/thawed conditions on the pregnancy rate and sex ratio of live offspring in Hanwoo (Bos taurus coreanae) cows. The quality and developmental stage of in vivo-derived (IVD) transferred embryos were evaluated using the standard criteria of the International Embryo Technology Society. The recipient cows were synchronized using conventional (estradiol benzoate and progesterone) protocols before embryo transfer. Embryos were transferred to 297 cows, and pregnancy was monitored for 60-70 days after embryo transfer. The pregnancy rates of fresh and frozen/thawed embryos were 56.90% and 52.49%, respectively. Pregnancy rates varied according to embryo quality (56.18% for grade 1 vs. 36.67% for grade 2). Pregnancy rates also varied by developmental stage and cryopreservation (67.86% vs. 63.49% for stage 4-1, 64.00% vs. 54.72% for 5-1, and 50.00% vs. 47.83% for 6-1, in fresh embryos vs. frozen/thawed embryos, respectively). For stage 7-1, the pregnancy rates were 72.73% for fresh embryos and 20.00% for frozen/thawed embryos. In 66 fresh embryos, the sex ratio of live offspring was 5:5, whereas it was 4(female):6(male) for frozen/thawed embryos among the 95 frozen/thawed embryos. The miscarriage rate was approximately 3% higher for frozen/thawed embryos than for fresh embryos (18.1% for fresh vs. 21.1% for frozen). Seasonal fertility rates were 33.3% in spring, 55.67% in summer, 52.8% in autumn, 60.0% in winter. The following male-to-female ratios were observed in different seasons: 6.7:3.3 in spring, 4.0:6.0 in summer, 5.5:4.5 in autumn, and 3.3:6.7 in winter. The current data revealed no significant differences in pregnancy rates between fresh and frozen/thawed IVD embryos. However, there was a lower pregnancy rate with advanced-stage frozen/thawed embryos (stage 7-1). The current study provides comprehensive results for the better optimization of embryo transfer in Hanwoo cattle to obtain the desired fertility rate, pregnancy rate, and sex ratio of calves. These results provide important insights into the factors that influence the viability and success of IVD embryo transfer in Hanwoo cows and may have practical applications for improving breeding programs and reducing production costs.

• 한국수정란이식학회지
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• 제25권3호
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• pp.141-144
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• 2010

In vivo embryo produced from Hanwoo donor cows were collected and transferred to Hanwoo recipients. Cows, at random stages of the estrous cycle, received Progesterone Releasing Intravaginal Device (CIDR-plus, InterAg, New Zealand) together with injection of 1 mg estradiol benzoate and 50 mg progesterone, and gonadotropin treatment began 4 day later. For superovulation, a total of 28 mg FSH was intramuscularly injected twice a day in the way of decreasing doses 4 day (5, 5, 4, 4, 3, 3, 2 and 2 mg). Twenty one Hanwoo donor cows were flushed on day 7 of estrus cycle with same FSH and artificial insemination by the same technicians. Embryos were recovered 7 days after the second insemination by flushing the uterus with Embryo Collection Medium. The results obtained were as follows: The rates of transferable embryos were 50.3%, and 78 fresh embryos at morulae and blastocysts stage were transferred into Hanwoo recipients on day 7 of estrus cycle. The pregnancy rates were first embryo transfer 55.6%, 2nd 62.9% and 3rd 57.9%, respectively. In conclusion, These results suggest that CIDR-based superovulation protocol may be effectively used for production of superior Hanwoo embryos. Also, since it seems the condition of recipient cows greatly affect pregnancy rate, it is very important to evaluate recipient for effective cattle production.

