Hwang, Ok-Jin;Kim, Yu-Jeong;Sung, Nak-Sul;Ahn, Jun-Cheul;Kim, Sik-Eung;Hwang, Baik
한국약용작물학회지
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제10권4호
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pp.243-248
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2002
The effects of basal media, carbon, nitrogen, phosphate and some major macro elements on growth and shikonin production in Lithospermum erythrorhizon hairy root culture were studied. Among examined media, growth of hairy root cultured in B5 liquid medium was rapid, whereas shikonin production was high in MS liquid medium. Under B5 basal medium, sucrose concentration for optimal growth and shikonin production was 9% and 4% respectively. The growth and shikonin production on pH changes in B5 medium resulted little effect in pH 5.8 to pH 8.8 ranges, whereas growth was decreased dramatically in both above 8.8 and under 5.8. Nitrogen source and concentration effected on the growth and shikonin production. The highest growth rate was in B5 medium (50 mM $KNO_3$ and 1 mM $NaH_2PO_4)$, whereas the highest shikonin production was in the condition supplemented with 5 mM $KNO_3$ and 10 mM $NaH_2PO_4$.
본 연구는 철피석곡의 PLB 기내 대량증식 방법에 대한 기초자료를 제공함으로써 다양한 분야의 소재활용 수요를 충족시키고 아울러 멸종위기에 처해 있는 철피석곡을 보존하고 수행하였다. 종자유래의 PLB 재 증식에는 H3P4 기본배지에 NAA $0.1mg{\cdot}L^{-1}$과 kinetin $0.1mg{\cdot}L^{-1}$를 혼용한 배지가 가장 적합하였다. H3P4 기본배지 내 탄소원으로 sucrose $10g{\cdot}L^{-1}$를 첨가 했을 때 PLB의 생장이 가장 양호하였다. 재 증식된 PLB로부터 shoot 형성율은 1/4MS 또는 H1P2 배지에 sucrose를 $10g{\cdot}L^{-1}$ 첨가한 배지에서 가장 높았고 shoot의 초장도 길어졌다.
모상근의 성장 및 tropane alkaloids의 생성에 미치는 pH, 서당, 비타민의 영향을 구명하기 위하여, 독말풀(Datura stramonium var. tatula Torr.)의 잎에 Agrobacterium tumefaciens $A_4$T를 접종하여 모상근을 유도하였다. 유도된 모상근 중 성장률이 양호한 clone (DTLA9)을 선발하고, 이를 pH, 서당, 비타민을 각각 여러 농도로 처리한 SH(Schenk and Hildebrandt, 1972) 기본배지에 배양하였다. 모상근의 성장에 있어 최적 pH는 6.3이었으며, 최적 서당농도는 3.0%이었다. Tropane alkaloids의 함량에 있어 최적 PH는 6.5이었으며, 최적 서당농도는 2.8%이었다. 한편, 비타민이 제거된 SH기본배지에 ascorbic acid, D-pantothenate, nicotinic acid, pyridoxine, riboflavin. 그리고 thiamine을 각각 농도별로 첨가하여 배양한 경우에, 모상근의 성장에 있어 비타민의 최적 농도는 각각 0.1, 0.003, 0.07, 0.002, 0.025, 0.01 mM이었다. Tropane alkaloids의 함량은 0.1 mM의 ascorbic acid 단독처리구에서 대조구(vitamin-free구) 및 SH기본배지에서의 경우에 비하여 가장 높게 나타났다.
Aureobasidium pullulans에 의한 whey배지에서 플루란의 생산에 대한 연구가 수행되었다. Whey배지에서 풀루란의 발효생산에 대한 실험결과, 최종균체농도는 sucrose 기본배지에서와 동일하였으나 풀루란의 생산은 5g/$\ell$로 저조하였다. Whey배지에서 풀루란 생산을 향산시키이 위하여 lactose와 galactose 기본배지에서 적응배양을 시도하였다. 적응배양을 시도하지 않은 경우, lactose를 탄소원으로 한 배지에서 3.4g/$\ell$, galactose를 탄소원으로 한 배지에서 2.5g/$\ell$의 풀루란 생산을 보였으나 적응배양방법을 이용하여 lactose로부터 10~12g/$\ell$, galacrose 기본배지에서 lactose에 적응배양된 균은 13.5g/l의 풀루란을 생산하였고 galactose에 적응배양된 균은 18.6g/l를 생산하였다. Whey배지에 적응배양된 균을 접종한 결과 초기 pH3.0일때 풀루란 생산이 최대값을 보였다.
1) The comparative studies of the quantitative measurement of growth characteristics and utilization of substrates by Euglena gracilis var. bacilla 10616 in the light and in darkness have been carried out. Eodogenous respiration, effect of respiratory inhibitors and responses to the added substrates for the exogenous respiration are also investigated. 2) All cultures are grown in the open air under the continuous illumination of fluorescent light of 3500 lux at room termperature, the growth rate of the culture in the basal medium added 0.5% lactate is found to be the highest. The growth rate decreases successively for the cultures of 0.5% sucinate, 0.5% Na-acetate, 0.5% malate, and control. There is no growth in the basal meidum added 0.5% butyrate and 0.5% hydroquinone. The similar results are obtained for the mentioned cultures in the darkness. However, the growth rate in basal medium added 0.5% glucose and 0.5% sucrose does seem to increase in the darkness unlike the illumination. 3) The endogenous rate of respiration for the organism cultured photosynthetically is about 12.94ul 02/mg/hr, in basal medium and the respiratory quotient is about 0.84. The rate is decreased by starvations to 6.5ul 02/mg/hr, about to a half, but the respiratory quotient does net change. 4) The oxygen consomption during initial 2 hours in suspending solution ranging from pH 4.5 to pH 9.3 is highest at pH 4.5 in which the algae had grown, at pH 5.5 and at pH 6.9. 5) Endogenous respiration of the cells is strongly inhibited by 0.1M of potassium cyanide, malomic acid, sodium fluoride and iodo-acetic acid. It is also strongly inhibited by 0.01M of potassium cyanide. 6) The respiratory response to added substrates for the exogenous respiration in the organism is coincided with the rate in the basal medium added the substrate in light and in darkness, whether the cells are fed or starved. 7) According to the results of this study, there seems to be the flexibility of the interconversion between photosynthesis and chemosynthesis, heterotropic mode of metabolism, in Euglena gracilis var. bacillaris, and that this organism utilizes the lactate most. It also may be suggested that the enayme systems linked in the each steps of Embden-Myerhof-Parnas path way and TCA cycle seem to exist in this organism.
