• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제34권8호
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• pp.2256-2260
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• 2013

A new quinoline-based acylhydrazone (1) has been synthesized and applied as a fluorescent probe. Probe 1 exhibits high selectivity and sensitivity to $Cu^{2+}$ with fluorescence "ON-OFF" behavior in HEPES buffered (1‰ DMSO, HEPES 20 mM, pH = 7.4) solution. The on-site generated 1-$Cu^{2+}$ complex displays excellent selectivity to sulfide ions with fluorescence "OFF-ON" performance through copper displacement approach.

• 농업과학연구
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• 제23권2호
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• pp.212-218
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• 1996

본 연구는 체외에서 성숙 및 수정된 돼지 체외 수정란을 두 종류의 서로 다른 배양액에 단층난구 세포와 공배양하였을 경우 배발달에 미치는 영향을 조사하기 위하여 실시하였다 본 연구에서 얻은 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 단층난구세포와 함께 초기체외수정란을 Ham's F-10에서 배양한 결과 2-, 4-, 8~16-세포기, 상실배/배반포기로 발달하는 비율은 각각 48.7%, 40.5%, 34.8% 및 17.0% 였으며, TCM-HEPES에서는 각각 48.3%, 35.6 %, 22.1% 및 13.4%였다. 2. 단층난구세포와 공배양을 하지 않고 단순하게 배양액으로만 배양하였을 때 상실배/배반포기까지의 발달률은 0.0~1.0%로서 극히 저조하였다. 특히, 대부분의 수정란이 4-세포기 단계에서 발달이 정지되었다. 3. 돼지 체외수정란을 단층난구세포와 공배양하였을 때 단순배양한 결과보다 유의 적으로 높은 상실배/배반포기의 발달률을 나타냈으며 (P<0.05), 두 배양액간에는 유의차가 인정되지 않았다.

• 한국패류학회지
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• 제26권2호
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• pp.145-149
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• 2010

피조개, Scapharca broughtonii (Schrenck) 정자의 냉장보존을 위해 희석액에 따른 보존효과를 비교하였다. 피조개 정액을 채취하여 600 mM NaCl, Stein solution, 300 mM, 600 mM glucose (10 mM Hepes-pH 7.8), Ringer's solution (230 mM NaCl, 8 mM KCl, 2 mM $CaCl_2$, 3.7 mM $MgCl_2$, 0.2 mM $NaHCO_3$, 10 mM Hepes-pH 7.8), 20%, 25% ASW (NaCl 2.7 g + KCl 0.07 g + $CaCl_2$ 0.12 g + $MgCl_2$ 0.46 g + $NaHCO_3$ 0.05 g + distilled water 100 ml)를 각각 사용하여 $4^{\circ}C$에서 보관하였다. 피조개 정자의 보존효과는 정자의 운동성과 생존율로 평가였다. 피조개 정자는 Ringer's solution에서 7일간 냉장 보전하였을 때 운동성과 생존율을 가장 높았으며, 희석액의 적정 pH는 7.5 이었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제27권3호
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• pp.215-223
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• 2003

본 연구는 체외성숙된 돼지난포란을 액상정액으로 수정시 수정시간과 배양배지가 난포란의 발달에 미치는 영향을 조사하기 위하여 실시하였다. 정자농후정액 (30∼60 ml)을 채취하여 실온에서 2시간 정도 서서히 냉각시킨 후, 정액을 15 ml 튜브에 담아 800${\times}$g로 10분간 원심분리하였다. 상층액은 버리고 하부의 정자는 5 ml LEN 희석액으로 1${\times}$$10^{9}$ 전자/ml가 되도록 재희석하였다. 희석된 정액은 4$^{\circ}C$ 냉장고에 보존하였다. 미성숙 난모세포의 성숙에 사용된 배지는 26.19 mM sodium bicarbonate, 0.9 mM sodium pyruvate, 10 $\mu\textrm{g}$/ml insulin, 2 $\mu\textrm{g}$/ml vitamin B$_{12}$ , 25 mM HEPES, 10 $\mu\textrm{g}$/ml bovine apotransferrin, 150 $\mu$M cysteamine, 10 IU/ml PMSG, 10 IU/ml PMSG, 10 IU/ml EGF, 0.4% BSA, 75 $\mu\textrm{g}$/ml sodium penicillin G, 50 $\mu\textrm{g}$/ml streptomycin sulfate그리고 10% pFF를 첨가한 TCM-199 배지였다. 22시간 성숙 배양한 후 난모세포는 cysteamine과 hormone들을 배제한 후 38.5$^{\circ}C$, 5% $CO_2$ incubator에서 22시간 더 성숙시켰다. 성숙된 난모세포는 채취 후 2일간 4$^{\circ}C$에 보존된 액상정액으로 수정되었다. 난모세포는 500 $\mu$l mTBM 수정 배지에서 1${\times}$$10^{6}$ 정자/ml의 농도로 1, 3, 6 그리고 9시간 동안 수정시켰다. 그 후 난모세포는 500 $\mu$l NCSU-23, Hopes buffered NCSU-23, PZM-3 그리고 PZM-4 배양배지에 옮겨서 6, 48 그리고 144시간을 더 배양하였다. 정자침투율, 웅성전핵형성율 그리고 난모세포의 난할율은 6 및 9시간 수정시간에서 1 및 3시간 수정시간 보다 높았다. 6시간 수정시 배반포형성율 (33.6%)은 1, 3 그리고 9시간 수정시 배반포형성율 (11.4, 23.0 그리고 29.6%) 보다 높았다. 배반포의 평균세포수는 6, 9, 3 그리고 1시간 수정시 각각 32.9, 27.6, 26.3 그리고 24.4개 였다. 분할된 난모세포의 배반포형성율 그리고 배반포의 평균세포수는 NCSU-23, PZM-3 그리고 PZM-4 배양배지보다 HEPES buffered NCSU-23 배양배지가 우수하였다. 결론적으로 4$^{\circ}C$ 보존 돼지액상정액은 체외성숙된 돼지 난모세포의 체외수정에 사용될 수 있음이 입증되었다. 또한 체외성숙된 돼지 난모세포는 500 $\mu$l mTBM 수정배지에서 1${\times}$$10^{6}$ 정자/ml로 6시간 공배양시키는 것이 바람직하며, HEPES buffered NCSU-23 배양배지에서 배양하는 것이 좋다는 결과를 얻었다.