• 한국수정란이식학회지
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• 제21권3호
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• pp.191-198
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• 2006

본 연구는 $2001{\sim}2005$년(5년간) 제주도에서 사육중인 제주 한우와 흑우를 체내 수정란의 생산과 수정란 이식 기술을 통하여 조기 증식하고자 실시하였다. 한우 고등 등록우 286두와 흑우 경산우 69두(총 355두)에 대하여 발정 주기에 관계없이 CIDR를 질내에 삽입 후 7일째부터 성선 자극 호르몬($Folltropin^{(R)}-V$) 400 mg을 50 mg씩 균등하게 나누어 4일간 12시간 간격으로 근육주사하였다. 투여 6회째에 CIDR를 제거하였으며, 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25mg을 근육 주사하여 과배란을 유기하였다. 공란우의 인공수정은 $PGF_{2{\alpha}}$투여 후 발정을 확인하고 12 시간 간격으로 3회 인공 수정하였으며, 2회 인공 수정시 GnRH $250{\mu}g$을 근육 주사하였다. 수정란 회수는 1차 인공 수정 후 $7{\sim}8$일째에 비외과적 방법으로 채란하였다. 수란우는 CIDR를 7일간 삽입하였다가 제거하는 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 근육 주사하여 공란우와 발정을 동기화 시켰다. 수정란 이식은 발정이 동기화된 수란우 1,219두에 대하여 6명의 수정란 이식 시술자가 비외과적 방법으로 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다. 한우 및 흑우 공란우의 평균 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수는 각각 7.4개 및 4.7개 였으며, 회수 총 난자수는 2 품종간에 차이가 없었으나, 이식 가능 수정란 수는 한우(5.0개)가 흑우(3.5개)에 비해 많았다(p<0.05). 공란우의 반복 과배란 처리에 따라 흑우에서는 과배란처리 두수 대비 수정란 채란우 비율이 감소되었으며(p<0.05), 한우에서는 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수의 감소가 나타났다(p<0.05). 과배란 처리 계절에 따른 수정란 회수 성적은 여름(5.6개)이 겨울(2.9개)에 비해 이식 가능 수정란의 수가 많았다(p<0.01). 수정란 이식 후 수태율은 평균 40%를 나타내었으며, 공란우의 품종간 차이가 없었으며, 이식년도가 2001년에서 2004년으로 경과될 때 수태율이 증가하였으며(p<0.05), 수정란 이식 시술자에 따른 수태율의 차이가($33.0{\sim}45.9%$) 인정되었다(p<0.01). 본 연구의 결과는 제주 한우 및 흑우에서 CIDR를 이용한 과배란 처리 및 수란우의 발정동기화 처리는 한우 체내 수정란의 안정적인 생산과 수란우의 준비가 가능함을 보여 주었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제23권4호
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• pp.281-291
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• 1999

본 실험은 체외 생산된 한우 배반포기배에 적합한 동결 / 융해 방법을 찾고자 실시하였다. 체외배양 7일째에 생산된 배반포기배는 동해제 EFS40(40% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.3 M sucrose 그리고 10% FBS가 첨가된 m-DPBS)과 embryo container인 EM grid (V-G) 또는 straw(V-S)를 이용해서 초자화 동결하였다. 동결과 융해는 두 방법 모두 2 단계로 실시하였으며, 처리시간은 V-G 방법이 2 분과 3분, V-S 방법이 3.5분과 10분 각각 소요되었다. 체외 생존능 평가는 융해 후 24시간째의 재팽창율과 48 시간째의 부화율로 조사하였다. 본 실험에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 팽창 배반포기배를 이용하여 동결액 노출과 동결과정의 냉해가 배의 생존에 미치는 영향을 조사하였던 바, 융해 후 24시간째, 동결액 노출군 (100.0%)의 결과는 대조군 (100.0%)과 차이가 없었으며, 두 동결군 (V-G: 87.8%, V-S: 77.8%)의 생존율과 비교해 볼 때 유의하게 높았다 (P＜0.00l). 그러나, 융해 후 48시간째 각 처리군의 부화율을 조사하였던 바, V-G 군 (67.8%)은 V-S 군 (53.3%)보다 유의하게 높게 나타났으며 (P＜0.05), 동결액 노출군 (73.3%)과도 유의한 차이를 나타내지 않았다. 또한, 배발달단계 (초기, 팽창, 부화초기 배반포)와 동결에 사용된 embryo container(EM grid, straw)가 체외 생존율에 미치는 영향을 동시에 비교하였던 바, embryo container 에 상관없이 빠르게 발달된 배반포기배가 느리게 발달하는 난자군보다 유의하게 높은 생존율을 나타내었다 (초기 : 57.1, 24.4%; 팽창 : 84.7, 60.6%; 부화초기 : 91.7, 80.0%)(P＜0.001). 특히, 팽창 배반포기배와 부화초기 배반포기배에서, 융해 후 48시간째, V-G군(67.8, 95.0%)의 부화율이 V-S군(53.0, 65.0%)보다 유의하게 높게 나타나 동결시 EM grid 의 유용성을 확인할 수 있었다 (P＜0.05, P＜0.001). 따라서, 한우 배반포기배는 EM grid를 사용하는 초자화 동결방법으로 간편하면서도 효율적이고 성공적으로 동결보존 할 수 있다는 것을 알았다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권2호
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• pp.97-108
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• 2003