The aims of this study were, firstly, to analyze the biochemical compositions of serum and follicular fluid (FF) from prepubertal gilts after PMSG (1,000 IU) treatment. The concentrations of total proteins, lipids, cholesterol, glucose and sex hormones (progesterone, $P_4$; estradiol-$17{\beta}$, $E_2$; testosterone, T) were measured. Secondary, the effects of porcine FF (pFF) addition (40% and 100%) in IVM media and different culture conditions [Exp. 1: mBMOC-2+20% porcine serum (PS), fresh IVM medium, filtered IVMconditioned medium, or rabbit oviducts; Exp. 2: mBMOC-2+20%PS or stepwise medium replacement procedures (SMRP) cocultured with or without cumulus cells] on the in vitro development (IVD) of porcine oocytes were also examined. Results showed that no significant differences were found in total protein levels between serum and pFF from different sizes (large, >7 mm; medium, ~5-7 mm; small, <3-5 mm) of follicles (75-85 and 49-90 mg/dl; p>0.05). Total lipid concentrations remained constant in serum (395-472 mg/dl), and reduced significantly in the pFF from large follicles (287 mg/dl) at 132 h after PMSG treatment when compared to those at other time points (441-480 mg/dl). Basal cholesterol levels in serum and pFF at 12 h were similar (153-161 mg/dl), but increased at 36 h (186-197 mg/dl). Basal P4 and E2 levels in serum (0.1 ng/ml and 5.5 pg/ml) were low, but increased from 0.34 ng/ml and 12.13 pg/ml at 24 h to 0.81 ng/ml and 61.70 pg/ml at 98 h, respectively, after PMSG treatment (p<0.05). P4 levels increased linearly in pFF from large follicles during 12 through 132 h (138-1,288 ng/ml). A similar increase was also observed in $E_2$ levels (22-730 pg/ml) before 60 h post PMSG treatment, and then dropped afterwards (730-121 pg/ml). The development of the oocytes fertilized in 40% pFF-medium was greater than that in 100% pFF-medium group without gonaodtropin addition (31% vs 10%, p<0.05). However, both were lower than those in mBMOC-2+20%PS and in rabbit oviducts (p<0.05). When cocultured with cumulus cell monolayers, a greater cleavage rate was observed in the group cultured in filtered IVM-conditioned medium than the SMRP group (36% vs 18%, p<0.05). A similar phenomenon was also observed in the culture without cumulus cell monolayers (33% vs 19%, p<0.05). It is concluded that neither the fresh IVM nor filtered IVM-conditioned medium has positive effect on the IVD of oocytes. Coculture with cumulus cell monolayers and the SMRP were not beneficial to the development of IVF pig oocytes.
효모세포벽 분해효소를 생산하는 386주(株)의 미생물을 분리하여 그중 강한 1주(株)를 선발 동정(同定)하고 선정균의 효소생산조건을 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 선정한 M-10 strain은 Humicola sp.로 동정(同定) 되었다. 2. 선정균의 효소생성은 pH 6.0 $33^{\circ}C$에서 가장 양호하였다. 3. 탄소원으로서 baker's yeast 4%가 Iytic enzyme 생산에 가장좋았고 기타 laminarin과 dextrin 등이 효과적이었으며 질소원도 peptone이 다소 효과적이나 baker's yeast로서 족하였다. 4. 효소생산에 $K_2HPO_4$ 0.1%와 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.01%의 첨가가 가장 효과적이고 기타 염류의 첨가는 효과가 없었다. 5. 선정한 배지조성에서 72시간 진탕배양으로 최고에 달하였다.
진핵세포 유전자의 기초대사발현의 조절계를 밝히기 위한 일환으로, 효모의 histidine생합성계 효소의 구조유전자 HIS5를 이용하였다. HIS5 유전자는 충분한 아미노산 조건하에서는 발현이 억제되어 비교적 높은 기초발현만을 하나, 어떤 아미노산이 결핍되면 탈억제되어 높은 발현량을 보이며 탈억제는 cis의 작용인자인 promoter상의 5'-TGACTC-3' 및 trans 작용인자 GCN4와 GCD17 GCN2등이 관여한다. trans 작용인자들에 의한 HIS5 유전자의 발현량의 변화를 간단하게 측정하기 위하여, HIS5 promoter와 repressible acid phoshates(APase)의 구조유전자중 promoter를 제거한 DNA단편을 연결시켜 HIS5-PHO5 융합유전자를 이용하였다. gcn2 및 gcn4 변이주의 APase 활성은 야생주와 비교하여 3내지 4배 낮았으며, gcn2변이주와 gcn2 gcn4 이중변이주의 APase 활성은 유사하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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