• 한국임상수의학회지
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• 제7권2호
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• pp.517-519
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• 1990

소 난소로부터 난자를 채취하여 체외성숙과 체외수정을 실시하였다. 난의 성숙배양을 위한 배양액은 소 태아혈청을 첨가한 TCM 199으로 $CO_2$배양기에서 24시간 배양하였다. 체외수정에는 동결융해정액을 사용하였으며 Caffeine과 Ca Ionophore 처리후 매정에 공하였다. 배양난자중 40%가 Metaphase II까지 성숙하였다. 성숙율에 대한 소 태아혈청의 농도변화와 HEPES 첨가여부의 효과는 없었다. 체외수정율과 분할율의 성적은 각각 23.1%와 14.4%였다.

• 약학회지
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• 제40권1호
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• pp.59-64
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• 1996

Gram-positive bacteria, Bacillus subtilis BR151 and Staphylococcus aureus RN4220 were transformed with high efficiency by electroporation. The cells were incubated until late log phase, washed three times with 10% glycerol, 1mM HEPES, 12% sucrose and resuspended to $10^{10}{\sim}10^{11}cfu/ml$, then stored at -$70^{\circ}C$. Transformation efficiency of B. subtilis BR151 was $1.03{\times}10^7cfu/{\mu}g$ with cells washed with 10% glycerol and electroporated by 15KV/cm, 0.7msec pulse with pUB110. Transformation efficiency of S. aureus RN4220 was $4{\times}10^6cfu/{\mu}g$ with cells washed with 1mM HEPES + 10% glycerol and electroporated by 15KV/cm, 2.5msec pulse. The number of total transformants was 1000 when B. subtilis BRI51 was transformed with 100ng pUB110 DNA and the number of total transformants was 9000 when S. aureus RN4220 was transformed with 10ng pUB110 DNA

• KSBB Journal
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• 제9권2호
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• pp.115-121
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• 1994

240ml의 시료를 정제할 수 있는 30channel의 preparative-scale 자유유동전기이동 분리장치를 제작한 후 렌즈콩으로부터 lentil lectin(LcH)을 전기 집속법으로 분리하였다. 분리된 각 분획을 PAGIEF젤에서 silver staining했을 때 불순물이 전혀 검출되지 않을 정도의 고순도 lectin을 얻을 수 있었다. 이 때 ampholyte로서 HEPES(50mM) -Tris(50mM) -urea(3M) 등을 사용하였으며 50mM Histidine(pI 7.65)인 경우 가장 분리도가 가장 좋았다. LcH는 보통의 조건하에서 LcH-A와 LcH-B의 두가지 순수한 형태로만 나타났으며 따라서 이 장치를 사용하여 다단 분리 정제를 할경우 두 성분의 완전한 분리도 가능함을 보여 주었다.

• 한국토양환경학회지
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• 제5권2호
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• pp.87-97
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• 2000

환원상태의 0가 금속 철($Fe^0$)에 의한 TNT의 환원반응율에 환경조건이 미치는 영향을 정량하기 위하여 회분식 반응조내의 초기 용존산소, HEPES완충액 및 전자전달체 Vitamin $B_{12}$의 농도를 변화하며 비반응상수를 측정하였다. 0가 금속 철에 의한 TNT의 환원은 모든 경우에서 유사 1차반응으로 측정되었으며, TNT의 환원시, 용액내 초기 용존산소의 농도가 높을수록 반응속도는 감소하였다. 그러나, 비반응상수는 초기용존산소의 농도에 선형적으로 비례하지 않았으며 용존산소 농도가 높아질수록 반응속도의 감소율은 감소하였다. HEPES 완충액을 사용하여 TNT환원의 비반응상수를 측정한 결과, HEPES 2.0mM용액을 사용하여 중성 부근의 pH를 유지하였을 경우 비반응속도가 5.8배 이상 증가하여 반응율은 수용액의 pH에 영향을 받는 것으로 확인되었다. 반응 속도의 증진을 위하여 전자 전달체(electron carrier or mediator) vitamin $B_{12}$를 첨가한 실험결과, vitamin $B_{12}$의 농도 8.0 $mu\textrm{g}$/L 에서 14.6배의 비반응상수의 증가가 관측되었다. 따라서, 0가 금속 철로 충진된 반응벽체를 사용하여 유기물을 제거하는 공법에서 Vitamin $B_{12}$의 첨가는 매우 유용한 처리효율 증진방안이 될 수 있다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제23권4호
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• pp.269-274
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• 2008