체외수정된 한우 수정란을 PCR 기법에 의한 성감별을 위해 생검하여 회복시까지 1∼2시간 동안 배양하였다. 이 성감별된 한우 수정란을 2000년 2월부터 2001년 2월까지 한우 49두와 젖소 16두에 이식하였다. 수정란이 이식된 65두의 수란우중 14두(한두 12두, 젖소 2두)가 성감별 결과와 동일한 성의 산자를 생산하였고, 전체 수태율은 21.5%를 나타내었다. 1. 총 65두의 수란우중 웅성 수정란은 35두에 자성 수정란은 30두에 이식되었고 이중 분만된 산자 14두중 웅성은 6두, 자성은 8두였으며 PCR에 의한 성감별 정확도는 100.0%를 나타내었다. 2. 성감별된 한우 수정란은 한우와 젖소에 이식한 후 수태율은 각각 24.5, 12.5%를 나타내었다. 3. 성감별된 한우의 신선수정란과 동결-융해된 수정란의 이식후 수태율은 각각 23.5, 14.3%를 나타내었다. 4. 성감별된 한우 수정란의 이식 시기에 따른 수태율은 봄, 여름, 가을, 겨울에 각각 11.8, 29.4, 23.4, 20.0%를 나타내었다 5. 성감별된 한우 수정란의 상태에 따른 이식후 수태율은 excellent, good, fair군에서 각각 41.7, 30.0, 0.0%를 나타내었다. 6. 성감별된 한우 수정란의 이식시 수란우의 자궁각 두께에 따른 이식후 수태율은 0, +, ++, +++군에서 각각 71.4, 18.9, 11.8, 0.0%를 나타내었다. 7. 성감별된 한우 수정란이 주입된 수란우 자궁각 부위에 따른 이식후 수태율은 자궁각 선단부, 중심부, 미부에서 각각 30.0, 20.0, 10.0%를 나타내었다. 8. 성감별된 한우 수정란의 이식시 수란우의 황체의 상태에 따른 이식후 수태율은 excellent, good, poor군에서 각각 41.2, 14.3, 15.4%를 나타내었다. 9. 성감별된 한우 수정란을 straw에 장착후 이식시까지 10, 15, 20, 25, 30분 경과에 따른 이식후 수태율은 18.2, 30.0, 30.0, 0.0, 25.0%를 나타내었다. 10. 성감별된 한우 수정란의 이식시 수란우의 산차에 따른 이식후 수태율은 1산차, 2산차, 3산차, 4산차에서 각각 26.5, 19.1, 14.3, 0.0%를 나타내었다. 이상의 결과에서 성감별된 수정란의 이식시 양호한 수태율을 얻기 위해서는, 신선수정란이 동결수정란 보다 유리하다는 점과 생검후 수정란의 회복상태, 수란우의 자궁각 두께, 수정란의 수란우 자궁각 주입부위, 수란우의 황체 상태, 이식시까지 소요시간, 수란우의 산차를 고려해야 한다는 것을 알 수 있었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제15권3호
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• pp.255-261
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• 2000

The objective of this study was to improve the efficiency of bovine embryo transfer by transferring of Hanwoo embryos into Hanwoo or Holstein recipients. The cryopreserved or fresh in vitro produced(IVP) embryos were transferred into uterine horn contralaterally or ipsilaterally to the corpus luteum. The recipients were inseminated by artificially on the next day of estrus. The pregnancy was diagnosed by rectal palpation at 60∼90 days after transfer of the embryos. The pregnancy rate by transfer of one or two embryos was 78%(7/9) and 74%(31/42), respectively. The pregnancy rates according to the grade of corpus lutea of recipients was 75% (20/27) and 82.0%(18/22) at the grade of A and B, respectively. Ten(67.0%) of 15 Holstein recipients transferred with IVP Hanwoo embryos and 5(42.0%) of 12 Holstein recipients transferred with frozen IVP Hanwoo embryos were pregnant. The single and twin calving ratio in Hanwoos was 77.0%(10/13) and 23.0%(3.13) in the recipients transferred with IVP embryos and 64.0%(7/10) and 27.0%(3/10) in the recipients transferred with frozen IVP embryos, respectively. Twenty-four pregnant cows following transfer of IVP embryos, 21(88.0%) calved the normal calves, and 2(8.3%) aborted. When the frozen IVP embryos were transferred, 16 pregnant cows calved 14(88.0%) normal calves and 2(13.0%) aborted. In conclusion, when one or two IVP bovine embryos were transferred into recipients, the A and B grade of corpus luteum resulted in high pregnancy rates. For the production of twin calves, transfer of the IVP or frozen IVP embryos could be suitable.

• 한국수정란이식학회지
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• 제16권2호
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• pp.73-78
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• 2001

본 연구는 한우 체외수정란에 외래 유전자를 미세현미 주입한 후 체외 배발달을 조사하였다. DNA 미세주입은 체외수정 18~20시간 후에 DNA를 미세주입하였으며 체외 배발달율은 7일간 배양 후 조사하였다. 미세현미 주입 후 난할율은 36.3%로 대조구의 난할율 66.4% 보다 유의적으로 낮았으며(p<0.05) DNA가 주입된 수정란 중 상실배와 배반포배까지 발달율은 각각 5.6%와 1.9%로 대조구의 20.5%와 12.8%에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다. 체외발달 배양액 내 L-ascorbic acid와 $\alpha$-tocopherol 첨가 배양시 상실배와 배반포배 발달율이 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다.(p<0.05) 따라서 미세현미 주입된 수정란의 체외 배발달 배양액에 항산화제의 첨가는 높은 체외 배발달율을 얻을 수 있으며 또한 체외성숙과, 체외 수정된 한우수정란을 이용하여 형질전환 한우 생산이 가능하리라 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제15권1호
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• pp.1-8
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• 2000

The ultrasound-guided oocytes cllection (ovum pick-up ; OPU) has become a substitution for superovlation in cattle. The objective of this study was to examine the effect of OPU frequency on the in vitro production of embryos in Hanwoo cattle. Six cycling Hanwoo cows were distributed into two groups for either once or twice weekly OPU sessions. Oocytes were collected by ultrasound-guided follicle aspiration(SA600) using a 6.5HMz transducer and attached with 18 gauge needle, with vacuum pressure of 40 mmHg. The cumulus-oocyte complexes (COCs) collected from each donor were matured in TCM 199 supplemented with 10% fetal bovine serum at 5% CO2 in air at 38.5$^{\circ}C$ for 22h and in vitro matured oocytes were co-incubated with sperm(separated by Percoll gradient) for 6h. The zygotes were co-cultured on cumulus cell monolayer in 10ul droplets in the same culture medium and conditions used for IVM for 7 days. On Day 7 of culture, development to blastocysts was examined. Although the number of oocytes collected was variable depending on individuals, overall embryo production in the twice per week OPU sessions was better that in the once per week sessions(6~21 vs 2~7 blastocysts produced, respectively). Two cows(E, A) were good oocyte donors and embryo production was superior in cow C ; however, cow F was a poor donor as compared to the others. In conclusion, these results suggest that for embryo production, twice weekly OPU sessions were better than once per week for producing embryos in vitro from Hanwoo cattle.