The purpose of this study was to determine the effects of Taxol pre-treatment to in vitro matured bovine oocytes, and sucrose and trehalose added to vitrification solution on spindle morphology and embryonic development following cryopreservation. Bovine oocytes were collected from ovaries and matured in tissue culture medium 199 (TCM 199) supplemented with 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 0.05ng/ml epidermal growth factor, 0.01 IU/ml luteinizing hormone and $1{\mu}g/ml$ estradiol for 22h in $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$, TCM 199-HEPES containing 20% FBS was used as basic medium (BM) to prepare vitrification solution. Oocytes were pre-treated with $1\;{\mu}M$ Taxol in maturation medium for 15 min prior to vitrification. Oocytes were exposed to 1.6 M ethylene glycol (EG) and 1.3M dimethyl sulfoxide (DMSO) in BM and then were exposed to 3.2 M EG, 2.6 M DMSO and 0.5 M sucrose in BM or 3.2 M EG, 2.6 M DMSO and 0.5 M trehalose in BM. Oocytes with cumulus cells and oocytes without cumulus cells were considered as control 1 and control 2, respectively and held in TCM 199-HEPES at $39^{\circ}C$. Oocytes were frozen using modified solid surface vitrification and were stored in cryotubes in liquid nitrogen for more than 1 week. Frozen oocytes were thawed in TCM 199-HEPES containing 0.5 M, 0.25 M and 0.1 M sucrose in BM for 2 min, respectively or 0.5 M, 0.25 M and 0.1 M trehalose in BM for 2 min, respectively. Immunoflurorescence staining of oocytes was performed to assess spindle morphology and chromosome configuration of oocytes. The rates of cleavage and blastocyst were examined following in vitro fertilization. Normal spindle morphology rate of oocytes pre-treated with Taxol prior to vitrification was not higher than that of other vitrified groups. Taxol pre-treatment did not increase cleavage and blastocyst formation rates, although control groups showed significantly higher rates (p<0.05). Percentages of normal spindle and embryonic development were not significantly different among vitrified groups regardless of type of sugar. In conclusion, Taxol pre-treatment of oocytes before cryopreservation did not reduce the damage induced by vitrification and subsequently did not improve embryonic development following vitrification. Trehalose may be used as an alternative non-permeating cryoprotectant in vitrification solution.

• 한국수정란이식학회지
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• 제23권4호
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• pp.263-267
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• 2008

The purpose of this study was to determine toxic effect of sucrose and trehalose prior to cryopreservation on nuclear maturation and embryonic development in immature bovine oocytes. All cryoprotectant was prepared in tissue culture medium 199-HEPES (TCM 199-HEPES) with 10% fetal bovine serum (FBS). Immature oocytes were exposed to 1.2M ethylene glycol (EG) and 0.1M sucrose or 1.2M EG and 0.1M trehalose for 3 min and then were exposed to 3.2 M EG and 0.25 M sucrose or 3.2 M EG and 0.25 M trehalose for 1 min. Oocytes treated with cryoprotectants were exposed to 0.25 M sucrose or 0.25 M trehalose for 5 min and then 0.1 M sucrose or 0.1 M trehalose for 5 min. Depending on type of sugar added to cryopreservation solution, oocytes were allocated to sucrose group and trehalose group, respectively. Oocytes exposed to TCM 199-HEPES with 10% FBS were considered as control. Oocytes were cultured in TCM 199 supplemented with 10% FBS, 5 ng/ml epidermal growth factor, 0.01 IU/ml luteinizing hormone, and $1\;{\mu}g/ml$ estradiol for 24 h in $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$. Nuclear maturation was assessed by staining oocytes with 1% aceto-orcein. Oocytes were fertilized in vitro and were cultured in TCM 199 supplemented with 10% FBS, 5 mM sodium pyruvate, and antibiotics in $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$. The rates of cleavage and blastocyst, and cell number in blastocyst were assessed. Metaphase II rates were not different among experimental groups regardless of type of sugar. The cleavage rate of trehalose group (73.3%) was significantly higher (p<0.05) than those of sucrose group (62.8%) and control group (60.8%). The blastocyst rate was significantly higher in trehalose group (p<0.05). Mean cell number in blastocyst were not different among experimental groups, although cell number of blastocyst in trehalose group was significantly higher on day 7 (p<0.05). In conclusion, sucrose and trehalose were not toxic to immature bovine oocytes prior to cryopreservation. In particular, trehalose was more effective on embryonic development.